Uso de Biomarcadores em Peixes para o Monitoramento de Poluentes do canal São Gonçalo, Pelotas/RS
ROCHA, Alessandra Martins da1*; BOBROWSKI, Vera Lucia2.

1,2Depto. de Zoologia e Genética – Instituto de Biologia/UFPel
Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900. *alessandramr@gmail.com

1.	INTRODUÇÃO

A água representa um recurso escasso essencial à vida, que vem se tornando cada vez mais reduzido em função, principalmente, do crescimento populacional acelerado (Manson, 1996). Além disso, os recursos dulcícolas encontram-se muito comprometidos em conseqüência da contaminação das águas, resultante das atividades humanas (Martinez e Cólus, 2002).
Comumente, a poluição aquática está associada com a descarga de efluentes domésticos, industriais ou agrícolas (Manson, 1996). Entretanto, algumas outras formas de poluição surgem a partir de fontes difusas, que ocorrem quando o poluente não entra no corpo de água a partir de um único ponto. Em áreas agrícolas, por exemplo, a lixiviação de águas superficiais e a infiltração da água intersticial para rios e lagos podem introduzir nutrientes (a partir dos fertilizantes) e agrotóxicos, em quantidades substanciais (Martinez e Cólus, 2002).
Segundo Al-Sabti et al. (1994), os peixes são excelentes para o estudo de potencial mutagênico e carcinogênico de contaminantes presentes na água, pois podem metabolizar, concentrar e armazenar poluentes, além de estarem no topo da cadeia alimentar e topicamente expostos aos poluentes. A principal aplicação de métodos utilizando peixes é para determinar a distribuição e efeitos de contaminantes químicos em ecossistemas aquáticos, conforme AL-SABTI (1994) e Metcalfe (1988). 
O canal São Gonçalo é extremamente importante para Pelotas, graças à Barragem Eclusa construída em 1977, ele representa para a cidade uma excelente fonte potencial de água potável. Tem uma extensão de 75km, com largura de 200 metros e profundidade média de seis metros. O canal é navegável em toda a sua extensão e se constitui como ligação entre a Laguna dos Patos e a Lagoa Mirim e o seu principal afluente é o Rio Piratini. No trecho entre a cidade de Pelotas e a sua foz, apresenta diversos trechos dragados para permitir um calado de acesso ao porto de Pelotas (ROSA, 1985).
O uso de biomarcadores em ecotoxicologia pode resolver alguns problemas, como o de estabelecer os efeitos de compostos químicos existentes no ambiente sobre organismos individuais, tanto em termos populacionais quanto de comunidades. Biomarcadores podem fornecer medidas sensíveis e específicas da exposição de organismos a agentes genotóxicos (e, algumas vezes, de seus efeitos tóxicos), através de amostras obtidas em campo por procedimentos de amostragem que permitem avaliar a saúde dos organismos no ambiente. Tipicamente, os biomarcadores são alterações na atividade de enzimas ou no nível de um composto biogênico específico. Eventos como a formação de aductos por ligação covalente no DNA e os rearranjos do DNA em trocas entre cromátides irmãs, por exemplo, são considerados biomarcadores. Efeitos genotóxicos específicos são utilizados como parâmetros para avaliar danos no DNA causados por poluentes ambientais (Martinez e Cólus, 2002).
Segundo MATSUMOTO e CÓLUS (2000), os métodos citogenéticos são provavelmente os mais sensíveis e eficientes para a detecção de efeitos de genotoxicidade. Dentre eles, o teste de Micronúcleos é um ensaio tecnicamente simples, que permite a detecção de agentes clastogênicos e aneugênicos e tem sido amplamente utilizado há vários anos, sendo, portanto, bem validado e com um grande número de substâncias testadas. É uma técnica de triagem rápida e de baixo custo, adequada para avaliar a exposição de peixes marinhos e de água doce à contaminantes (Landolt e Kocan, 1983).
Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial genotóxico das águas do canal São Gonçalo através da técnica de micronúcleos em sangue periférico de peixes nativos da região.

2.	METODOLOGIA

Foram realizadas coletas de peixes em três diferentes pontos do Canal são Gonçalo: Barragem Eclusa, Clube Regatas e Praia do Laranjal.
Os espécimes de peixes foram coletados no mês de dezembro de 2005 em diferentes pontos pré-determinados do canal São Gonçalo, sendo realizada a captura de espécimes com diferentes hábitos alimentares, pois os tipos de alimentos utilizados podem conter diferentes quantidades acumuladas das substâncias químicas e também pelos diferentes comportamentos de migração de acordo com cada espécie (Martinez e Cólus, 2002). 
De cada animal foram retiradas amostras de sangue, através de punção da artéria caudal, mediante o uso de seringas hipodérmicas e agulhas (GRASSI, 2002; Martinez e Cólus, 2002). Para a confecção das lâminas foram feitos esfregaços sangüíneos (utilizado método padrão), os quais foram expostos à secagem em temperatura ambiente e após 24 horas fixados com metanol durante 15 minutos e corados com Giemsa 5% (Grisolia e Starling, 2001). 
Para a análise das lâminas e contagem dos eritrócitos utilizou-se microscópio Olympus, com aumento de 1000X. Foram preparadas duas lâminas por exemplar coletado, e observados 5000 eritrócitos por indivíduo, sendo 2500 eritrócitos para cada lâmina.
A análise de variância foi realizada utilizando o método ANOVA e as médias avaliadas pelo teste de Duncan com nível de significância de 5%.

