EFEITO DA SOMATOTROPINA RECOMBINANTE BOVINA SOBRE A INTEGRIDADE DA MEMBRANA PLASMATICA DE ESPERMATOZÓIDES BOVINO PÓS-CONGELAMENTO

DUARTE, Péricles do Nascimento1 ;VIEIRA, Marcelo Brandi1; BIANCHI,Ivan1; MASCHIO, Eder1; CALDERAM K.érlin 1 ; FONSECA, Marcio1; CORRÊA, Marcio Nunes1

1 Faculdade de Veterinária, Depto de Clínicas Veterinárias, UFPel
periclesrs@yahoo.com.br

Universidade Federal de Pelotas
Faculdade de Veterinária - Departamento de Clínicas Veterinárias
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1. INTRODUÇÃO

O GH ou somatotropina (ST) é um hormônio pituitário que regula inúmeros mecanismos do crescimento animal, metabolismo de nutrientes além de afetar as funções reprodutivas (Pivato et al., 2004). O tratamento com somatotropina exógena rBST (hormônio do crescimento recombinante bovino) aumenta a concentração plasmática do Fator de Crescimento semelhante a Insulina (IGF-I) que é o principal mediador da ação do hormônio do crescimento, sendo um importante agente mitogênico para o desenvolvimento das células germinativas e manutenção dos espermatozóides. 
 Seu uso pode melhorar as taxas de fertilização, por agir sobre as características dos espermatozóides ou favorecer seu metabolismo. A maior quantidade de receptores para a somatotropina é encontrada no fígado, sendo responsável pela grande parte do IGF-I produzido no organismo (LUCY, 2000). Em machos foi demonstrado que a Somatotropina (ST) pode possuir o papel de controle da espermatogênese e da esteroidogênese. As células de Sertolli é uma das maiores fontes testiculares de IGF-I (Ritzen EM.). Além disso, receptores para IGF-I têm sido detectados nas células de Leydig(Lin et al., 1986).
A inseminação artificial é a biotecnologia mais prática e econômica, seu conhecimento é de fácil acesso. Porém o processo de criopreservação das células espermáticas resulta em diminuição da fertilidade.(Gonzalez, 2004). Para que se tenham bons resultados com o congelamento de sêmen bovino é importante que o sêmen possua as melhores características qualitativas possíveis, para que após o descongelamento, já no trato reprodutivo da fêmea, exista a possibilidade deste ter capacidade fertilizante. A hipótese deste trabalho é que o rBST tenha efeito positivo sobre a integridade de membrana plasmática do espermatozóide, garantindo assim melhor qualidade de sêmen. 
O objetivo deste estudo foi avaliar o efeito do tratamento com rBST sobre a integridade de membrana plasmática do espermatozóide bovino após o processo de congelamento.

2. MATERIAL E MÉTODOS

O presente estudo foi conduzido nas dependências da Central de Reprodução ABS/PECPLAN, localizado no município de Rosário do Sul - RS. Foram utilizados 20 Touros, predominantemente de raças européias, divididos aleatoriamente em dois grupos de 10 animais cada, um foi tratado com rBST(G I) e o outro recebeu apenas placebo (G II). O GI recebeu, 500 mg/touro de rBST (Lactotropin®/ELANCO) 
O plano de atividades seguiu a seguinte rotina: coleta de sangue e sêmen e congelamento do sêmen nos dias 0, 14, 28, 42, 56, 70, aplicação do tratamento (GI) e placebo (GII) nos dias 0 e 14. As coletas de sêmen foram feitas utilizando o mesmo método praticado na central, ou seja, através de vagina artificial, por ser o método mais próximo do fisiológico. O diluente utilizado para todos congelamentos de sêmen foi o Bioxel® (IMV, L'Aigle, França).
A avaliação da integridade de membrana espermática foi realizada por fluorescência, através das sondas Diacetato de Carboxifluoresceína (CFDA) e Iodeto de Propídio (IP). A avaliação foi feita em microscópio de epifluorescência (Olympus BX 51, América INC), através de excitação em filtro WU sob aumento de 400x. Foram contados 200 espermatozóides em uma mesma lâmina e classificadas conforme sua coloração em íntegros (espermatozóides corados em verde em toda sua extensão) e lesados (espermatozóides corados em vermelho).
Para analisar os resultados foi realizada análise de variâncias e comparação de médias de acordo com o teste de Tukey HSD, utilizando o software Statistix 8 for Windows.

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

   Os resultados encontrados demonstraram que a taxa de espermatozóides com membrana plasmática integra foi de 49% no grupo tratado com rBST (GI) e no grupo placebo esta mesma taxa foi de 42%, diferindo entre si (p<0.001). Muitos estudos com o hormônio do crescimento, incluindo a espécie humana e roedores, foram conduzidos relacionando infertilidade reprodutiva com deficiência deste hormônio, demonstrado efeito satisfatório após tratamento com rBST exógeno (Gravance et al. 1997, Martin et. al, 1997).
Embora existam poucos estudos referentes a avaliação de integridade de membrana em espermatozóides bovinos, Sauerwein et. al (2000), relata que o GH pode agir indiretamente elevando as concentrações de IGF-I, e influenciando na espermatogênese e da esteroidogênese. 
Os resultados apresentados sobre o tratamento com rBST, demonstram que há um aumento na quantidade de espermatozóides com a membrana plasmática integra sugerindo que haja um acréscimo nas taxas de fertilização, concordando com Souza et al. (2005), que demonstrou que o GH além de reduzir as anormalidades espermáticas elevou a motilidade e a fertilização. Devido ao fato da concentração espermática ser constante para o congelamento de sêmen, as taxas de fertilização estão diretamente atribuídas a alterações das características dos espermatozóides. Estas alterações podem ser atribuídas a dois diferentes processos, primeiro o efeito do GH na espermatogênese e segundo o efeito no metabolismo espermático (Weinbauer et. al 1990). 
 Os mecanismos que justificam estes efeitos são complexos e o envolvimento do rBST na espermatogênese é atribuído ao efeito dos hormônios gonadotróficos (FSH,LH), esteróides (testosterona) e ao IGF-I. Fraser et. al (1991) pode comprovar o envolvimento direto do GH no eixo gonadotróficos, por ter encontrado receptores específico mRNA para o GH na hipófise. 

4. CONCLUSÃO

Com base nestes resultados pode-se concluir que o tratamento com rBST obteve efeito benéfico sobre a integridade da membrana plasmática de espermatozóides bovinos.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

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