Title: DINÂMICA DA POPULAÇÃO DE Listeria monocytogenes NO PERÍODO DE VIDA DE PRATELEIRA DE LINGÜIÇA FRESCAL
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CULTIVO IN VITRO DA BROMÉLIA Neoregelia sp.
ZEPKA, Ana Paula dos Santos^1; LARRÉ, Cristina Ferreira^2.

^1,2Deptº de Botânica – IB/UFPel
Campus Universitário  – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900. ana-z@bol.com.br

1.	INTRODUÇÃO

As bromélias são plantas que impressionam por suas formas exóticas e pela ampla gama de cores e variedade de suas flores e folhas. Elas representam a perfeita tradução do estilo tropical e deixam para trás o conceito de que a flor deve ter pétalas coloridas, aveludadas e delicadas para ser bela. Devido à atração que exercem pela forma escultural, as bromélias ganham, cada vez mais, o merecimento do título de “curingas” do paisagismo (Valente et al., 2003). A maioria das bromélias é ornamental, inclusive no Brasil, com ênfase ao paisagismo, que proporciona similaridade aos ambientes naturais. O paisagismo no país ganhou destaque na década de 1960 e para esse fim, dentre tantos gêneros, inclui-se o gênero Neoregelia sp. (candelabro-vermelho) (Englert, 2000).
Pertencente à subfamília Tillandsioideae, Neoregelia sp. é um gênero composto por bromélias na sua maioria apreciadoras de sombra, com algumas exceções, que habitam o chão ou ramos do estrado inferior da mata (Kampf, 1992).
O progresso da devastação e da coleta predatória contribui para a perda da biodiversidade e extinção. Este contexto inclui Neoregelia sp., uma bromélia raramente presente no ecossistema do RS. Em função disto, técnicas de cultura de tecidos in vitro levam à preservação de populações naturais e a reintegração das plantas em seus hábitats. A exemplo de outros países, no Brasil há empresas que produzem mudas de bromélias para fins ornamentais, utilizando técnicas de cultura de tecidos, visando abastecer mercados internos e externos (Zornig, 1996). Porém, os conhecimentos ainda são insuficientes para possibilitar o suprimento contínuo e permanente desta flora. Assim sendo, torna-se necessário o desenvolvimento de pesquisas através da biotecnologia, técnicas de cultivo in vitro e a propagação em massa desta planta para posterior adaptação.
Diante do exposto, objetivou-se determinar o cultivo in vitro de explantes foliares de candelabro-vermelho e a indução de calos, através do meio de cultura MS (Murashige e Skoog, 1962) modificado associado a diferentes combinações e concentrações de reguladores de crescimento.

2.	MATERIAL E MÉTODOS

Foram utilizadas plantas de Neoregelia sp., provenientes de floricultura, a partir das quais foram obtidos os explantes iniciais. Os explantes, oriundos das folhas foram lavados em água corrente. Após, em câmara de fluxo laminar, com material previamente esterilizado em autoclave, os explantes foram cortados em quadrados e desinfestados com álcool 70% por 30 segundos, água destilada esterilizada, hipoclorito de sódio a 1% por 20 minutos e água destilada esterilizada novamente. Em seguida, os explantes foram mergulhados em água de côco (antioxidante) em dois ensaios.
O meio de cultura usado foi o MS, do qual os micronutrientes contendo Boro, Zinco e Cobre foram suprimidos, por serem tóxicos às bromélias. A esse MS modificado foram acrescidas concentrações de reguladores de crescimento, 2 g L^-1 de carvão ativado e pH ajustado em 5,8. Em um primeiro ensaio, os tratamentos consistiram de três reguladores de crescimento: 2,4D, BAP e ANA, cada um em quatro concentrações diferentes (0,0 mg L^-1; 0,5 mg L^-1; 1,0 mg L^-1 e 1,5 mg L^-1) combinados entre si, totalizando 64 combinações (4 x 4 x 4). Os meios foram distribuídos em frascos e autoclavados a 120 ºC (1 atm) por 15 minutos. Após a inoculação dos explantes em câmara de fluxo laminar, o experimento foi transferido para sala de crescimento com fotoperíodo de 8h/16h, temperatura controlada de 27 ºC, na luz, por oito meses. No segundo ensaio, após a inoculação, o experimento foi incubado em câmara de crescimento, inicialmente no escuro por cinco semanas e após este período, na luz. 

