Title: Avaliação da atividade antineoplásica de extratos da Carapa guianensis Aubl em cultivos “in vitro” da linhagem celular MCF-
Author: myv4tb647v8346yyp2tb4kvjt
Company: Sandro Outeiro Carvalho

AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE ANTIPROLIFERATIVA DE EXTRATOS DA Carapa guianensis AUBL EM CULTIVOS “IN VITRO” DA LINHAGEM CELULAR MCF-7 DE ADENOCARCINOMA DE MAMA HUMANO

CARVALHO, Ireni Leitzke^1; SANTOS, Fabiana Fonseca^2; BEIRA, Fátima Tereza Alves^3; GALLI, Vanessa^4; GRASSMANN, André Alex^4; RODRIGUES, Maria Regina Alves^5; DEL PINO, Francisco Augusto Burket^6, PORTO, Danielle Alves^5.

^1Programa de Pós-Graduação em Produtos Naturais – Especialização em Fitoquimica / UFPEL
^2Bolsista CNPq
		^3Laboratório de Biologia Celular / DFF/ IB / UFPel
^4Gradução Biologia/ UFPEL
^5Laboratório de Oleoquímica/ DQO /IQG/ UFPEL
^6Laboratório de Bioquímica/DBQ/IQG/UFPEL
Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900. ireni@ufpel.edu.br

1. INTRODUÇÃO

O câncer de mama é considerado a mais freqüente neoplasia que acomete diversas mulheres em todo mundo, com mais de um milhão de novos casos e aproximadamente 373 mil mortes a cada ano. No Brasil, representa a primeira neoplasia em incidência na mulher, sendo que a maioria dos casos relatados encontra-se na região sul (67%) (Guarneri & Conte, 2004; Mello et al., 2002). O câncer de mama representa um grave problema de saúde pública em todo o mundo, pela sua alta incidência, morbidade, mortalidade, e pelo seu elevado custo no tratamento (Paulinelli et al., 2003).
A importância das plantas medicinais está na sua contribuição como fonte natural de fármacos e por proporcionar grandes chances de obtenção de novas substâncias devido à diversidade de constituintes químicos presentes na sua composição (Noldin et al., 2003). 
A Carapa guianensis Aubl., popularmente conhecida como “andiroba”, nativa da região Amazônica, apresenta uma larga aplicação na medicina popular, dentre as quais se destacam sua ação antiinflamatória, analgésica, antiartrítica, antitumoral, larvicida e  antimicrobiana (Graham et al., 2000; Hammer & Johns, 1993; Lorenzi & Matos, 2002; Penido et al., 2005; Silva et al., 2004).  Análises químicas do óleo da andiroba e do extrato aquoso de sua semente revelaram a presença de um grupo químico chamado limonóide (tetranortriterpenóides) responsável pelas propriedades repelentes de insetos (Ollis et al., 1970). Três limonóides, o nimbolide, epoxiazadiradiona e azadirachtina foram testados sobre células em cultura de neuroblastoma de rato e osteosarcoma humano, demonstrando atividade citotóxica com CI_50 identificada (Cohen et al., 1996).
O presente estudo teve como objetivo comparar a atividade antiproliferativa de extratos do óleo da semente da Carapa guianensis Aubl. em cultivo “in vitro” sobre a linhagem celular MCF-7 de adenocarcinoma de mama humano. 

2. MATERIAIS E MÉTODOS

O óleo foi extraído por maceração em eter de petróleo, seguido de extração em Soxhlet no mesmo solvente, originando o extrato CGEP (extrato da Carapa guianensis em éter de petróleo). Este óleo foi submetido à saponificação e a matéria insaponificável, originou o extrato CGEPI (extrato da Carapa guianensis com éter de petróleo, fração insaponificável), ambos os extratos foram diluídos em DMSO (dimetilsulfóxido). 
  As células da linhagem MCF-7 foram cultivadas em placas com 96 cavidades com meio de cultura RPMI e suplementado com 10% de Soro bovino Fetal (SBF) em atmosfera de 5% de CO_2 a 37°C., e então pré-incubadas por 24h (Tempo T0). Posteriormente, as células foram expostas a cinco diluições crescentes dos extratos e incubado por mais 72h. As determinações finais do crescimento celular foram realizadas após fixação das células com TCA, seguido de coloração com Sulforrodamina B (SRB). Para remover o corante, o cultivo foi lavado com ácido acético e solubilizado com Tris base (tris hidroximetil aminometano 10mM) (Rubinstein, 1990; Skehan, et al., 1990). Posteriormente, determinou-se a densidade óptica em um Espectrofometro com Leitor de Placa ELISA a 492nm (Itharat et al., 2004).Os resultados obtidos foram analisados utilizando o programa estatístico GraphPad Prism 4.0. 

3. RESULTADOS E DISCUSSÂO

Foram realizados três experimentos independentes de cada extrato para confirmação dos resultados. A atividade do extrato CGEP foi avaliada na presença de concentrações crescentes deste extrato (0,006 mg/mL; 0,015 mg/mL; 0,06 mg/mL; 0,15 mg/mL e 0,6 mg/mL). 
Como pode observar-se na figura 1, houve inibição da proliferação celular em função da concentração utilizada obtendo-se uma curva dose resposta, mas não houve morte celular.

                               Log_10 [mg/ml CGEP]

Figura 1. Atividade do AEP sobre a linhagem MCF-7

A atividade do extrato CGEPI foi avaliada, utilizando-se concentrações crescentes deste extrato (0,002 mg/mL; 0,01 mg/mL; 0,06 mg/mL; 0,1 mg/mL e 0,6 mg/mL). Conforme ilustrado na figura 2, houve inibição da proliferação e morte celular de acordo com a concentração utilizada. 

                                  Log_10 [mg/ml, CGEPI]

Figura 2. Atividade do extrato CGEPI sobre a linhagem MCF-7

4. CONCLUSÃO

Os dois extratos apresentaram atividade antiproliferativa sobre a linhagem celular MCF-7 e a fração CGEPI provocou morte celular. Desta forma, destacamos maior atividade na fração insaponificável onde encontramos os limonóides que podem ser os agentes ativos.

5. REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS

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Hammer, M. L., and Johns, E. A. (1993). Tapping an Amazonian plethora: four medicinal plants of Marajo Island, Para (Brazil). J Ethnopharmacol 40, 53-75.

Itharat, A., Houghton, P. J., Eno-Amooquaye, E., Burke, P. J., Sampson, J. H., and Raman, A. (2004). In vitro cytotoxic activity of Thai medicinal plants used traditionally to treat cancer. J Ethnopharmacol 90, 33-8.

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Rubinstein, L. V., Shoemaker, R. H., Paull, K. D., Simon, R. M., Tosini, S., Skehan, P., Scudiero, D. A., Monks, A., and Boyd, M. R. (1990). Comparison of in vitro anticancer-drug-screening data generated with a tetrazolium assay versus a protein assay against a diverse panel of human tumor cell lines. J Natl Cancer Inst 82, 1113-8.

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Skehan, P., Storeng, R., Scudiero, D., Monks, A., McMahon, J., Vistica, D., Warren, J. T., Bokesch, H., Kenney, S., and Boyd, M. R. (1990). New colorimetric cytotoxicity assay for anticancer-drug screening. J Natl Cancer Inst 82, 1107-12.