AVALIAÇÃO DA TRANSMISSIBILIDADE DE Colletotrichum lindemuthianum ASSOCIADO ÀS SEMENTES DE FEIJÃO MICROBIOLIZADAS POR BACTÉRIAS BIOCONTROLADORAS DE Xanthomonas axonopodis PV. phaseoli

CORRÊA, Bianca Obes1; MOURA, Andréa Bittencourt2; SCHÄFER, Jaqueline Tavares3; LUDWIG, Juliane4.

Universidade Federal de Pelotas-FAEM. CP. 354-96010-900
1Mestrando Bolsista CAPES, 2 Departamento de Fitossanidade, 3Agronomia-FAEM4 Doutorando. Bolsista CNPq  bia.obes@bol.com.br

1. INTRODUÇÃO

A semente é considerada um dos meios mais eficientes de introdução e disseminação de agentes fitopatogênicos, principalmente a longas distâncias. Através dela, os patógenos podem ser introduzidos em áreas isentas de doença, bem como ter seu inóculo aumentado, em áreas já contaminadas, através do plantio consecutivo de sementes infectadas [8; 9].
Colletotrichum lindemuthianum (Sacc.& Magn.) Scrib,  agente causal da antracnose, considerada uma das doenças mais graves que atigem a cultura do feijoeiro (Phaseolus vulgaris L.) no Brasil, pode infectar a parte aérea da planta, inclusive, caules e vagens,  e, ao encontrar condições favoráveis, causar perdas de até 100% na produção [5; 6; 7].
As medidas de controle da antracnose são a utilização de sementes sadias, livres do patógeno, a aplicação de agentes químicos, rotação de culturas e utilização de variedades resistentes [10]. Além destes requisitos, incluem-se a aplicação de microorganismos visando o controle biológico, como uma ferramenta com potencial para o controle de fitopatógenos, bem como para minimizar os problemas ambientais decorrentes do uso de produtos químicos [2;5]. Adicionalmente, a aplicação de um biocontrolador às sementes pode eliminar ou impedir o desenvolvimento de patógenos transportados pelas sementes [1].
O presente estudo teve como objetivo avaliar seis isolados bacterianos biocontroladores de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli,  quanto ao efeito na transmissão de  C. lindemuthianum  para plântulas de feijoeiro, quando utilizados na microbiolização das sementes.

2. MATERIAL E MÉTODOS

Os isolados bacterianos utilizados neste experimento fazem parte da coleção do Laboratório de Bacteriologia do Departamento de Fitossanidade da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel da Universidade Federal de Pelotas-RS. 
Sementes da cultivar Líder, com 71% de infecção natural, avaliado anteriormente pelo  teste de germinação, foram microbiolizadas com suspensões dos isolados DFs093 (Bacillus sp.), DFs513 (Pseudomonas veronii), DFs769 (Bacillus cereus), DFs842 (Pseudomonas sp.), DFs843 (Rhodococcus sp.) e DFs912 (Rhodococcus sp.), previamente cultivados em  meio 523 de Kado com 24 horas de crescimento, cujas concentrações foram ajustadas para OD540= 0,50, com auxílio de espectrofotômetro, e agitadas por 5 horas a 10°C. Como testemunha, foram utilizadas sementes imersas em solução salina (NaCl 0,85%).
Para cada um dos seis isolados foram utilizadas 25 sementes, distribuídas individualmente em copos plásticos com capacidade para 50mL, contendo substrato comercial esterilizado. Os copos foram acondicionados em caixas plásticas, fechadas com plástico constituindo uma câmara úmida. Cada caixa representou uma parcela experimental, com quatro repetições. 
As avaliações realizadas foram: contagem diária das plântulas emergidas durante dez dias, e quantificação de plântulas que apresentaram sintomas típicos de antracnose após dez dias. Posteriormente, as folhas das plântulas foram cortadas e pesadas, para verificação da massa fresca. Em seguida, as mesmas foram acondicionadas em sacos de papel, após, colocados em estufa regulada a 60°C por 4 dias, para posterior pesagem da massa seca.
As raízes foram lavadas em água corrente, e submetidas ao mesmo procedimento da folhas para quantificar massa seca. 
Os resultados foram expressos em porcentagem de controle da antracnose, de germinação, de índice de velocidade de emergência, de peso de matéria fresca e seca de folhas e de massa seca das raízes.

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO
	 A avaliação da transmissão de C. lindemuthianum destacou o isolado DFs912 com 40%, de controle dos sintomas em relação à testemunha. O isolado DFs842 apresentou 20% e o isolado DFs093, 10% de controle na transmissão de C. lindemuthianum para as plantas. Estes isolados em ensaios anteriores, visando o  biocontrole de X. axonopodis pv. phaseoli, em feijão, apresentaram excelentes resultados no controle biológico desta bacteriose [11].
Em contrapartida, os isolados DFs513 e DFs843, neste estudo, apresentaram resultados idênticos aos da testemunha. Já o isolado DFs769, apresentou 40% de sintomas de antracnose acima da testemunha  (Fig. 1).

