Title: CARACTERIZAÇÃO MORFOLÓGICAS DE PORTA-ENXERTOS DE PESSEGUEIRO NAS CONDIÇÕES DO CENTRO AGROPECUÁRIO DA PALMA
Author: Fernando Borges Affonso

CARACTERIZAÇÃO GENÉTICA DE PORTA-ENXERTOS DE PESSEGUEIRO PARA USO EM PROGRAMAS DE MELHORAMENTO GENÉTICO

AFFONSO, Luana Borges^1; BIANCHI, Valmor João^1; 
CAPPELLARO, Thaís Helena^1; FACHINELLO, José Carlos^1

^1Laboratório de Caracterização Molecular de Plantas Frutíferas – DFT – FAEM/UFPel
Campus Universitário, Caixa Postal 354, CEP 96010-900.  luanaffonso@yahoo.com.br
 
1.	INTRODUÇÃO

O uso de porta-enxertos em fruticultura permite superar problemas culturais (resistência a pragas e doenças, redução do vigor, etc) e de adaptação das plantas a condições edafoclimáticas adversas (Clima e solo). Devido a importância socioeconômica do cultivo de frutíferas de caroço na região Sul do Brasil, desde 1998, o setor de fruticultura da FAEM/UFPEL tem introduzido genótipos de porta-enxertos de Prunus spp., das mais variadas regiões do mundo, para testes nas condições brasileiras e uso no melhoramento genético [3]. 
Para que os acessos presentes em bancos de germoplasmas possam ser utilizados na constituição de novas cultivares com caracteres desejados, o primeiro passo é conhecer as características expressas pelo genótipo. Para isso, a caracterização genética deve ser feita através da avaliação completa dos dados morfofenológicos, pomológicos e agronômicos, sendo essencial para a escolha dos melhores acessos, na diferenciação inequívoca dos mesmos, além de ser fundamental para programas de certificação e conservação de germoplasma.
No caso da cultura do pessegueiro, devido a baixa variabilidade entre muitos genótipos, a identificação através de características morfofenológicas pode deixar dúvidas sobre a verdadeira identidade dos acessos, devido as semelhanças de caracteres. Sendo assim, além dos dados fenotípicos, a análise do DNA das plantas pode ser utilizada para solucionar tais problemas, constituindo-se os marcadores moleculares uma ferramenta de grande potencial para dar garantias de fidelidade genética em qualquer momento da vida da planta [1, 2, 4]
A caracterização de plantas baseada no fenótipo é complexa e onerosa (em termos de tempo e custo) [6], entretanto, a identificação varietal pela análise do DNA não é um método substitutivo da avaliação morfofenológica, pomológica e agronômica, mas complementar no controle da autenticidade de genótipos, na confirmação da descendência de híbridos, e para resolver casos de sinonímia e homonímia [6, 9].  
O presente trabalho objetivou a caracterizar parcialmente porta-enxertos de Prunus spp., através de dados morfofenológicos e moleculares, a fim de estabelecer um padrão de identidade dos genótipos avaliados para uso destes em programas de melhoramento genético.

2. MATERIAL E MÉTODOS

Os genótipos avaliados no presente trabalho foram porta-enxetos de Prunus ssp. das cultivares Aldrighi, Capdeboscq, Flordaguard, Nemaguard, Tsukuba, Okinawa-G1 e Okinawa-G7, cultivados no Banco Ativo de Germoplasma (BAG), localizado no Centro Agropecuário da Palma-CAP (UFPel). Os dados das avaliações apresentados neste trabalho referem-se aqueles registrados durante os ciclos produtivos de 2003/2004 à 2005/2006.
Os dados de época de floração apresentados na Tabela 1 são correspondentes ao ciclo 2005/2006, exceto para a cultivar Nemaguard que tem alta exigência em frio e período de floração tardio. Para esta cultivar o período de floração é do ciclo 2004/2005 que foi da 3^a semana de setembro até a 2^a semana de outubro.
Neste trabalho são apresentados dados de alguns caracteres morfofenológicos que possuem importância para programas de melhoramento e estão correlacionadas com aspectos produtivos e de manejo da cultura, como: data de início e plena floração, data de início e término da colheita dos frutos, massa dos frutos e dos caroços, forma dos frutos e caroço e aderência da polpa ao caroço. 
As diferentes características foram registradas ao longo de todo o ciclo da cultura, na medida em que as mesmas eram expressas. No caso dos frutos, ao atingirem a maturação, foram colhidos, avaliados biometricamente, e após procedeu-se a despolpa para posterior coleta dos dados relativos aos caroços.
Analisou-se cinco plantas de cada genótipo, das quais colheu-se 50 frutos cada para as referidas avaliações.
A análise molecular foi realizada usando a técnica RAPD - Random Amplified Polymorphic DNA [10]. O DNA foi extraído de três discos foliares, conforme protocolo descrito por Mulcahy et al. [8]; quantificado em minigel de agarose 0,8% e diluído para 15 ng mL^-1. As reações de PCR foram realizadas usando 15 oligonucleotídeos iniciadores ou primers decâmeros e as amplificações conduzidas em termociclador MJ PTC-100, utilizando o perfil térmico descrito por Koller et al. [7].

