Title: IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS FILAMENTOSOS EM ERVA-MATE
Author: Eduardo
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IDENTIFICAÇÃO DE FUNGOS FILAMENTOSOS EM ERVA-MATE (Ilex paraguariensis St. Hil.)

MINOTTO, Elisandra^1; BERNARDI, Eduardo^2; CALDEIRA, Marina Feijó^1; DONINI, Lorena Pastorini^2; COSTA, Elton Luiz Guimarães^1; NASCIMENTO, José Soares^1.

^1Laboratório de Micologia – Departamento de Microbiologia e Parasitologia/Instituto de Biologia/ Universidade Federal de Pelotas – Campus Universitário s/n –- CEP 96010-900
^2  Mestrando do Programa de Pós-graduação em Agronomia/ Área de concentração em Produção Vegetal. Laboratório de Micologia – Departamento de Microbiologia e Parasitologia/Instituto de Biologia/Universidade Federal de Pelotas – Campus Universitário s/n – CEP 96010-900. elisminotto@yahoo.com.br

1. INTRODUÇÃO

	A erva-mate (Ilex paraguariensis St. Hil.), espécie de origem Sul-americana, é comum na vegetação nativa de uma extensa área que abrange Brasil, Argentina e Paraguai, sendo que na região Sul do Brasil, a cultura desempenha um importante papel sócio-econômico, principalmente nas pequenas propriedades agrícolas.
	O Estado do Rio Grande de Sul é o principal consumidor de erva-mate principalmente em virtude das tradições regionais, onde o produto é utilizado em infusão com água quente para o preparo de uma bebida típica popularmente conhecida como chimarrão [4, 6]. Antes de ser consumida a erva-mate passa por processos de beneficiamento, que consiste no corte dos ramos da planta, estes passam por secagem e moagem para posterior empacotamento. O produto é acondicionado em dois tipos de pacotes: embalagens metalizadas e embalagens de papel, em tamanhos de 500 e 1000 gramas. Ainda de forma menos expressiva também é comercializada em embalagem a vácuo. 
O produto comercial da erva-mate, conforme especificado nas embalagens, apresenta duas composições básicas, sendo elas na forma moída, composta por 70% de folhas e 30% de outras partes do ramo e na forma pura-folha, composta por 100% folhas. Segundo Burgstaller [2] a erva-mate processada apresenta as seguintes composições físico-químicas, como teor de cinzas (5,07-6,60 %), fibras (14,96-19,95%), gorduras (5,57-9,10%), proteínas (8,30-13,45%), glicose (1,30-6,14%), sacarose (3,60-6,90%) e cafeína (0,97-1,79%), valores de porcentagem em base seca. 
	Por se tratar de um produto extremamente desidratado poucos são os microrganismos que podem se multiplicar neste material, mas entre os fungos aqueles que apresentam estruturas de resistência são capazes de permanecer no produto até que existam condições físicas e nutricionais para o seu desenvolvimento, destacando-se os fungos filamentosos. O tempo e as condições de armazenamento relacionadas aos tipos de embalagens podem propiciar o desenvolvimento destes microrganismos [7].
	Pelo fato da erva mate ser consumida por grande parte da população do Rio Grande do Sul, torna-se importante o conhecimento dos contaminantes fúngicos presentes neste produto, para futuramente buscar as causas desta contaminação e conseqüentemente diminuir os riscos oferecidos aos consumidores. 
	Com base nestas informações este trabalho teve como objetivo quantificar e identificar os principais fungos presentes em diferentes marcas comerciais de erva-mate, em relação à composição e as embalagens utilizadas para o empacotamento.
2. MATERIAIS E MÉTODOS

