AVALIAÇÃO SOROLÓGIA E ISOLAMENTO DE LEPTOSPIRAS EM OVINOS DE ABATEDOURO DO MUNICÍPIO DE PELOTAS, RS.

BOURSCHEIDT, Débora1; CAMPELLO, Anelize de Oliveira2; DIAS, Denise Gamio3; BERMUDEZ, Viviane Lorenzato4; SEYFFERT, Núbia5; RECUERO, Ana Lúcia Coelho3; OYARZABAL, Marta Elaine Bastos4; BROD, Claudiomar Soares.

1Bolsista De Iniciação Científica – FAPERGS- FV/UFPel 
2Acadêmica -Centro de Controle de Zoonoses – DMVP – FV/UFPel
3Mestranda do Programa de Pós- Graduação em Parasitologia/UFPeL 
4Centro de Controle de Zoonoses – DMVP – FV/UFPel
5Mestranda do Programa de Pós- Graduação em Biotecnologia/UFPeL
Campus Universitário s/n – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900
debbovet@yahoo.com.br

INTRODUÇÃO

A leptospirose ovina vem sendo amplamente discutida e pesquisada em todo o mundo, principalmente no RS devido a sua importância por causar aborto, retorno ao cio e até a morte. No Rio Grande do Sul(RS), onde a criação das espécies bovina e ovina é comum, nos mesmos pastos e aguadas, a infecção por Leptospira spp está provavelmente estabelecida nos rebanhos[3,7].
A eliminação da leptospira ocorre principalmente através da urina dos portadores, durante períodos de tempo que podem variar de poucas semanas a vários meses, entre os animais domésticos e por toda vida no caso dos roedores[6].
A leptospirose tem distribuição geográfica mundial, no entanto, a sua ocorrência é favorecida pelas condições ambientais, como períodos de elevada temperatura, altos índices pluviométricos o que acarreta em longos períodos de umidade favorecendo a sobrevivência da bactéria por longos períodos no ambiente e o aparecimento de surtos epidêmicos de caráter sazonal [8].
O objetivo do trabalho foi de isolar leptospiras dos rins de ovinos abatidos em frigoríficos do Município de Pelotas e verificar a presença de espiroqueta no sangue e identificar os sorovares mais prevalentes na espécie.
MATERIAIS E MÉTODOS
O presente trabalho foi realizado no laboratório Centro de Controle de Zoonoses da Faculdade de Medicina Veterinária da Universidade Federal de Pelotas (CCZ/UFPeL). As 200 amostras sangüíneas e as 50 de rins foram coletadas em um Frígorífico de Pelotas, no período de Março de 2004 à Fevereiro de 2005, sendo coletadas 20 amostras de sangue e 5 de rins a cada mês. Os ovinos eram oriundos de 5 cidades(Piratini, Herval, Jaguarão, Pedras Altas e Pinheiro Machado) da região sul do RS, do Projeto “Cordeiro Herval Premium”, os quais apresentavam-se clinicamente sadios.
As coletas eram realizadas no frigorífico, durante o abate e após encaminhadas para o CCZ/UFPeL, onde eram processadas. As amostras de sangue foram centrifugadas a 3000rpm por 5 minutos, colocado o soro em “ependorff” e analisando-se posteriormente uma gota de 3 µL entre lâmina e lamínula, com objetiva de 40 x para a pesquisa direta de espiroqueta em microscopia de campo escuro (DFM). Foi considerada positiva, a amostra que apresentou uma ou mais espiroquetas com morfologia e movimentos característicos. Em todas as amostras sorológicas executou-se o teste de soroaglutinação microscópica com antígenos vivos (MAT), segundo metodologia recomendada[4].
Através da MAT, foi efetuada a triagem na diluição de 1:100 e, quando houve aglutinação, os soros foram titulados. Na prova de MAT usou-se uma coleção de antígenos que incluíam sessenta sorovares leptospirais: 1 leptonema (illini), 40 sorovares patogênicos (australis, bratislava, autumnalis, butembo, rachmati, castellonis, ballum, bataviae, swart, canicola, celledoni, whitcomb, cynopteri, grippothyphosa, grippo. Duyster, grippo. Mandemakers, hebdomadis, copenhageni, icterohaemorrhagiae RGA, ictero. Kantorowic, ictero. verdum, copenhageni Wijnberg, lai, copenhageni LI 130, javanica, poi, panama, pomona, proechimys, pirogenes, serjoe, hardjo hardjoprajitno, wolffi, saxkoebing, hardjo Lely, shermani, tarassovi, djasiman, sentot, mini, hurstbridge e Louisiana), 10 sorovares patogênicos isolados da região, de diferentes espécies animais e do homem (Isoton, Hook, Kito, Skol, Cascata, Caco, Bonito, Kade, Ike, Tande e Pic) e 8 sorovares saprófitas (andamana, andamana Bovedo, Buenos Aires, patoc 1, rufino, semaranga, Garcia e jequitaia)
Para o isolamento de leptospira a técnica utilizada para o processamento dos rins foi a da Pipeta Pasteur, inoculando-se os fragmentos em meio semi-sólido de Fletcher (Difco Laboratories) e em meio líquido EMJH (Difco Laboratories), sendo os tubos incubados em estufa e revisados semanalmente.

