Diagnóstico Sorológico de leptospirose na espécie equina na ZONA SUL DO RIO GRANDE DO SUL, BRASIL
RASSIER, Gabriela1; RECUERO, Rebeca da Cunha1; RECUERO, Ana Lúcia Coelho1; BROD, Claudiomar Soares1; FERNANDES, Cláudia Pinho Hartleben1.
1-Centro de Controle de Zoonoses – Faculdade de Veterinária/UFPel
Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900  gabirassier@hotmail.com

1.	INTRODUÇÃO

A leptospirose é uma zoonose que acomete animais domésticos, silvestres e o homem, os quais podem se tornar portadores disseminar o agente no ambiente. A transmissão ocorre através da água contaminada por Leptospiras (Faine et al, 1999). Animais que vivem em áreas urbanas, cujas condições sanitárias e de infra-estrutura são precárias, junto a lixões, esgotos a céu aberto, depósitos de materiais descartados, proximidade com outras espécies animais, se constituem particularmente em população de risco (Barwick et al, 1997).
Na espécie eqüina a enfermidade foi descrita com apresentação subclínica, resultando em abortos, nascimentos de animais prematuros e debilitados. Os sintomas freqüentemente descritos são a febre, a icterícia, nefrite e complicações oculares (Hong et al, 1993). Os sorovares prevalentes em amostras de soro eqüino, detectados no teste de aglutinação microscópica são o Icterohaemorrhagiae, Pomona, Wolffi, Hardjo, Canicola, Ballum, Butembo, Bataviae, Pyrogenes, Javanica, Tarassovi, Panamá, Castellonis, Sejroe, Hebdomadis, Grippotyphosa (Hong et al, 1993, Linhares et al, 2005, Molnar et al, 2001, Swart et al, 1982).
O presente estudo foi realizado para identificar os sorovares prevalentes nas amostras de soro eqüino reagentes no teste de aglutinação microscópica (MAT), recebidas para diagnóstico de leptospirose no Laboratório de Zoonoses e Saúde Pública, departamento de Medicina Veterinária Preventiva,da UFPEL, Pelotas, Rio Grande do Sul, Brasil.

2.	MATERIAL E MÉTODOS

Amostras de soro:
	Foram utilizadas amostras de soro de 97 eqüinos recebidas no laboratório do Centro de Controle de Zoonoses da UFPEL (CCZ UFPEL) para diagnóstico de leptospirose. As amostras de sangue total foram submetidas à centrifugação a 3.000 rpm por 5 min, recolhido o soro sobrenadante, identificadas e congeladas a –20˚C até o momento do uso.
Teste de Aglutinação Microscópica (MAT)
	Foi utilizada a técnica de aglutinação microscópica (MAT) para a pesquisa de aglutininas anti Leptospira nas amostras de soros (Faine et al., 1999). O título de triagem utilizado foi de 100. Os antígenos utilizados foram 50 (Tabela 1), cultivados em meio EMJH enriquecido. Nos casos de coaglutinação, o sorovar que apresentou maior título foi considerado como prevalente. O diagnóstico foi realizado no Laboratório de Zoonoses e Saúde Pública, departamento de Medicina Veterinária Preventiva,da UFPEL, Pelotas, Rio Grande do Sul, Brasil. 
Análise dos Dados 
	Para a análise dos resultados obtidos, foi construído um banco de dados no programa EPI Info 6. O banco consta de identificação, procedência dos animais, data de coleta de amostras, reatividade na MAT e título de anticorpos dos sorovares reagentes.

Tabela 1- Sorovares de Leptospira utilizados na MAT
Sorogrupo	Sorovar	Amostra	Espécie genômica	
Australis	Australis	Ballico	L. Interrogans	
Australis	Bratislava	Jez Bratislava	L. Interrogans	
Autumnalis	Autumnalis	Akiyami A	L. Interrogans	
Autumnalis	Rachmat	Rachmat	L. Interrogans	
Bataviae	Bataviae	Van Tienem	L. Interrogans	
Bataviae	Bataviae	Swart	L. Interrogans	
Canícola	Canícola	Hond Utrecht IV	L. Interrogans	
Hebdomadis	Hebdomadis	Hebdomadis	L. Interrogans	
Icterohaemorrhagiae	Copenhageni	M 20	L. Interrogans	
Icterohaemorrhagiae	Icterohaemorrhagiae 	RGA	L. Interrogans	
Icterohaemorrhagiae	Copenhageni	Winjberg	L. Interrogans	
Icterohaemorrhagiae	Lai	Lai	L. Interrogans	
Pomona	Pomona	Pomona	L. Interrogans	
Pomona	Proechimys	1161 U	L. Interrogans	
Pyrogenes	Pyrogenes	Salinem	L. Interrogans	
Sejroe	Saxkoebing	Mus 24	L. Interrogans	
Sejroe	Wolffi	3705	L. Interrogans	
Sejroe	Hardjo	Hardjoprajitno	L. Interrogans	
Sejroe	Sejroe	M 84	L. Interrogans	
Sejroe	Hardjo	Lely 607	L. Interrogans	
Djasiman	Sentot	Sentot 90 C	L. Interrogans	
Djasiman	Djasiman	Djasiman	L. Interrogans	
Ballum	Castellonis	Castellon	L. Borgpetersenii	
Ballum	Ballum	Mus 127	L. Borgpetersenii	
Celledoni	Withcombi	Withcombi	L. Borgpetersenii	
Javanica	Javanica	Veldrat Batavia 46	L. Borgpetersenii	
Javanica	Poi	Poi	L. Borgpetersenii	
Mini	Mini	Sari	L. Borgpetersenii	
Tarassovi	Tarassovi	Prelepelitsin	L. Borgpetersenii	
Autumnalis	Butembo	Butembo	L. Kirshneri	
Cynopteri	Cynopteri	3522C	L. Kirshneri	
Grippotyphosa	Grippotyphosa	Moskva IV	L. Kirshneri	
Grippotyphosa	Grippotyphosa	Duyster	L. Kirshneri	
Louisiana	Louisiana	LSU 1945	L. Noguchii	
Panamá	Panamá	CZ 214 K	L. Noguchii	
Shermani	Shermani	1342 K	L. Santarosai	
Celledoni	Celledoni	Celledoni	L. Weilii	
Semaranga	Semaranga 	Veldrat Semarang 173	L. Meyeri	
Grippotyphosa	Grippotyphosa	Mandemakers	Desconhecida	
Icterohaemorrhagiae	Icterohaemorrhagiae	Kantorovic	Desconhecida	
Icterohaemorrhagiae	Icterohaemorrhagiae	Verdum	Desconhecida	
Doberdo	Rufino	RPE	Desconhecida	
Garcia	Garcia	Garcia	Desconhecida	
Australis	CCZ 27	CCZ 27	L. Interrogans	
Australis	CCZ 49	CCZ 49	L. Interrogans	
Canícola	CCZ 89	CCZ 89	L. Interrogans	
Canícola	CCZ 463	CCZ 463	L. Interrogans	
Desconhecida	CCZ 359 	CCZ 359 	Desconhecida	
Desconhecida	CCZ 81 	CCZ 81 	L. Noguchii	