A

B

Figura 1. Porcentagem de controle da antracnose, (G) germinação, (IVE) índice de velocidade de emergência, (PMFF) peso de massa fresca das folhas, (PMSF) peso de massa seca das folhas e (PMSR) peso de massa seca das raízes, para seis tratamentos utilizando os biocontroladores DFs093, DFs513, DFs769, DFs842, DFs843 e DFs912, utilizados para microbiolizar sementes de feijão, cultivar Líder. UFPel/2005.

A germinação destacou o isolado DFs093, com 29%, seguido do isolado DFs843 e também do isolado DFs769, com 24 e 21% de incremento, respectivamente, em relação à testemunha, indicando o comportamento benéfico da microbiolização para a germinação. 
A avaliação do índice de velocidade de emergência demonstrou que os isolados DFs093 e DFs843, com 24 e 28%, respectivamente, permitiram o desenvolvimento de um maior número de plantas, fato justificado pelos resultados da germinação, em menor número de dias. 
O peso fresco e seco das folhas demonstrou que o isolado DFs769, incrementou em 39% em relação à testemunha, seguido pelo isolado DFs093 com 28% de aumento da massa seca das folhas. Este acréscimo da matéria seca das folhas indica que a planta proporcionou uma área foliar maior e que consequentemente, poderá ser correlacionada com o aumento na produção a campo[4].
Para o peso da massa seca de raiz, o isolado DFs093 proporcionou o maior incremento, 14%. Este aumento poderá significar a campo, um maior volume de solo a ser explorado, talvez, propiciando melhores condições de nutrição, e melhor qualidade para tolerar condições climáticas desfavoráveis. O destaque em incremento de massa seca de raiz, também foi encontrado, com este isolado para o controle de X. axonopodis pv. phaseoli em feijoeiro [11]. Outros resultados significativos foram encontrados utilizando Pseudomonas spp. fluorescente e Streptomyces pulcher  na microbiolização de sementes de arroz com e de tomate, respectivamente, em ambos os casos, foi observado o aumento considerável do comprimento radicular e da massa seca [3; 4].

4.CONCLUSÃO
Os resultados permitem-nos concluir que os isolados DFs912, DFs842 e DFS093 apresentam potencial para utilização, no controle da transmissão de C. lindemuthianum e os isolados DFs093, DFs843 potencialidade para promoção do crescimento de plantas de feijoeiro a partir da microbiolização das sementes. 

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1]AGOSTINI, V. A. Detecção e biocontrole de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli var. fuscans (Smith) Dye em sementes de feijoeiro comum (Phaseolus vulgaris L.) 2004. Dissertação (Mestrado)- Universidade de Passo Fundo, 2004. 103f.

[2]CARDOSO, J. E.; SILVA, S. A. G. & MARQUES, E. E. Controle químico e biológico das podridões radiculares do feijoeiro comum. Fitopatologia Brasileira. vol. 22 (1), março, 1997. p. 39-44.

[3] DILEEP, C.; KUMAR, B. S. D.; DUBE, H. C. Promotion of plant growth and yield by two rhizoplane fluorescent pseudomonas. Indian Journal of Experimental Biology. v. 36, n. 4. p. 399-402. 1998.
[4]EL-ABYAD, M; EL-SAYED, M. A.; EL-SHANSHOURY, A. R.; EL-SABBAGH, S. H. Towards the biological control of fungal and bacterial diseases of tomato using antagonistic Streptomyces spp. Plant and Soil. v. 149, p. 185-195, 1993.

[5]NORONHA, M. A.; MICHEREFF, S. J. & MARIANO, R. L. R. Efeito do tratamento de sementes de caupi com Bacillus subtilis no controle de Rhizoctonia solani. Fitopatologia Brasileira. vol. 20 (2), junho, 1995. p. 174-178.

[6]NUNES, W. M. de C. & FILHO, A. B. Avaliação dos danos causados pela antracnose (Colletotrichum lindemuthianum) do feijoeiro. Fitopatologia Brasileira. vol. 21 (4), dezembro, 1996. p. 436-442.

[7]PICININI, E. C. & FERNANDES, J. M. Controle químico da mancha angular e da antracnose do feijoeiro. Fitopatologia Brasileira. vol. 25 (1), março, 2000. p.92-94.

[8]SARTORI, A. F; REIS, E. M. & CASA, R. T. Quantificação da transmissão de Fusarium moniliforme de sementes para plântulas de milho.Fitopatologia Brasileira. vol. 29 (4), jul-ago., 2004. p. 456-458.

[9]VECHIATO, M. H.; CASTRO, J. L. de; ISHIMURA, I.; SABINO, J. C.; MENTEN, J. O.M.Antracnose do feijoeiro: correlação entre severidade em vagens e a incidência do patógeno nas sementes. Fitopatologia Brasileira. vol. 22 (4), dezembro, 1997. p.159-163.

[10]VIEIRA, C. Doenças e Pragas do feijoeiro. Viçosa, UFV, Impr. Univ., 1988. 231p.
[11]ZANATTA, Z. G. C. N. Potencial de bactérias para biocontrole de Xanthomonas axonopodis pv. phaseoli.  2004. f. 67. Tese (Doutorado em Fitossanidade) – Universidade Federal de Pelotas. Pelotas. RS.