Title: MULTIPLICAÇÃO IN VITRO DE FEIJOA (Acca sellowiana (Berg) Burret) E PITANGUEIRA (Eugenia uniflora L
Author: Márcia Wulff Schuch
Company: UFPEL

MULTIPLICAÇÃO IN VITRO DE FEIJOA (Acca sellowiana (Berg) Burret) E PITANGUEIRA (Eugenia uniflora L.)^1

SOARES, G. C.^2*; FERRI, J.^3; SOUZA, J. A.^4; SILVA, L. C.^4; SCHUCH, M. W.^5 

^1Laboratório de Micropropagação de Plantas Frutíferas; Apoio MCT-CNPq, FAPERGS.
^2* Aluno do curso de Agronomia, FAEM/UFPel. Bolsistas de Iniciação Científica – CNPq. E-mail: gsoares.faem@ufpel.tche.br
^3Aluna do curso de Agronomia, FAEM/UFPel. Bolsistas de Iniciação Científica PIBIC - CNPq
^4 Aluna do Programa de Pós-Graduação em Agronomia, área de concentração em Fruticultura de Clima Temperado, FAEM/UFPel. 
^5 Engenheira Agrônoma, Dra., Professora do Departamento de fitotecnia, FAEM/UFPel. 
Caixa Postal 354, 96010-900, Pelotas, RS. E-mail: marciaws@ufpel.tche.br

1.INTRODUÇÃO

	 As frutas nativas do Brasil apresentam grande potencial para exploração econômica e, podem constituir-se em nova alternativa, principalmente em nichos de mercado ávidos por novidades.
	No sul do Brasil, dentre as muitas espécies nativas existentes, destacam-se aquelas da família Myrtaceae. Entre todos os gêneros desta família, atualmente apenas quatro se destacam no que diz respeito à importância econômica, são eles: Acca, Eugenia, Myrciaria e Psidium [7]. No gênero Acca destaca-se como principal espécie a Acca selowiana (Berg) Burret, anteriormente classificada como Feijoa Selowiana Berg, conhecida como feijoa ou goiabeira-serrana [3; 4; 7]. No gênero Eugenia destaca-se como principal espécie a Eugênia uniflora L., conhecida como pitangueira [7]. 
A multiplicação de plantas frutíferas por via vegetativa pode ser feita de várias maneiras, sendo que cada espécie se adapta melhor a cada uma delas [3]. A propagação in vitro consiste no desenvolvimento de novas plantas em meio artificial sob condições assépticas, sendo possível através dela propagar espécies de difícil multiplicação pelos métodos clássicos e, ainda obter mudas sadias, livres de vírus e outros patógenos, produzindo assim um material de alta qualidade genética e sanitária. 
Na multiplicação in vitro, os fatores tipo de meio utilizado e tipo e concentração de citocinina são extremamente importantes para obter bons resultados. Os meios nutritivos utilizados para a cultura de tecidos têm a função de fornecer as substâncias essenciais para o crescimento dos tecidos e controlam, em grande parte, o padrão de desenvolvimento in vitro, dentre os meios nutritivos destacam-se o MS e o WPM. As citocininas são reguladores de crescimento que desempenham um papel fundamental no crescimento e cultura de tecidos, estimulando a divisão celular, bem como, a indução e a proliferação das brotações adventícias, além de quebrarem a dominância apical, sendo que o BAP (6-benzilaminopurina) é a citocinina mais utilizada em cultura de tecidos, pois além do custo mais baixo, estimula a brotação [5]. 
	Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito do meio de cultura e da citocinina BAP na multiplicação in vitro de feijoa e pitangueira.