	Para a realização deste trabalho foram adquiridas 34 amostras de erva-mate de diferentes marcas comerciais, mantidas em embalagens metalizada e de papel, comercializadas no município de Pelotas, RS. As análises foram realizadas no Laboratório de Micologia.
	O meio de cultura foi preparado previamente, utilizando-se 140g de batatas descascadas e cortadas em cubos, cozidas em 1000mL de água destilada por aproximadamente 15 minutos. No decoto filtrado adicionou-se 10g de dextrose e 15g de ágar-ágar e o volume foi completado para 1000mL. 
O meio de cultura foi esterilizado em autoclave a 121ºC por 20 minutos e posteriormente o pH foi corrigido para 3,5 com a adição de ácido tartárico a 10%, sendo em seguida vertido em placas de Petri previamente esterilizadas. Amostras de 25g do produto foram homogeneizadas em 225mL de água peptonada (0,1%) e a partir desta realizaram-se diluições decimais até 1:10000. De cada diluição foram semeados em superfície com alça em “L”, alíquotas de 0,1mL, em duplicatas, em ágar-dextrose-batata acidificado (BDA) e incubados a 25ºC por 5 dias para obtenção das unidades formadoras de colônias (UFC) [8,10]. 
Para efeito de análise quantitativa foram consideradas apenas as diluições que apresentaram a formação de colônias entre 15 e 150 unidades, sendo posteriormente identificados os principais gêneros fúngicos presentes, através da elaboração de lâminas descartáveis confeccionadas com fita adesiva. Para isto, pressionou-se um pedaço da fita adesiva contra a cultura do fungo, colando-a sobre uma lâmina contendo uma gota do corante de azul de Amann. A visualização das estruturas fúngicas foi realizada em microscópio ótico para identificação, conforme Funder [5]; Ellis [3]; Barnett & Hunter [1]; Singh et al. [9]. 

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Apenas 14 (41,18%) das amostras de erva-mate analisadas apresentaram contagens de fungos filamentosos entre o padrão estipulado (15-150 UFC) para enumeração destes microrganismos, sendo que outras três amostras (8,82%) não apresentaram contaminação (Tabela 1). Os fungos encontrados em ordem decrescente foram: 24 colônias de Aspergillus (70,59%), 19 colônias de Penicillium (55,88%), 5 colônias de Cladosporium (14,71%), 3 colônias de Paecilomyces, Rhizopus e Syncephalastrum (8,82%) e  1 colônia de Monilia (2,94%) das amostras de erva-mate analisadas.	
	Tabela 1: Unidades formadoras de colônias (UFC) e gêneros fúngicos identificados em amostras de erva-mate comercializadas no município de Pelotas, RS, 2004.
Amostra | Tipo de embalagem | Composição | UFC | Gêneros identificados
01 | metalizada | moída | 1,1x10^2 | Aspergillus, Penicillium
02 | metalizada | moída | 1,6 x10^2 | Aspergillus, Penicillium, Cladosporium
03 | metalizada | moída | <15 | Aspergillus
04 | metalizada | moída | <15 | Penicillium
05 | metalizada | moída | <15 | Cladosporium
06 | metalizada | moída | <15 | Aspergillus
07 | metalizada | moída | 2,3 x10^2 | Aspergillus, Penicillium, Monilia
08 | metalizada | moída | <15 | Aspergillus, Penicillium, Paecilomyces
09 | metalizada | moída | <15 | -
10 | metalizada | moída | <15 | Aspergillus
11 | metalizada | pura folha | 1,45x10^3 | Aspergillus, Rhizopus
12 | metalizada | pura folha | 2,6 x10^2 | Aspergillus, Penicillium, Cladosporium
13 | metalizada | pura folha | 8,4 x10^2 | Aspergillus, Syncephalastrum, Paecilomyces
14 | papel | moída | <15 | Aspergillus, Penicillium
15 | papel | moída | 1,05 x10^3 | Aspergillus
16 | papel | moída | 3,2 x10^2 | Penicillium
17 | papel | moída | <15 | Aspergillus
18 | papel | moída | <15 | -
19 | papel | moída | <15 | Aspergillus, Penicillium, Cladosporium, Rhizopus
20 | papel | moída | <15 | -
21 | papel | moída | <15 | Penicillium
22 | papel | moída | <15 | Aspergillus, Penicillium
23 | papel | moída | <15 | Aspergillus, Cladosporium, Syncephalastrum
24 | papel | moída | 2,6 x10^2 | Penicillium
25 | papel | moída | 3,3 x10^2 | Aspergillus, Penicillium, Rhizopus
26 | papel | moída | <15 | Penicillium
27 | papel | moída | 1,7 x10^2 | Penicillium
28 | papel | moída | <15 | Aspergillus, Penicillium
29 | papel | moída | <15 | Aspergillus, Penicillium, Paecilomyces
30 | papel | moída | <15 | Aspergillus, Penicillium
31 | papel | pura folha | 1,6 x10^2 | Aspergillus, Penicillium
32 | papel | pura folha | 9,9 x10^2 | Aspergillus
33 | papel | pura folha | 1,7 x10^2 | Aspergillus
34 | papel | pura folha | <15 | Aspergillus, Syncephalastrum
As amostras de erva-mate em embalagens metalizadas apresentaram contaminação por fungos filamentosos superiores quando relacionadas às embalagens de papel. Supõe-se que a diferença no grau de contaminação entre estas duas embalagens seja favorecida em função da aeração e manutenção da umidade. As embalagens metalizadas funcionam como uma câmara de crescimento favorável ao desenvolvimento de fungos, pela maior retenção da umidade mínima necessária ao fungo, especialmente quando as embalagens apresentarem algum furo.
Com relação a composição do produto analisado, onde se verifica que as amostras compostas por pura-folha apresentaram o número de fungos filamentosos superiores as amostras de erva-mate moída (Figura 1). 