3. 	RESULTADOS E DISCUSSÃO

A freqüência de soropositividade na MAT foi de 72,15%. Das 97 amostras de animais suspeitos de Leptospirose, 17 (27,85%) foram negativas e 70 (72,15%) foram positivas para um ou mais sorovares com títulos iguais ou superiores a 100. Das amostras reagentes, os sorovares prevalentes foram a cepa CCZ 49 (24,3%) com título variando de 100 a 3.200, cepa CCZ 27 (14,3%), ambos pertencentes ao sorogrupo Australis, sorovar bratislava (10,0%), sorovar copenhageni (5,7%) (Figura 1). O maior título encontrado (3.200) ocorreu para o sorogrupo Australis cepa CCZ 49, sorovar Bratislava (1.600) e sorovar Copenhageni (800).
A freqüência de soros positivos, descrita neste estudo foi semelhante à descrita no estado do Pará (Molnar et al, 2001) mas inferior ao descrito em outras regiões do país (Giorgi, 1981, Linhares et al, 2005), porém os soros utilizados eram provenientes de animais com suspeita clínica de leptospirose, diferindo de estudos epidemiológicos realizados em populações aparentemente sadias.

Figura 1- Sorovares prevalentes nas amostras de soro eqüino.

Os sorovares prevalentes encontrados foram semelhantes aos descritos como comuns para a espécie eqüina (Linhares et al, 2005), porém a recomendação da inclusão de cepas isoladas locais (Levett, 2001) aumentou o número de soros reagentes e as duas cepas isoladas da região Sul, apresentaram as maiores prevalências.

4. CONCLUSÕES
Concluímos que amostras de soro da espécie eqüina devem ser analisadas com o maior número possível de sorovares, já que esta espécie animal é mantida nos centros urbanos e suburbanos como animais de tração para fretes de mercadorias como materiais de construção e lenha, convivendo em ambientes diversos e constantemente em contato com áreas onde há a presença de roedores, cães, bovinos e suínos, mantidos nas áreas suburbanas das cidades. Ainda, a inclusão de cepas isoladas de animais presentes no ecossistema aumenta a sensibilidade da MAT para o diagnóstico e identificação de soros reagentes.

5.	REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

BARWICK, R.S; MOHAMMED, H.O.; MCDONOUGH, P.L.; WHITE, M.E. Risk factors associated with the likelihood of Leptospiral seropositivity in horses in the state of New York. American Journal Veterinary Research, 1997, 58, p.1097-1103.
FAINE, S. ADLER, B. BOLIN, C. PEROLAT, P. Leptospira and Leptospirosis, p.296. MediSci, Melbourne, Austrália, 1999.
GIORGI, W. Leptospirose em eqüinos: inquérito sorológico e isolamento de Leptospira icterohaemorrhagiae de feto abortado. Instituto Biológico de São Paulo, 1981, 47, p. 47-53.
HONG, C.B.; DONAHUE, J.M.; GILES, R.C.; PETRITES-MURPHY, M.B.; POONACHA, K.B.; ROBERTS, A.W.; SMITH, B.J.; TRAMONTIN, R.R.; TUTTLE PA; SWERCZEK TW. Equine abortion and stillbirth in central Kentucky during 1988 and 1989 following seasons. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation, 1993, 5, p. 560-566. 
LEVETT, P. N. Leptospirosis. Clinical Microbiology Review, 2001, 14, p.296-326.
LINHARES, G. F. C.; GIRIO, R. J. S.; LINHARES, D. C. L.; MONDEIRO, L. C. M.; OLIVEIRA, A. P. A. Sorovares de Leptospira interrogans e respectivas prevalências em cavalos da microrregião de Goiânia, GO. Ciência Animal Brasileira, 2005, 6, p. 255-259.
MOLNAR, E.; DIAS, H. L. T.; MOLNAR, L. Estudo comparativo entre o teste da soroaglutinação microscópica (SAM) e o imunoensaio ligado à enzima (ELISA) para o diagnóstico da leptospirose eqüina. Revista Brasileira de Medicina Veterinária, 2001, 23, p. 151-155.
SWART, K. S.; CALVERT, K.; MENEY, C. The prevalence of antibodies to serovars of Leptospira interrogans in horses. Australian Veterinary Journal, 1982, 59, p. 25-27.