IDENTIFICAÇÃO DE ESPÉCIES DE Biomphalaria (GASTROPODA:PLANORBIDAE) NA REGIÃO SUL DO RIO GRANDE DO SUL, BRASIL.

PEPE, Michele Soares1; CARVALHO, Omar dos Santos2; CALDEIRA, Roberta Lima2; PASSOS, Liana Konovaloff Jannotti2; MULLER, Gertrud1; RODRIGUES, Alice Pozza1; AMARAL, Hugo Leonardo da Cunha1; BERNE, Maria Elisabeth Aires1

1 Depto de Microbiologia e Parasitologia – IB/UFPel
Campus Universitário  – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900. micpepe@ufpel.tche.br
2 Laboratório de Helmintoses Intestinais – CPqRR/FIOCRUZ
Av. Augusto de Lima, 1715 – Belo Horizonte/MG – CEP 30190-002

1.	INTRODUÇÃO

Moluscos de água doce do gênero Biomphalaria são hospedeiros intermediários do trematódeo Schistosoma mansoni. Este parasita tem como hospedeiro definitivo o homem, causando a doença conhecida como esquistossomose. No Brasil a área endêmica extende-se por 19 Estados com 7 milhões de indivíduos infectados e 70 milhões expostos ao risco (Katz & Peixoto, 2000).
Dentre as espécies de Biomphalaria que ocorrem no Brasil, são vetores dessa parasitose B. glabrata, B. tenagophila e B. straminae. Biomphalaria pererina e B. amazonica foram infectadas experimentalmente em laboratório, sendo consideradas hospedeiros em potencial do S. mansoni (Campos, 2001).
No Rio Grande do Sul são registradas B. tenagophila (Paraense & Deslandes, 1959), B. straminea (Cunha Neto, 1972), B. oligoza (Paraense, 1974), B. peregrina (Paraense, 1966), B. tenagophila guaibensis (Paraense, 1984), B. glabrata (Carvalho et al., 1998). A presença de S. mansoni no Estado está associada à descrição do primeiro foco de B. glabrata, encontrado em uma estação de piscicultura, localizada na cidade de Esteio (Teixeira et al, 1999). 
A correta identificação dos moluscos do gênero Biomphalaria é de suma importância para os estudos da esquistossomose (Paraense, 1975). A alta variabilidade morfológica e genética, o tamanho reduzido de alguns espécimes e a similaridade interespecífica dificulta a identificação correta das diferentes espécies desse molusco. Estudos moleculares são utilizados como ferramenta adicional à identificação morfológica. Protocolos já estabelecidos, principalmente associados à técnica de PCR e suas variações, permitem distinguir as diferentes espécies através de perfis específicos e distintos (Caldeira et al, 1998; Vidigal et al, 2000).
A manutenção de conhecimentos permanentemente atualizados sobre a distribuição geográfica das espécies dos moluscos transmissores de Schistosoma mansoni é fundamental para a preservação da eficiência dos programas de controle e vigilância epidemiológica da esquistossomose (Teles, 2005).
Devido à carência de informações atuais sobre a diversidade planorbídica desta região, o objetivo deste estudo foi identificar as espécies de Biomphalaria presentes na região sul do Rio Grande do Sul.

2.	MATERIAL E MÉTODOS

Durante o ano de 2005 foram realizadas coletas de moluscos em 15 localidades de 12 municípios do Estado, sendo estes: Arroio Grande, Bagé, Camaquã, Canguçu, Capão do Leão, Dom Pedrito, Jaguarão, Pelotas, Rio Grande, Rosário do Sul, Santa Vitória do Palmar, São Gabriel. Após, estes moluscos foram transportados ao laboratório, juntamente com água, vegetação ou lodo em que foram encontrados, sendo mantidos em aquários com aeração constante e alimentação com alface desidratada. A identificação morfológica dos moluscos foi realizada através de características das conchas e do tubo renal e anatomia dos órgãos reprodutivos, segundo Paraense (1975). Complementar a isso foi realizada a identificação molecular destes moluscos, sendo a extração de DNA realizada a partir da região cefalopodal das diferentes populações de Biomphalaria spp., utilizando o Wizard Genomic DNA Purification Kit (Promega) (Vidigal  et al. 2000). A caracterização molecular das diferentes espécies de Biomphalaria foi realizada através da técnica de PCR-RFLP de acordo com Caldeira et al. (1998), com a amplificação das regiões ITS, que incluem o gene da subunidade 5.8S do rDNA e os espaços transcritos ITS1 e ITS2 e corte com a enzima de restrição DdEI. Após foi realizada a eletroforese em gel de poliacrilamida 6% e corado com prata para visualização de diferentes perfis.

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

A partir da análise dos caracteres morfológicos foram identificadas três espécies de Biomphalaria: B. oligoza, B. peregrina e B. tenagophila guaibensis (tabela 1)

Tabela 1 – Espécies de Biomphalaria amostradas em municípios do Rio Grande do Sul, identificadas através de caracteres morfológicos. 