Figura 1: Unidades formadoras de colônia (UFC) de fungos filamentosos em erva-mate nas composições pura-folha e moída, comercializadas no município de Pelotas, RS, 2004.
Provavelmente isto pode ser atribuído ao fato destes gêneros fúngicos encontrados apresentarem ampla distribuição no ambiente, sendo provenientes do cultivo ou durante a manipulação. 
As unidades formadoras de colônias encontradas foram baixas, devido principalmente ao fato do produto ser muito desidratado. Entretanto a erva-mate com maior porcentagem de fungos pode se deteriorar mais rapidamente se as condições de armazenamento forem propícias ao desenvolvimento destes no produto, a exemplo das condições encontradas nas embalagens metalizadas que apresentaram maior concentração de fungos. 

3.CONCLUSÕES

1- Os fungos Aspergillus e Penicillium são os contaminantes que predominam na erva-mate comercializada na região de Pelotas, RS.
2- A percentagem de contaminação por fungos é maior na erva-mate pura-folha do que na moída.
3- Atenção mais rigorosa no consumo de erva-mate, em relação a presença de fungos, deverão ser tomadas naquelas composta por pura-folha especialmente quando contidas em embalagens metalizadas.

4. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] BARNETT, H.L. & HUNTER, B.B. Illustrated genera of imperfect fungi. Minnesota: Burgess Publishing Company, 1972. 241p.
[2] BURGSTALLER, J.A. 700 Hierbas Medicinales, Edicial SA, Buenos Aires, 1994 – http://reality.sgi.com/omar/personal/argentina/mate_refs.html.
[3] ELLIS, M.B. Dematiaceous hyphomycetes. England: Commonwealth Mycological Institute Kew, 1971. 608p. 
[4] ESMELINDRO, M.C.; TONIAZZO, G.; WACZUK, A.; DARIVA, C.; OLIVEIRA, D. Caracterização físico-química da erva-mate: influência das etapas do processamento industrial. Ciênc. Tecnol. Aliment. v.22, n.2, p.193-204, 2002.
[5] FUNDER, S. Practical mycology: manual for identification of fungi. New York, USA. 1968. 146p.
[6] HEINRICHS, R. & MALAVOLTA, E. Composição mineral do produto comercial da erva-mate (Ilex paraguariensis St. Hil.). Ciência Rural, Santa Maria, v.31, n.5, p.781-785, 2001.
[7] RUPOLLO, G.; GUTKOSKI, L.C.; MARINI, L.J.; ELIAS, M.C. Sistemas de armazenamentos hermético e convencional na conservabilidade de grãos de aveia. Ciência Rural, Santa Maria, v.34, n.6, p.1715-1722, nov-dez, 2004.
[8] SILVA, N.; JUNQUEIRA, V. C. A.; SILVEIRA, N. F. A. Manual de métodos de análise microbiológica de alimentos. São Paulo: Livraria Varela, 295 p., 1997.
[9] SINGH, K.; FRISVAD, J. C.; THRANE, U.; MATHUR, S. B. An illustrated manual an identification of some seed-borne Aspergilli, Fusaria, Penicillia and their mycotoxins. Hellerup, Denmark, 1991.133p.
[10] SIQUEIRA, R. S. Manual de microbiologia de alimentos. Rio de Janeiro: EMBRAPA Centro Nacional de Pesquisa Agroindustrial de Alimentos, 1995.