ENRAIZAMENTO IN VITRO DE MUDAS DE MARMELEIRO CVS. MC E ADAMS, UTILIZADAS COMO PORTA-ENXERTO PARA A PEREIRA

Erig, A.C.1*; Schuch, M.W.1; Chaves, A.C.1

 Laboratório de Micropropagação de Plantas Frutíferas - Departamento de Fitotecnia, FAEM/UFPel. Campus Universitário. Cx. P. 354, CEP 96.010-900.  Pelotas - RS. * acerig@ufpel.tche.br  

1. INTRODUÇÃO
Na cultura da pereira, os porta-enxertos mais utilizados são o Pyrus calleryana e o Pyrus betulaefolia [2]. No entanto, estes têm proporcionado excessivo vigor à copa, dificultando o manejo das plantas. O uso do marmeleiro (Cydonia oblonga Mill.), como porta-enxerto para a pereira, é muito difundido nos principais países produtores de pêra, com bons índices produtivos [10]. Além disto, ele apresenta a vantagem de reduzir o tamanho da planta e induzir a frutificação precoce [9]. 
Tendo em vista que a tendência da fruticultura moderna está voltada para os plantios adensados, que necessitam de um grande número de mudas por área, e ao uso de mudas certificadas, a micropropagação torna-se uma ferramenta extremamente interessante no setor de produção de mudas frutíferas. A etapa de enraizamento caracteriza-se pela formação de raízes adventícias nas partes aéreas provenientes da multiplicação, permitindo assim o posterior transplantio para condições ex vitro [4]. 
Durante o enraizamento, a fotossíntese realizada pelos explantes nas condições in vitro é relativamente baixa, e como a formação de raízes é um processo que requer energia, o fornecimento de carboidratos é quase sempre necessário [1]. Segundo Grattapaglia & Machado [4], geralmente a concentração de sacarose do meio de enraizamento é mantida nos mesmos níveis do meio de multiplicação, entre 20 e 30g.L-1.
Outro fator que tem merecido atenção no enraizamento in vitro é a concentração dos sais minerais do meio de cultura. O fornecimento de nutrientes no enraizamento é quase sempre necessário [1]. Embora as variações nas concentrações das formulações básicas sejam inúmeras, conforme a espécie e o sistema de enraizamento, para muitas espécies vegetais a formulação do meio MS satisfaz as necessidades [8], e diluições de 1/2, 1/3 e 1/4 dos sais de MS são freqüentemente utilizadas [4].
O objetivo deste trabalho foi determinar a concentração dos sais e de sacarose do meio de cultura que favoreçam o enraizamento in vitro de marmeleiro cvs. MC e Adams.

2. MATERIAL E MÉTODOS
Microestacas apicais com duas ou três folhas e 1,5 a 2cm de comprimento, obtidas de brotações de marmeleiro cvs. MC e Adams cultivadas in vitro, em fase de multiplicação 40 dias após a repicagem, foram utilizadas como explantes. 
Os fatores estudados foram a concentração dos sais do meio de cultura MS (50, 75 e 100% da concentração original) e a concentração de sacarose no meio de cultura (0, 15, 30 e 45g.L-1), no delineamento experimental inteiramente casualizado, em esquema fatorial 3 x 4, com quatro repetições por tratamento. Cada repetição se constituiu de um frasco com cinco explantes. 
 Inicialmente, as microestacas foram cultivadas no escuro, durante sete dias, em meio de cultura MS cuja concentração dos sais e de sacarose variou com o tratamento, acrescido de 100mg.L-1 de mio-inositol e 10µM de AIB. Após este período, as microestacas foram transferidas para um novo meio de cultura, de mesma constituição, porém sem AIB, e mantidas em sala de crescimento com luz. O pH dos meios foi ajustado para 5,7 antes da inclusão do ágar na concentração de 6g.L-1.
Aos 35 dias após o início dos tratamentos avaliou-se a percentagem de enraizamento, o número médio de raízes e o comprimento médio de raízes. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias dos tratamentos comparadas estatisticamente pelo teste de Duncan e analisados por regressão polinomial, através do uso do pacote estatístico SANEST [11].

