Title: COMPORTAMENTO NO ESTABELECIMENTO IN VITRO DE SEMENTES DE JABUTICABA (Myrcia cauliflora Berg)
Author: Luciano Picolotto Eng. Agrônomo
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Company: particular

GERMINAÇÃO IN VITRO DE SEMENTES DE 
JABUTICABA (Myrciaria spp)^1 
Picolotto, L.^2*; Schuch, M. W.^3; Souza, J. A.^4; Silva, L. C.^5; Ferri, J. ^6; Fachinello, J. C.^7
^1 Laboratório de Micropropagação de Plantas Frutíferas; Apoio MCT-CNPq, FAPERGS
^2* Mestrando do PPGA, área - Fruticultura de Clima Temperado. FAEM/UFPEL. lpicolotto@universiabrasil.net
^3 Profa. Dra. Departamento de fitotecnia, FAEM/UFPel, marciaws@ufpel.tche.br
^4 Doutoranda do PPGA, área - Fruticultura de Clima Temperado. FAEM/UFPEL. joseas@ufpel.tche.br
^5 Mestranda do PPGA, área - Fruticultura de Clima Temperado. FAEM/UFPEL. lucianecouto@yahoo.com.br
^6 Graduanda em Agronomia, Bolsista PIBIC/CNPQ-UFPel. juferri@pop.com.br 
^7 Prof. Dr. Departamento de fitotecnia, FAEM/UFPel, jfachi@ufpel.tche.br
1. INTRODUÇÃO
A jabuticabeira (Myrciaria spp.) é uma fruteira originada do Centro Sul do Brasil podendo ser encontrada desde o estado do Pará até o Rio Grande do Sul. Uma característica considerada como limitante para a cultura é o grande período juvenil, para isso é importante a obtenção de bons porta-enxertos de pé-franco ou ainda utilizar outros processos vegetativos [1]. 
O principal método de propagação da jabuticabeira é por via seminífera, sendo este o método mais utilizado pelos produtores [5]. Porém métodos alternativos, como a propagação in vitro, surgiram como uma possibilidade real para obtenção de mudas mais vigorosas e com melhor padrão fitossanitário [6]. Assim a utilização de sementes como explante, pode ser utilizada em microenxertia, cultura de embriões e como explante inicial na micropropagação.  
As plantas lenhosas, onde se inclui a maioria das frutíferas, apresentam maiores dificuldades para o estabelecimento in vitro, principalmente devido a contaminação e oxidação [4]. 
O sucesso do sistema de propagação in vitro tem grande influencia das medidas de controle e prevenção da contaminação, sendo assim importante a determinação de um protocolo de estabelecimento in vitro. 
Para algumas espécies de frutíferas de clima temperado, com dificuldade de germinação logo após a retirada dos frutos, mesmo que maduros, não basta somente eliminar as contaminações microbianas das sementes, é necessário ainda submete-las a baixas temperaturas. As sementes necessitam de um período de estratificação sob frio, que varia de espécie para espécie e também entre cultivares. Dessa forma, possibilita-se que ocorra o processo da quebra ou superação da dormência fisiológica, o que as torna metabolicamente ativas e aptas para iniciar a germinação [2].
Alguns estudos realizados in vivo, independentemente da espécie, mostram que o suprimento adequado em água, composição de gases e temperatura convenientes, assim como a luz, é requisito fundamental para a germinação [9].
O experimento teve como objetivo testar concentrações de hipoclorito de sódio, fotoperíodo e frio na desinfestação e germinação in vitro de sementes de jabuticaba.
2. MATERIAL E MÉTODOS
O trabalho foi realizado no Laboratório de Micropropagação de Plantas Frutíferas, Departamento de Fitotecnia da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, da Universidade Federal de Pelotas, RS. O material vegetal constitui-se de sementes retiradas de frutos maduros colhidos na zona rural de Pelotas.