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

A análise molecular com a técnica RAPD só não permitiu distinguir os dois acessos de Okinawa (Figura 1), possivelmente pelo reduzido número de primers utilizados, entretanto, os mesmos podem ser facilmente identificados pela época de floração e maturação dos frutos. Para as demais cultivares, foi possível obter marcadores suficientes para uma fácil discriminação dos acessos através da técnica de RAPD (Figura 1).
Em espécies frutíferas de clima temperado existe correlação entre a época de floração e a exigência em frio invernal para a superação da dormência. Com base nos dados de floração (Tabela 1), verifica-se que os materiais analisados têm uma necessidade em frio bastante variada, pois o período de floração foi desde meados de maio (Okinawa-G7) até o início de mês de outubro (Nemaguard).
Na região Sul do Brasil, Capdeboscq e Aldrighi são cultivares produtivas, bem adaptados a condições climáticas desta região, e tem sido por muitos anos amplamente utilizados como porta-enxertos na produção de mudas de Prunus spp.[5], entretanto, possuem a polpa aderente ao caroço (Tabela 1), dificultando a limpeza dos mesmos, e, além disso, são susceptíveis a fitonematóides.
Dos demais genótipos avaliados, Okinawa-G1 e G7, Tsukuba e Flordaguard possuem grande potencial para utilização como porta-enxertos para a cultura do pessegueiro, pois têm se mostrado bem adaptados às condições climáticas da região Sul do Brasil, com floração normal, boa produção de frutos e despolpa é facilitada, pois a polpa não é aderente ao caroço (Tabela 1). Além disso, são genótipos que possuem genes que conferem resistência a nematóides causadores de galhas das raízes (Meloidogyne spp.) [5].

--------- Primer UBC 412 ------------ | ----------- Primer OP AC07 ------------ | --OPA01--    -OPAC19--
M      1      3      4      5     6      7 | M     1       2     3     4      5     6      7 | 1     2              2      1
Figura 1. Perfil eletroforético obtido com marcadores tipo RAPD nas cultivares de pessegueiro 1-Capdeboscq, 2-Aldrighi, 3-Okinawa-G1, 4-Okinawa-G-7, 5-Tsukuba, 6-Flordaguard e 7-Nemaguard. Marcador de Peso Molecular 100pb (M). FAEM – UFPel.

Tabela 1. Características morfofenológicas registradas durante os ciclos 2004/2005 e 2005/2006 em porta-enxertos de Prunus spp. cultivados no Centro Agropecuário da Palma, UFPel.

Porta-enxerto | Dados fenológicos | Características dos frutos | Características do caroço
| Floração | Maturação | MFMU | Forma | MFMU | Forma | AP
| Início | Plena | Início | Final | (g) | | (g) | |
Algrighi | 04/08 | 20/08 | 29/12 | 10/01 | 54,97 | Cônica | 3,88 | Oval | Aderente
Capdeboscq | 25/06 | 15/07 | 15/12 | 12/01 | 48,00 | Cônica | 4,13 | Oval elíptica | Aderente
Flordaguard | 28/06 | 07/07 | 15/12 | 24/12 | 49,93 | Cônica | 2,95 | Oval | Livre
Nemaguard | 15/09 | 10/10 | 26/01 | 10/02 | 40,59 | Redondo ovalado | 3,24 | Oval elíptica | Aderente
Okinawa-G1 | 21/07 | 19/08 | 22/12 | 28/12 | 44,80 | Oblonga | 2,87 | Oval elíptica | Livre
Okinawa-G7 | 12/05 | 01/06 | 05/11 | 25/11 | 40,23 | Oblonga | 2,24 | Oval | Livre
Tsukuba | 16/05 | 17/07 | 15/12 | 22/12 | 33,50 | Cônica | 2,40 | Oval | Livre
Obs.: MFMU – massa fresca média por unidade; AP – aderência da polpa ao caroço.