2.MATERIAL E MÉTODOS

O trabalho foi realizado no Laboratório de Micropropagação de Plantas Frutíferas, Departamento de Fitotecnia da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, da Universidade Federal de Pelotas, RS. Segmentos caulinares com uma gema, sem o ápice, provenientes de brotações de feijoa e pitangueira cultivadas in vitro, foram utilizados como explante.
O delineamento experimental utilizado foi o inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2 x 2 x 2, sendo testados dois diferentes meios de cultura: MS [8] e WPM [6], a adição da citocinina BAP (6-benzilaminopurina) na concentração de 2,2 µM ou ausência desta citocinina, nas duas espécies em estudo: feijoa e pitanga, com quatro repetições por tratamento. Cada repetição se constituiu de um frasco com cinco explantes.
Os meios de cultura foram acrescidos de 100 mg L^-1 de mio-inositol, 30 g L^-1 de sacarose. O pH foi ajustado para 5,8 antes da inclusão do ágar na concentração de 6 g L^-1 e, posteriormente, autoclavado a 121ºC e 1,5 atm por 20 minutos. Foram utilizados frascos de 250 mL com 30  mL de meio de cultura. 
Após a inoculação, os explantes foram mantidos em sala de crescimento com 16 horas de fotoperíodo, temperatura de 25 ± 2ºC e densidade de fluxo de fótons do período de luz de 27μmol m^-2 s^-1.
Foi realizada uma única avaliação aos 45 dias de cultivo, sendo observado, o número de brotações, o número de folhas, o número de gemas, comprimento médio das brotações e a percentagem de necrose. 
Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias dos tratamentos comparadas estatisticamente pelo teste de Duncan. Os dados de número foram transformados segundo raiz quadrada de x + 0,5, onde x é o número obtido e os dados em percentagem foram transformados em arco seno da raiz quadrada de x/100, onde x é o percentual obtido.
   
3.RESULTADOS E DISCUSSÃO

	Para a variável número de brotações houve diferença estatística entre as espécies e na interação do meio de cultura e presença de BAP. O desdobramento das médias pelo teste de Duncan evidenciou que a pitangueira apresentou maior número de brotações em relação à feijoa, apresentando número médio de brotações de 1,16 e 0,36, respectivamente. Observou-se que não houve diferença entre o tipo de meio de cultura quando não foi acrescentado BAP, verificando-se que o meio WPM favoreceu o número de brotações quando foi adicionado 2,2 µM de BAP (Tabela 1). 
Tabela 1: Número médio de brotações em explantes de feijoa e pitangueira após 45 dias de cultivo in vitro em meio MS e WPM na ausência e presença de BAP. 
Meio de cultivo | Concentrações de BAP (µM)
| Zero | 2,2
WPM | 0,53* aB | 1,26 aA
MS | 0,61  aA | 0,57  bA
*Médias seguidas de mesma letra minúscula nas colunas e maiúscula nas linhas, não diferem entre si pelo teste de Duncan ao nível de 5%. 

Bertoni & Biricolti [1], observaram que ocorreu proliferação de parte aérea em Feijoa sellowiana (Berg.) quando adicionado BA no meio de cultivo, mas não houve diferença no número de brotações quando utilizaram concentrações de 2,5 a 10,0µM de BA. Olivier [9], observou que o meio MS com 100% dos seus sais e vitaminas adicionado de 1,2µM de 6-Benziladenina (BA) e 0,3µM de Ácido naftalenoacético (ANA), utilizado para a multiplicação de cereja (Eugênia uniflorum), apresentou baixa taxa de multiplicação.
	Para as variáveis número de folhas e número de gemas, observou-se diferença estatística para espécie e para adição de BAP no meio de cultura, a pitangueira apresentou maior número de folhas e gemas em relação à feijoa e a adição da citocinina BAP na concentração de 2,2µM favoreceu este resultado (Tabela 2).
Tabela 2: Número médio de folhas e número médio de gemas em explantes de feijoa e pitangueira após 45 dias de cultivo in vitro em meio MS e WPM na ausência e presença de BAP. 
Espécie | Número de folhas | Número de gemas
Eugenia uniflora | 4,18 a* | 5,49 a
Acca sellowiana | 1,45  b | 1,85  b
Concentração de BAP (µm) | Número de folhas | Número de gemas
2,2 | 3,82 a | 4,87 a
Zero | 1,69  b | 2,27  b
*Médias seguidas de mesma letra minúscula nas colunas e maiúscula nas linhas, não diferem entre si pelo teste de Duncan ao nível de 5%. 