Os tratamentos constituíram-se de diferentes concentrações de hipoclorito de sódio (2,5% e 5%), variação de fotoperíodo (“24 e 0” horas de luminosidade) temperatura (50% das sementes submetidas a 5ºC durante 8 dias e nas demais temperatura ambiente a ±25 ºC), totalizando 8 tratamentos. O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado, com quatro repetições por tratamento. Cada repetição constituiu-se de cinco tubos de ensaio com uma semente.
	A desinfestação das sementes foi realizada em câmara de fluxo laminar onde as sementes foram colocadas em álcool 70% por 30 segundos, seguindo pela imersão em uma solução de hipoclorito de sódio, adicionada de 2 gotas de Tween 20, pelo período de 20 minutos e após lavados por três vezes em água destilada e autoclavada. 
	O meio de cultura utilizado foi o MS [7], sendo o pH ajustado para 5,8 antes da inclusão do ágar na concentração de 6gL^-1 e, posteriormente, autoclavado a 121ºC e 1,5 atm por 20 minutos. Foram utilizados tubos de ensaio com 10mL de meio de cultura. 
	Após a inoculação, as sementes permaneceram no escuro e a outra metade permaneceu em sala de crescimento com fotoperíodo de 16 horas luz, temperatura de 25  2ºC e densidade de fluxo de fótons do período de luz de 27molm^-2s^-1.
As variáveis analisadas foram percentagem de oxidação, germinação e contaminação fúngica e bacteriana, com avaliações realizadas aos 7, 14, 21, 28, 35 e 42 dias para todas as variáveis, com exceção para a germinação, a qual realizou-se aos 42 dias.
	Os dados foram submetidos à análise de variação e as médias dos tratamentos comparadas estatisticamente pelo teste de Duncan, através do uso do programa estatístico SANEST [8]. Os dados em percentagem foram transformados em arco seno da raiz quadrada de x/100, onde x é o percentual obtido.
3. RESULTADOS E DISCUSSÃO
Segundo a análise da variância na percentagem de germinação o fator temperatura foi altamente significativo (α = 0,01), com a baixa temperatura apresentando melhor germinação (4,31%) que a temperatura ambiente (0,01%). Resultados semelhantes foram encontrados por outros autores [1], os quais observaram que há influência da temperatura na porcentagem de germinação, sendo que, nas mais baixas temperaturas, foi verificada uma maior porcentagem de germinação para três clones de jabuticaba em estudo.
Na contaminação bacteriana foi observado, em todo o período de cultivo in vitro, diferenças altamente significativas (α = 0,01) entre a baixa temperatura e a temperatura ambiente, chegando aos 42 dias de cultivo a uma alta percentagem de contaminação com 86,73% e 52,52% (Figura 01). Grande parte da população bacteriana fitopatogênica encontra-se em locais protegidos, como irregularidades das superfícies vegetais, pelos e mucilagens, podendo escapar a ação dos desinfestantes [3]. Para o fotoperiodo, na mesma variável, as diferenças ocorridas foram aos 7 e 14 dias de cultivo, onde segundo teste de Duncan a maior contaminação foi nas sementes que não receberam luminosidade durante o cultivo, chegando a 53,02 e 68,90 % para as referidas datas.
Conforme análise de variância, para a variável oxidação no fator temperatura, as diferenças foram altamente significativas (α = 0,01). Em ambos os dias avaliados os níveis mais baixos de oxidação foram nas sementes submetidas a baixa temperatura, verificou-se porém, aos 7 dias de cultivo, além da temperatura a oxidação teve influencia do desinfestante hipoclorito de sódio a 5% com diferenças significativas (Tabela 01).
Tabela 01: Percentagem de oxidação observada em sementes de jabuticaba aos 7, 14, 21, 28, 35 e 42 dias de cultivo in vitro
Percentagem de oxidação |
Temperatura | 7 dias cultivo** | 14 dias cultivo | 21-42 dias cultivo |
Sem frio | 93,42^a | 99,66^a | 99,92 a |
Com frio | 71,65 b | 71,66 b | 87,83 b |
** 5% hipoclorito de sódio | |
Letras iguais nas colunas, não diferem entre si pelo teste de Duncan a 5%.