3.	RESULTADOS E DISCUSSÃO

      	Dentre os animais coletados foram encontrados jundiás (Rhamdia quelen), bagres (Bagre spp) e lambaris (Astianax spp) (Fig. 1).

A

B

C

Figura 1. Espécimes de peixes nativos coletados ao longo do canal São Gonçalo para avalição de danos de DNA através do teste de micronúcleos em sangue periférico. A. Jundiás (Rhamdia quelen); B. Bagres (Bagre spp); C. Lambaris (Astianax spp).

As análises de eritrócitos dos indivíduos capturados durante as coletas mostraram algumas células com presença de anormalidades nucleares eritrocitárias (Fig. 2), o que pode ter sido causado por algum tipo de contaminação. Porém, não houve diferença estatística significativa (p>0,05) entre o número de células com micronúcleos, com brotamentos e nem em relação ao número de anormalidades eritrocitárias totais encontrados (TABELA 1) para os diferentes pontos de coleta. 
A análise da presença de alterações celulares em eritrócitos revelou poucas anomalias nos peixes analisados. A menor taxa foi observada nos peixes coletados no clube Regatas, localizado próximo ao porto de Pelotas. Nos demais pontos, em comparação com os resultados de Rodriguez et al. (2003), que observaram, em média, 3 micronúcleos por 1000 eritrócitos examinados, o índice encontrado não foi alto, sendo de no máximo 4,5 em 5.000 eritrócitos avaliados.
No período de dezembro, o ponto localizado na Barragem Eclusa recebe muitos resíduos de lavouras de arroz desta região onde fertilizantes e herbicidas são aplicados nesta época, enquanto que o ponto localizado na praia do Laranjal tem a sua população aumentada, pois começa o período de veraneio e, portanto, resíduos antrópicos são liberados diretamente na praia.

TABELA 1: Relação estatística entre as análises de diferentes locais de                        coleta no período de dezembro de 2005. MN= micrinúcleos

Anormalidades	Local avaliado	Médias	
Número de MN	Barragem eclusa	2,09  3,14 	
	Clube regatas	0,33  0,52	
	Praia do laranjal	2,33  2,66	
Células com brotamentos	Barragem eclusa	2,45  1,57	
	Clube regatas	1,00  0,89	
	Praia do laranjal	1,67  1,63	
Anormalidades totais	Barragem eclusa	4,55  3,11	
	Clube regatas	1,33  0,82	
	Praia do laranjal	4,00  4,20	

Figura 2. Células eritrocitárias de peixes capturados no canal São Gonçalo com alterações nucleares tipo micronúcleo (A) e tipo brotamentos (B).

A

B

4. CONCLUSÕES

Com base nestes resultados, podemos concluir que o teste de micrunúcleos pode ser um eficiente bioindicador ambiental, tendo se mostrado sensível às substâncias presentes na água, uma vez que eritrócitos micronucleados foram encontrados, ainda que não tenha ocorrido uma variação significativa no número desses.

4.	REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

Al-Sabti, K.; Franko, M.; Andrijanie, B.; Knez, S. & Stegnar, P. Chromium induced micronuclei in fish. J. Appl. Toxicol., 14:333-336. 1994.
GRASSI, L.E.A.. Hematologia, biometria, teor de compostos organoclorados e frequência de formação de micronúcleos em teleósteos de água doce, sob diferentes condições limninológicas. 2002. 166p. Tese (Doutorado) – Instituto de Biociências, Universidade Estadual Paulista, Rio Claro.
Grisolia, C. K. and Starling, F, L. R. M. Micronuclei monitoring of fishes from Lake Paranoá, under influence of sewage treatment plant discharges, Mutation Research/Genetic Toxicology and Environmental Mutagenesis, Volume 491, Issues 1-2, 5 April 2001, Pages 39-44.
Landolt, M. L. & Kocan, R. M. 1983. Fish cell cytogenetics: a measurement of the genotoxic effects of environmental pollutants. Aquatic Toxicol.. pp.335-353.
Martinez, C. B. R.; Cólus, I. M. S. Biomarcadores em peixes neotropicais para o monitoramento da poluição aquática na bacia do rio Tibagi. In: Medri, M. E. et al. Editores. Londrina, PR : M. E. Medri, 2002, p. 551-577.
Manson, C. F. Biology of freshwater pollution. 3rd ed. Longman, Essex. 1996.
METCALF, C. D. Induction of micronuclei and nuclear abnormalities in the erythrocytes of mudminnows and brow bullheads. Bull. Environ. Contam. Toxicol., v.40, p.489-495, 1988.
RODRIGUEZ-CEA, A.; AYLLON, F.; GARCIA-VAZQUEZ, E. Micronucleus test in freshwater species: an evaluation of its sensitivity for application in. eld surveys. Ecotoxicology and Environmental Safety, v.56, p.442-448, 2003.
ROSA, MÁRIO. Geografia de Pelotas. Editora UFPel, 1985.