	Para comprimento médio das brotações observou-se através da análise da variância interação entre os três fatores estudados, verificando-se que a pitangueira foi superior a feijoa em meio MS e WPM acrescido de BAP (Tabela 3).   
Tabela 3: Comprimento médio das brotações em explantes de feijoa e pitangueira após 45 dias de cultivo in vitro em meio MS e WPM na ausência e presença de BAP. 
Espécie | Meio de cultura
| MS | WPM
| Zero de BAP | 2,2µM de BAP | Zero de BAP | 2,2µM de BAP
Eugênia uniflora | 0,27*aA | 0,42 aA | 0,35 aA | 0,45 aA
Acca sellowiana | 0,20 aA | 0,12  bA | 0,05  bB | 0,35 aA
*Médias seguidas de mesma letra minúscula nas colunas e maiúscula nas linhas, dentro de cada tratamento, não diferem entre si pelo teste de Duncan ao nível de 5%.

	Para a percentagem de necrose observou-se que a feijoa apresentou maior percentagem de necrose independente do meio de cultura utilizado e independente da adição ou não de BAP no meio, explantes cultivados em meio WPM sem adição de BAP e cultivados em meio MS com 2,2µM de BAP apresentaram maior percentagem de necrose (Tabela 4). 
Tabela 4: Percentagem de necrose em explantes de feijoa e pitangueira após 45 dias de cultivo in vitro em meio MS e WPM na ausência e presença de BAP. 
Espécie | Meio de cultura | Concentração de BAP (µM)
| MS | WPM | Zero | 2,2
Acca sellowiana | 60,48*aA | 44,22 aA | 77,97 aA | 26,10 aB
Eugênia uniflora | 0,00 bA | 4,97 bA | 4,97 bA | 0,00 bA
Meio de cultura | | | |
WPM | - | - | 52,25 aA | 2,07 bB
MS | - | - | 22,91 bA | 14,70 aA
*Médias seguidas de mesma letra minúscula nas colunas e maiúscula nas linhas, dentro de cada tratamento, não diferem entre si pelo teste de Duncan ao nível de 5%.

4.CONCLUSÕES

	A espécie Eugenia tem maior potencial para a multiplicação in vitro.
	O meio de cultura WPM adicionado de 2,2µM de BAP produziu maior taxa de multiplicação das espécies.
	A adição de BAP na concentração testada é essencial para a multiplicação destas espécies.   

5.REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] BERTONI, P.; BIRICOLTI, S. Preliminary observations on the in vitro behaviour of Feijoa sellowiana (Berg.) seedlings. Rivista di Frutticoltura e di Ortofloricoltura, v. 58, n. 4, p. 61-64, 1996.

[2] BEZERRA, J. E. F.; SILVA JUNIOR, J. F. da; LEDERMAN, I. E. Pitanga (Eugenia uniflora L.). Jaboticabal: FUNEP. 2000. 30p. (Série Frutas Nativas, 1). 

[3] DONADIO, L. C.; MÔRO, F. V.; SERVIDONE, A. A. Frutas Brasileiras. Jaboticabal: Novos Talentos, 2002. 288p.

[4] DUCROQUET, J. P. H. J.; HICKEL, E. R.; NODARI, R. O. Goiabeira Serrana (Feijoa sellowiana). Jaboticabal: FUNEP. 2000. 66p. (Série Fruta Nativas, 5).

[5] GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M. A. Micropropagação. In: TORRES, A. C.; CALDAS, L. S.; BUSO, J. A. Cultura de tecidos e transformação genética de plantas. Brasília: Embrapa-SPI/Embrapa-CNPH, 1998, p. 183-260.

[6] LLOYD, G.; MCCOWN, B. Commercially-feasible micropropagation of mountain laurel, kalmia latifolia, by use os shoot-tip culture. Combined Proceedings International Plant Propagators Society, v. 30, p. 421- 427, 1980.

[7] MANICA, I. Frutas nativas, silvestres e exóticas 2: Técnica de produção e mercado: feijoa, figo-da-índia, fruta-pão, jaca, lichia, mangaba. Porto Alegre: Cinco Continentes. 2002. 541p. 

[8] MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and biossay with tabacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, Kobenhavn, v. 15, p. 473-497, 1962.

[9] OLIVER, J. J. Initiation of the Surinam cherry (Eugenia uniflorum) in tissue culture. Inligtingsbulletin Instituut vir Tropiese en Sbtropiese Gewasse, n. 295, p. 5-6, 1997.