Na contaminação fúngica as diferenças foram singnificativas nas concentrações de desinfestante. O desdobramento das médias pelo teste de Duncan permitiu verificar que a concentração de 5% de hipoclorito de sódio foi mais eficiente na desinfestação (Figura 02). Para a variação de temperatura, a partir dos 14 dias de cultivo ocorreu a estabilização da contaminação, com a mínima observada em temperatura ambiente (7,42%) e a máxima (13,17%) visualizada nas sementes em temperatura de 8ºC.
Figura 01: Percentagem de contaminação bacteriana em função da temperatura de 7 a 42 dias de cultivo in vitro. | Figura 02: percentagem de contaminação fúngica em função da concentração de desinfestante de 7 a 42 dias de cultivo in vitro.

4. CONCLUSÕES
A baixa temperatura propicia a redução da formação de compostos fenólicos e aumenta a taxa de germinação com a quebra de dormência, porém, para jabuticabeira causa um aumento da contaminação bacteriana. 
O hipoclorido de sódio a 5% tem boa eficiência como desinfestante na contaminação fúngica proporcionando baixas taxas de contaminação. 
O fotoperiodo não influenciou a germinação das sementes de jabuticaba.
5. BIBLIOGRAFIA
[1] ANDRADE, R. A.; MARTINS, A. B. G. Influence of the temperature in germination of seeds of jabuticaba tree. Revista Brasileira Fruticultura, Jaboticabal - SP, v. 25, n. 1, p. 197-198, 2003.
[2] BARBOSA, W.; CAMPO DALL'ORTO, F.A.; OJIMA, M.; MARTINS, F.P.; RIGITANO, O. Emergência de plântulas do pêssego porta-enxerto 'Okinawa; influência de períodos de estratificação e de ácido giberélico. Bragantia, Campinas, v.46, n.2, p. 435-441, 1987.
[3] DANTAS, S. A. F.; OLIVEIRA, S. M. A.; CÂMARA, T. R. Contaminação microbiana no cultivo in vitro de plantas. Revisão anual de patologia de plantas. v. 10, p 391-407, 2002.
[4] ERIG, A. C.; SCHUCH, M. W.. Estabelecimento in vitro de plantas de marmeleiro (Cydonia oblonga mill.) cultivares MC, Adams e Portugal. Revista Científica Rural, v.8, n.2, p. 107-115, 2003.
[5] MANICA, I. Frutas Nativas, Silvestres e Exóticas 1: técnicas de produção e mercado. Abiu, amora-preta, araçá, bacuri, biriba, carambola, cereja do rio grande, jabuticaba. Porto Alegre: Cinco Continentes, 2000. 327p.
[6] PAIVA, R.; GOMES. G. A. C.; SANTANA, J. R. F.; PAIVA, P. D. O.; DOMBROSKI, J. L. D.; SANTOS, B. R. Espécies frutíferas com potencial econômico: avanços no processo de propagação. Informe Agropecuário, Belo Horizonte, v. 23, n. 216, p. 78 - 84, 2002.
[7] MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and biossay with tabacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, Kobenhavn, v. 15, p.473-497, 1962.
[8] ZONTA, E. P.; MACHADO, A. A. SANEST – Sistema de análise estatística para microcomputadores. Pelotas: DMEC/IFM/UFPel, 1987. 138p.
[9] PINHEIRO, C. S. R.; MEDEIROS, D. N.A. de; MACÊDO, C. E. C. de; ALLOUFA, M. A. I.Germinação in vitro de mangabeira (Hancornia speciosa Gomez) em diferentes meios de cultura. Revista Brasileira Fruticultura, Jaboticabal - SP, v. 23, n. 2, p. 413-416, 2001.