Município	Localidade	Espécie	
Arroio Grande	Barragem Chasqueiro	B. tenagophila guaibensis	
Bagé	EMBRAPA-CPPSul	B. peregrina	
Camaquã	Pacheca	B. tenagophila guaibensis	
Canguçu	Cabanha Cafundó	B. oligoza	
Capão do Leão	Fazenda Bela Vista	B. oligoza	
Dom Pedrito	Passinho do amor	B. tenagophila guaibensis	
Dom Pedrito	Chácara do Cedro	B. peregrina	
Dom Pedrito	Estrada do Meio	B. peregrina	
Jaguarão	Granja Bretanha	B. tenagophila guaibensis	
Pelotas	Barragem SANEP	B. tenagophila guaibensis	
Rio Grande	Rio Grande	B. peregrina	
Rosário do Sul	Estância Sta Ambrosina	B. peregrina	
Santa Vitória do Palmar	Estância Ipiranga	B. tenagophila guaibensis	
Santa Vitória do Palmar	Granja Figueira	B. tenagophila guaibensis	
São Gabriel	FEPAGRO-Forrageiras	B. oligoza	

Em alguns exemplares de B. tenagophila guaibensis foi observada uma pigmentação na parede do tubo renal, sendo essa característica não relatada por Paraense (1984). Dentre as espécies conhecidas no Brasil, a única que apresenta tubo renal pigmentado, e também crista, é Biomphalaria glabrata, a principal espécie transmissora do S. mansoni no Brasil (Paraense, 1975). Segundo Paraense (1972), o caráter definidor da B. glabrata é a crista pigmentada que se estende ao longo da superfície ventral do tubo renal, além de ser a principal característica para a diferenciação de B. tenagophila. A presença desta pigmentação no tubo renal de B. tenagophila guaibensis pode ser atribuída à variação intra-especifica da espécie, bem como a variação de coloração relacionada ao contato com as substâncias corantes dissolvidas nas águas dos criadouros (Paraense, 1972). Mas isso não atenua a possibilidade de diagnóstico equivocado dessa espécie, bem como ações sanitárias desnecessárias no combate a um possível foco de espécie hospedeira da esquistossomose, pois essa subespécie é sabidamente refratária ao S. mansoni (Paraense & Correa, 1987).
 As populações de B. peregrina estudadas apresentaram características específicas que concordam com as relatadas na descrição da espécie realizado por Paraense (1966); de forma semelhante, as diferentes populações de B. oligoza apresentaram caracteres similares aos descritos por Paraense (1974).

Figura 1 – Perfis de PCR-RFLP obtidos da digestão do produto amplificado da região ITS do DNAr utilizando a enzima DdeI das diferentes populações de Biomphalaria em gel de poliacrilamida 6% corado com prata. 1 – Controle Positivo (CP) de Biomphalaria oligoza ; 2 e 3 – Canguçu; 4 e 5 - Fazenda Bela Vista; 6 – FEPAGRO-Forrageiras; 7 – CP de Biomphalaria tenagophila guaibensis;  8 e 9 – Barragem SANEP; 10 e 11 – Barragem Chasqueiro; 12 e 13 – Granja Figueira; 14 e 15 – Passinho do Amor; 16 e 17 – Pacheca; 18 e 19 – Estância Ipiranga; 20 e 21 – Granja Bretanha; 22 e 23 – Alegrete; 24 – CP de Biomphalaria peregrina; 25 e 26 – EMBRAPA-CPPSul; 27 e 28 – Rio Grande; 29-30 –  Chácara do Cedro; 31 e3 2 – Estrada do Meio; 33 e 34 – Santa Ambrosina.

No presente estudo foi possível observar que a identificação molecular corrobora com os resultados obtidos através da análise morfológica (Figura 1), sendo instrumento essencial em caso de características duvidosas, como presença de pigmento no tubo renal de alguns exemplares B. tenagophila guaibensis. Resultados semelhantes foram observados por Caldeira et al (1998) e Vidigal et al. (2000), demonstrando que esses dois métodos diagnósticos são completamente compatíveis, sendo aconselhável a utilização do método tradicional como rotina e análise molecular em casos inconclusivos, visto o alto custo desta técnica. 

4. CONCLUSÕES

	É confirmada a ocorrência de Biomphalaria oligoza, B. peregrina e B. tenagophila guaibensis na região sul do Rio Grande do Sul, tanto na análise morfológica quanto na identificação molecular.
5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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CAMPOS, Y.R. Comparação das técnicas SSR-PCR ancorado, AP-PCR e Isoenzimas no estudo da variabilidade genética de Biomphalaria glabrata. 2001. 85 f. Dissertação de Mestrado (Biologia Celular e Molecular) - Fundação Oswaldo Cruz, Rio de Janeiro.
CARVALHO, O.S.; NUNES, I.M.; CALDEIRA, R.L. First report of Biomphalaria glabrata in the State of Rio Grande do Sul, Brazil. Memórias Instituto Oswaldo Cruz, v. 93, n.1, p. 39-40, 1998.
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PARAENSE, W.L. Estado atual da sistemática dos planorbídeos brasileiros. Arquivo Museu Nacional Rio de Janeiro, v.55, p. 105-128, 1975.
PARAENSE, W.L. Fauna planorbídica do Brasil, p. 213 – 239, 1972
PARAENSE, W.L. The synonymy and distribution of Biomphalaria peregrina in the Neotropical Region Revista Brasileira de Biologia, v. 26, p. 269-296, 1966.
TEIXEIRA, C.G.; ANJOS, C.B.; OLIVEIRA, V.C.; VELLOSO, C.F.P.; FONSECA, M.B.S.; VALAR, C.; MORAES, C.; GARRIDO, C.T.; AMARAL, R.S. Identification of a transmission focus of Schistosoma mansoni in the Southernmost Brazilian State, Rio Grande do Sul. Memórias Instituto Oswaldo Cruz, v. 94, n. 1, p. 9-10, 1999.
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