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO
Para nenhuma das variáveis analisadas foi verificada interação entre os fatores estudados (concentração dos sais e de sacarose do meio de cultura), porém, os mesmos mostraram efeito significativo quando analisados isoladamente.
Em relação aos sais do meio MS, o que se observou para as duas cultivares (MC e Adams), é que 75% de sua concentração original é suficiente para a obtenção da maior percentagem de enraizamento, número médio de raízes e comprimento médio de raízes (Tabela 1). Para a cv. MC, os sais na concentração de 100% promoveram os mesmos resultados, não se justificando, portanto, a utilização desta concentração, até mesmo por termos econômicos, visto que a concentração de 75% é suficiente. A eficiência da composição mineral de MS reduzida a 75% também foi comprovada por Magalhães Júnior & Peters [6] no enraizamento in vitro de ameixeira cv. Santa Rosa, com 85,19% de enraizamento neste meio.

Tabela 1 – Percentagem de enraizamento, número médio de raízes e comprimento médio de raízes de microestacas de marmeleiro cvs. MC e Adams, aos 35 dias de cultivo in vitro, em função da concentração dos sais do meio de cultura MS. UFPel, Pelotas, RS, 2004.
Concentração dos sais do meio de cultura MS (%)	% de enraizamento*	Número médio de raízes*	Comprimento médio de raízes (cm)*	
	cv. MC	cv. Adams	cv. MC	cv. Adams	cv. MC	cv. Adams	
100	53,15a	20,88b	2,12a	0,64b	1,63a	1,18b	
75	69,18a	50,57a	1,77a	1,65a	2,13a	2,16a	
50	23,56b	  32,92ab	0,67b	  1,02ab	0,53b	0,50c	
Média	   44,04	   35,84	    1,40	    1,26	    1,43	    1,28	
CV (%)	   42,58	   43,93	  25,38	  28,13	  64,44	  66,69	
* Médias não seguidas de mesma letra na coluna diferem pelo teste de Duncan em nível de 5% de probabilidade.

A utilização dos sais de MS na concentração normal (100%), ao contrário do observado para a cv. MC, desfavoreceu o enraizamento da cv. Adams. De acordo com Nicoloso et al. [7], respostas distintas, que variam com a espécie e com a cultivar estudada, podem ser atribuídas a diferenças genéticas entre elas. 
Para todas as variáveis analisadas, a concentração de sacarose no meio de cultura teve um comportamento quadrático, exceto para o comprimento médio de raízes na cv. Adams, onde não se observou efeito significativo (Figura 1). As máximas percentagens de enraizamento para a cv. MC e Adams (73,6% e 50,7%, respectivamente) foram obtidas com 15g.L-1 de sacarose no meio de cultura (Figura 1a). Esta concentração de sacarose também favoreceu um maior número médio de raízes (3,23 e 2,11 raízes para a cv. MC e Adams, respectivamente) (Figura 1b) e um maior comprimento médio de raízes da cv. MC (2,34cm) (Figura 1c).

(a)

(b)

(c)

Figura 1 - Percentagem de enraizamento (a), número médio de raízes (b) e comprimento médio de raízes (c) de microestacas de marmeleiro aos 35 dias de cultivo in vitro, em função da concentração de sacarose no meio de cultura. UFPel, Pelotas, RS, 2004.