RESULTADOS E DISCUSSÕES

Do total das 200 amostras de soro, 104 (52%) foram positivas na DFM. No resultado da MAT, 156 amostras (76%) reagiram positivamente para sorovares patogênicos e saprófitas. Já em um outro estudo realizado no RS em 1999[7] somente 34,26% das amostras foram positivas na MAT, tendo como sorovar mais prevalente uma cepa isolada de campo pertencente ao sorogrupo sejroe, sorovar hardjo amostra Norma com 28,4% das reações, seguida pelos sorovares sentot, hadjoprajitno, fortbragg entre outros.
Em nosso trabalho encontramos 42 sorovares reagentes, sendo que o sorovar patogênico mais prevalente foi o caco com 9% (isolado local de ovino) o sorovar illini com 12,2% (leptonema), seguidos por andamana bovedo 5,8% (saprófita), bonito 4,5% (isolado humano), picanha 4,5% (isolado bovino), patoc 4,5% (saprófita), cascata 4,5% (isolado humano),  kito 3,8% (isolado canino) e ike 3,8% (isolado humano) seguido de outros sorovares com menores freqüências. Observa-se que a maioria dos mais prevalentes são isolados locais ou saprófitas, indicando reações cruzadas pois não foi possível identificar o sorovar responsável pela infecção. Em um estudo realizado em 2001[5] utilizando uma bateria de diagnóstico com 24 sorovares (22 patogênicos e 2 saprófitas) foi encontrado como soroprevalentes para ovinos os sorovares icterohaemorragiae (40%), butembo, castellonis e hebdomadis (20%), discordando do nosso trabalho onde a maior prevalência para um sorovar isolado local e um sorovar saprófita.
O título mais alto encontrado no nosso trabalho foi 800 para um isolado local (cascata), seguido de títulos de 400 (para sete sorovares, dos quais, cinco são isolados locais), títulos de 200 (para quatorze sorovares, dos quais, sete são isolados locais).
Não se obteve sucesso no isolamento de Leptospira spp, assim como no estudo realizado no Mato Grosso do Sul[6].Diferentemente do trabalho realizado na Paraíba[1] que trabalhando com 160 amostras de rins ovinos, isolaram quatro sorovares não identificados. Em outro estudo realizado no RS[2] conseguiu-se um isolado apartir de rins ovinos, o qual está na bateria de antígenos desse estudo, sendo o sorovar patogênico mais prevalente.

CONCLUSÃO

No presente trabalho, até o momento não obtivemos sucesso no isolamento de Leptospira spp a partir de rins ovinos.Vários sorovares foram detectados, sendo que os mais prevalentes são de isolados locais ou saprófitas indicando a necessidade de mais isolados locais.

REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1]AZEVEDO, SS de et al. Isolation of Leptospira spp. Fromk Kidneys of Sheep at Slaughter. Scientific Comunication.Arquivo do Instituto Biologia, v.71, n.3, p.383-385, 2004.
[2] BOURSCHEIDT., et al. :Avaliação sorológica e isolamento de leptospira em ovinos de abatedouros da região sul do RS.In: Anais... XXII Congresso Brasileiro de Microbiologia, Florianópolis, 2003, p.228.
[3] CICERONI, L. et al. Prevalence of antibodies to Leptospira serovars in sheep and goats in Alto Adige-South Tyrol. Journal Veterinary Medicine, v.47, n.5, p.217-223, 2000. 
[4] FAINE, S. Guidelines for the control of leptospiroses.World Health  Genebra: 1982. 171 p. 
[5] FAVERO, ACM; PINHEIRO, SR; VASCONCELLOS, S et al. Sorovares de leptospiras predominantes em exames sorológicos de bubalinos, ovinos, caprinos, eqüinos, suínos e cães de diversos estados brasileiros. Ciência Rural, v.32, n.4, p.613-619, 2002.
[6]GIRIO, RJS; PEREIRA, FLG, MARCHIORI FILHO, M et al. Pesquisa de anticorpos contra Leptospira spp. em animais silvestres e em estado feral da região de Nhecolândia, Mato Grosso do Sul, Brasil: utilização da técnica de imuno-histoquímica para detecção do agente. Ciência Rural, v.34, n.1, p.165-169, 2004.
[7]HERRMANN, GP; LAGE, AP; MOREIRA, EC ; et al. Soroprevalência de aglutininas anti-Leptospira spp. em ovinos nas Mesorregiões Sudeste e Sudoeste do Estado Rio Grande do Sul, Brasil. Ciência Rural, v.34, n.2, p.443-448, 2004.
[8]VIEGAS, SARA; CALDAS, EM; OLIVEIRA, EM de D.Aglutininas anti- leptospira em hemosoro de animais domésticos de diferentes espécies, no Estado da Bahia, 1997/1999.Revista Brasileira Saúde Produção Animal, An. 1:1-6, 2001