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

A Tabela 1 apresenta a porcentagem (%) de explantes oxidados de Neoregelia sp. de acordo com o tempo de incubação (meses) do material no primeiro e segundo ensaios.
 
Tabela 1. Porcentagem (%) de explantes oxidados de Neoregelia sp. de acordo com o tempo de incubação (meses) no primeiro ensaio (todo na luz) e no segundo ensaio (primeiramente no escuro e depois na luz) .

Ensaio | 1º mês | 2º mês | 3º mês | 4º mês | 5º mês | 6º mês | 7º mês | 8º mês
1º | 100 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0 | 0
2º | 0 | 0 | 0 | 10 | 10 | 15 | 15 | 20

Os explantes submetidos ao primeiro ensaio, oxidaram no primeiro mês de incubação. Este resultado está de acordo com o observado por Peres (2000) que afirma ser a presença da luz já na primeira semana em câmara de crescimento, um impedimento ao estabelecimento da cultura, pelo fato dela ser um fator ambiental que afeta a organogênese. Este procedimento baseia-se no fato de que a enzima chave da produção de compostos fenólicos, a fenilalaninamonioliase, é dependente da luz (Peres, 2000).
No segundo ensaio, com incubação inicial de cinco semanas no escuro, os explantes superaram este período sem sofrerem oxidação e foram então transferidos à luz na sala de crescimento, sendo observados durante oito meses onde houve uma oxidação progressiva, porém menor que no primeiro ensaio (Tabela 1).
O desenvolvimento de explantes pelo uso isolado de qualquer regulador de crescimento foi inexpressivo. Estes dados concordam com Handro & Floh (1990) que afirmam que a organogênese é controlada pela concentração de fitorreguladores e pelo balanço de citocinina/auxina presentes no meio de cultura. Carvalho et al. (1974) também destaca ser essencial a combinação entre 2,4D e uma citocinina para a proliferação de calos de explantes foliares nodais de cafeeiro.  
No segundo ensaio, observou-se desenvolvimento de massa celular nos tratamentos com os meios contendo concentração de 1,0 mg L^-1 de 2,4D, 0,5 mg L^-1 de BAP e 0,0 mg L^-1 de ANA; 0,5 mg L^-1 de 2,4D, 3,0 mg L^-1 de BAP e 0,0 mg L^-1 de ANA; 0,5 mg L^-1 de 2,4D, 5,0 mg L^-1 de BAP e 0,0 mg L^-1 de ANA.
O 2,4D é o regulador de crescimento mais eficiente na indução de calos e de embriogênese somática em cereais, sendo utilizado com sucesso em aveia (Rines & McCoy, 1981; McCoy et al., 1982; Grando et al., 1993; Bered et al., 1996).
A massa de células desorganizadas e parcialmente indiferenciadas que variam quanto ao tipo, tamanho, conteúdo celular e espessura da parede, chama-se de calo, e sua formação deve-se a um balanceamento nos níveis de reguladores de crescimento exógenos citocinina/auxina presentes no meio de cultura (Narayanaswamy, 1977). A cultura de calos tem permitido o estabelecimento in vitro, o que, conseqüentemente, proporciona a propagação em larga escala de diversas espécies. No entanto, ainda estão em fase inicial de exploração as possíveis mudanças no tecido vegetal capazes de induzir a formação de calos (Paiva Neto et al., 1997). O calo embriogênico, segundo Bregitzer et al. (1995) é o alvo preferido utilizado para o bombardeamento de partículas contendo o regulador de crescimento ANA com vista à transformação genética dessa massa de desenvolvimento celular, levando à sua modificação em tecido ou órgão.
As bromélias demonstram, em geral, formação de calos, quando cultivadas na presença de auxinas e citocininas, sendo este fato observado por vários autores: Mercier & Kerbauy (1992, 1993, 1994, 1995), Vinterhalter & Vinterhalter (1994) e Carneiro (1997). 

4. CONCLUSÕES

O meio MS modificado foi eficiente para a cultura de tecidos da bromélia candelabro-vermelho. O pré-condicionamento no escuro permitiu o estabelecimento do material, favorecendo o crescimento celular nos explantes da planta. 

5.	REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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