Para a formação de raízes in vitro, segundo George [3], há necessidade de energia e carboidratos, sendo estes fornecidos através da fotossíntese (em condições autotróficas) ou oriunda de uma fonte exógena de açúcar (em sistema heterotrófico ou mixotrófico). Como no tratamento sem sacarose também houve enraizamento (37,7% e 12,2% para as cvs. MC e Adams, respectivamente), estes resultados sugerem que as condições encontradas no frasco de cultivo e na sala de crescimento promoveram a fotossíntese, isto é, a produção de energia e de carboidratos para a formação de raízes. No entanto, esta fotossíntese não é suficiente para sustentar elevadas percentagens de enraizamento, sendo necessária a adição de sacarose para o aumento da formação de raízes. Este acréscimo de sacarose, porém, não deve ocorrer indiscriminadamente, pois, observando-se as Figuras 1a, 1b e 1c verifica-se  que os melhores resultados foram obtidos  com 15g.L-1 de sacarose no meio de cultura, e concentrações superiores a 30g.L-1 tiveram efeito negativo sobre o enraizamento. Resultados semelhantes foram obtidos por Lane [5], onde concentrações de sacarose inferiores a 20g.L-1 e superiores a 50g.L-1 no meio de cultura, prejudicaram o enraizamento de macieira. 

4. CONCLUSÕES
O enraizamento in vitro de marmeleiro cvs. MC e Adams é favorecido com a redução dos sais do meio MS a 75% de sua concentração original, e com 15g.L-1 de sacarose no meio de cultura.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] ASSIS, T.F.; TEIXEIRA, S.L. Enraizamento de plantas lenhosas. In: TORRES, A.C.; CALDAS, L.S.; BUSO, J.A. Cultura de tecidos e transformação genética de plantas. Brasília: Embrapa-SPI / Embrapa-CNPH, 1998. v.1, p.261-296.
[2] FAORO, I.D. Cultivares e porta-enxertos. In: EPAGRI. Nashi, a pêra japonesa. Florianópolis: Epagri/Jica, 2001. p.95-138.
[3] George, E.F. Plant propagation by tissue culture. Part 2: In Practice. 2.ed., Edington: Exegetics, 1996. 1361p.
[4] GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M.A. Micropropagação. In: TORRES, A.C.; CALDAS, L.S.; BUSO, J.A. Cultura de tecidos e transformação genética de plantas. Brasília: Embrapa-SPI / Embrapa-CNPH, 1998. v.1, p.183-260.
[5] Lane, W.D. Regeneration of wolle plants from shoot meristem tips. Plant Science Letters, Amsterdan, v.13, p.281-285, 1978.
[6] Magalhães Júnior, A.M.; Peters, J.A. Cultura in vitro de ameixeira: efeito do ácido indolbutírico, tipo de lâmpada e intensidade luminosa no enraizamento. Revista Brasileira de Fisiologia Vegetal, Brasília, v.3, n.1, p.57-61, 1991.
[7] Nicoloso, F.T.; ERIG, A.C.; MARTINS, C.F.; RUSSOWSKI, D. Micropropagação do Ginseng Brasileiro [Pfaffia glomerata (Spreng.) Pedersen]. Revista Brasileira de Plantas Medicinais, Botucatu, v.3, n.2, p.11-18, 2001.
[8] PASQUAL, M.; LOPES, P.A. Influência de diversos fatores sobre o enraizamento do porta-enxerto de pereira (Pyrus calleryana) in vitro. Pesquisa agropecuária brasileira, Brasília, v.26, n.3, p.331-334, 1991.
[9] PREVIATI, A.; DA RE, F.; BASSI, D.; TAGLIAVINI, M.; MARANGONI, B. Development of protocols for in vitro rooting of advanced selections of Pyrus communis rootstocks. Acta Horticulturae, The Hague, n.596, p.485-486, 2002.
[10] SOUZA, C.M.; BIANCHI, V.J.; ALVARENGA, D.A. Produção e certificação de macieira e pereira. Informe Agropecuário, Belo Horizonte, v.23, n.216, p.49-56, 2002.
[11] ZONTA, E.P.; MACHADO, A.A. SANEST – Sistema de análise estatística para microcomputadores. Pelotas: DMEC/IFM/UFPel, 1987. 138p.