Verificou-se que Okinawa-G7 apresenta características mofofenológicas diferentes de Okinawa-G1, principalmente no que se refere a precocidade da floração e maturação dos frutos. Do ponto de vista prático, em locais com baixa ocorrência de geadas, Okinawa-G7 parece ser bastante promissor na produção de sementes para obtenção de porta-enxertos franco, porém, a sua produção pode ser completamente comprometida em locais com alta incidência de geadas, principalmente na primavera, uma vez que tem um período de floração e brotação muito precoce em relação aos demais genótipos avaliados.
Devido a exigência em frio, a cv. Nemaguard tem demonstrado floração e brotação irregular, conseqüentemente, pequena produção de frutos no referido local de cultivo. Da mesma forma que Aldrighi e Capdeboscq, os frutos da cv. Nemaguard tem polpa aderente ao caroço (Tabela 1), o que aumenta o custo para utilização destes genótipos na produção de porta-enxertos francos. 
Aldrighi, Flordaguard e Capdeboscq apresentaram a maior massa fresca de fruto. Exceto Flordaguard que foi selecionado especificamente como porta-enxerto, os resultados obtidos para esta variável já eram esperados paras as outras duas cultivares, uma vez que os seus frutos são utilizados na fabricação de doces pelas indústrias conserveiras, também apresentando maior massa fresca dos caroços.

4. CONCLUSÃO

A melhor estratégia para a caracterização genética de acessos de porta-enxertos de pessegueiro a serem utilizados em programas de melhoramento é a combinação dos dados de avaliação morfofenológica e molecular.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
	
[1] BIANCHI, V. J. Caracterização molecular de cultivares e porta-enxertos Prunus spp. com RAPD, SSR e AFLP. Pelotas, 2002. 49 p. Tese (Doutorado em Fruticultura de Clima Temperado) Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal de Pelotas, 2002.
[2] BIANCHI, V. J., et al. I marcatori AFLP E SSR, risolutivi nella identificazione genetica delle varietà di susino. Frutticoltura, 2002, 4, p. 83-87.
[3] BIANCHI, V. J.; MENEZES, G. G.; FACHINELLO, J. C. Obtenção de novos porta-enxertos para pessegueiro resistentes a nematóides: fase de implementação do projeto. In: Congresso de Inciação Científica, 12, Encontro da Pós-Graduação, 5, 2003, Pelotas. Anais..., Pelotas, 2003, p. 313.
[4] BIANCHI, V. J.; FACHINELLO, J. C.; SANSAVINI, S. Microsatellite markers for identification of Prunus spp. rootstocks. Scientia Agricola, 2004, 61, 3, p. 303-306.
[5] FACHINELLO, J. C.; BIANCHI, V. J. Porta-enxertos para frutas de caroço: banco ativo de germoplasma (BAG) e atividades de pesquisa na UFPel. Simpósio Brasileiro de Recursos Genéticos, 2005, Pelotas. Resumos e Palestras, Embrapa Clima Temperado, 2005, p. 103-107.
[6] FILIPPETTI, I.; INTRIERI, C.; SILVESTRONI, O. Individuazione di omonimie e di sinonimie in alcune cultivar di Vitis vinifera attraverso metodi ampelografici a analisi del DNA a mezzo di microsatelliti, Frutticoltura, 1999., 7-8, p. 79-84.
[7] KOLLER, B.; et al. Identification of apple cultivars using RAPD markers. Theoretical and Applied Genetics, 1993, 85, p. 901-904.
[8] MULCAHY, D. L.; et al. The use of random amplified polymorphic DNAs to fingerprint apple genotypes. Scientia Horticulturae, 1993, 54, p. 89-96.
[9] PANCALDI, M.; VINATZER, B.; SANSAVINI, S. Utilità delle analisi molecolari per risolvere le sinonimie nel susino. Frutticoltura, 2000, 7-8, p. 67-72.
[10] WILLIAMS, J. G.; et al. DNA polymorphisms amplified by primers are useful as genetic markers. Nucleic Acids Research, 1990, 18, 22, p. 6531-6535.