EFEITO MATERNO E FONTES DE PÓLEN NA OBTENÇÃO DE HAPLÓIDES E DE DUPLO-HAPLÓIDES EM TRIGOS (Triticum aestivum L.)

SILVA, José Antonio Gonzalez da1; CARVALHO, Fernando Irajá Félix de2; MARINI, Naciele1; BERTAN, Ivandro1 ; HARTWIG, Irineu1; SCHMIDT, Douglas André Mallmann1; VALÉRIO, Igor Pires1; TERRES, Laerte Reis1; CRESTANI, Maraisa1;  ZANATTA, Oscar1.

1,2Centro de Genômica e Fitomelhoramento – CGF-FAEM/UFPel
Campus Universitário – Capão do Leão – CEP 96010-900.

1. INTRODUÇÃO

	A permanência da estrutura verde da planta por um período mais prolongado de tempo (carácter “stay-green), até o enchimento de grãos, além de possibilitar maior fotossíntese, poderá auxiliar a planta de forma direta, no desenvolvimento de uma maior tolerância a presença de moléstias, principalmente necrotróficas (SILVA, 1999).
	Com a obtenção de linhas homozigotas pela duplo-haploidização a variância aditiva é maximizada, os efeitos não aditivos são neutralizados e as vantagens em caracteres quantitativos podem ser maiores, uma vez que a seleção é realizada primordialmente com base na ação gênica de aditividade, não havendo interferência dos efeitos de dominância e epistasia (SILVA, 2002). A técnica desenvolvida por LAURIE & BENNETT (1987) no cruzamento trigo x milho propiciou o entendimento da participação com menor intensidade do genótipo e maior eficiência na obtenção de haplóides, em relação as dificuldades encontradas na cultura de anteras.
O presente trabalho teve como objetivo verificar a presença de efeito materno e de fontes de pólen nos caracteres que expressam eficiência da técnica de duplo-haplóides em genótipos de trigo portadores do carácter “stay-green”.

2. MATERIAL E MÉTODOS

As sementes F1 obtidas foram semeadas em baldes nos dois anos de condução do experimento, sendo utilizados oito épocas distintas com intervalos de dez dias, objetivando facilitar o cruzamento artificial com pólen de milho.  
Como fontes de pólen foram utilizadas as cultivares de milho híbrido AG6018, BR 400 e PAMPEANO, que foram semeadas em intervalos de sete dias em ambiente com controle de temperatura. 
No 3º ou 4º dia após a emasculação, foram realizadas as polinizações com pólen de milho, recém coletado da planta doadora. Após, as espigas foram coletadas e levadas ao Laboratório de Di-haplóides  e Hidroponia para o resgate de embriões em câmara de fluxo laminar empregando microscópio estereoscópio. Decorrido este período, as plântulas haplóides desenvolvidas foram retiradas do tubo de ensaio e transferidas para potes contendo vermiculita. Após 40 a 60 dias, as plântulas foram colocadas em um becker  com solução de colchicina (0,25%) e DMSO (dimethyl sulfoxide 2%) por 3 a 4 horas, para duplicação dos cromossomos. A partir deste período, os genótipos foram transplantados em potes com terra e mantidos em casa de vegetação para o desenvolvimento de afilhos férteis e obtenção das sementes duplo-haplóides. 

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

	Das 532 espigas de trigo polinizadas com milho nos anos de 2003 e 2004 foram obtidos 8611 grãos cheios, 551 embriões haplóides resgatados, 264 plantas haplóides desenvolvidas e 137 genótipos duplo-haplóides formados. 

Tabela 1. Desempenho obtido nos caracteres número de grãos cheios formados (NGC), número de embriões haplóides resgatados (NEH), número de plantas haplóides formadas (NPH) e número de plantas duplo-haplóides obtidas (NPD) em dois anos de avaliação do cruzamento TB438♂ x TB188♀ e recíproco empregando três fontes de pólen (milho AG6018, BR400 e PAMPEANO-PAMP). FAEM/UFPel, 2005.

ANO	GEN	FP	NEP	NGC		NEH		NPH		NPDH		
03	438	BR400	61	1118	18,32	78	1,27	36	0,59	21	0,34	
03	438	AG6018	44	760	17,27	46	1,04	25	0,56	12	0,27	
03	438	PAMP	39	568	14,56	33	0.84	14	0,35	5	0,12	
03	188	BR400	50	851	17,02	81	1,62	52	1,04	33	0,66	
03	188	AG6018	47	694	14,76	52	1,10	36	0,76	21	0,44	
03	188	PAMP	35	498	14,22	24	0,68	6	0,17	3	0,08	
04	438	BR400	54	917	16,98	49	0,90	26	0,48	14	0,25	
04	438	AG6018	57	981	17,21	51	0,89	19	0,33	7	0,12	
04	438	PAMP	31	471	15,19	22	0,70	7	0,22	1	0,03	
04	188	BR400	42	715	17,02	51	1,21	13	0,30	8	0,19	
04	188	AG6018	43	636	14,79	47	1,09	21	0,48	9	0,20	
04	188	PAMP	29	402	13,86	17	0,58	9	0,31	3	0,10	
TOT	-	-	532	8611		551		264		137		
NEP= número de espigas de trigo polinizadas com milho; = média

	Considerando o ano de 2003, a população TB188♀ empregando a fonte de pólen do genótipo de milho BR400 em comparação a TB438♀ utilizando este mesmo polinizador (código 1 e 4), não detectou diferenças entre os caracteres testados. Na população TB188♀ versus TB438♀ polinizadas com milho híbrido AG6018 (código 2 e 5) também não foi detectado efeitos distintos e, na população TB188♀ versus TB438♀ utilizando como genitor paterno o milho PAMPEANO, diferenças também não foram observadas na expressão dos caracteres avaliados. Diferenças foram observadas entre as fontes de pólen do genótipo de milho AG6018 em relação ao PAMPEANO (código 2 e 3) quanto ao número de embriões haplóides resgatados na população TB188♀. No entanto, diferenças entre as fontes de pólen BR400 e AG6018 não foram detectadas.

Tabela 2. Teste t aplicado aos tratamentos genótipo (GEN) e fontes de pólen (FP) sobre os caracteres número de grãos cheio formados (NGC), número de embriões haplóides resgatados (NEH), número de plantas haplóides formadas (NPH) e número de plantas duplo-haplóides obtidas (NPDH) no ano de 2003. FAEM/UFPel, 2005.
2003	GEN♀	FP	NGC	NEH	NPH	NPDH	CÓDIGO	
	TB 188	BR400	17,02	1,62	1,04	0,66	1	
	TB 188	AG6018	14,76	1,10	0,76	0,44	2	
	TB 188	PAMPEANO	14,22	0,68	0,17	0,08	3	
	TB 438	BR400	18,32	1,27	0,58	0,34	4	
	TB 438	AG6018	17,27	1,04	0,56	0,27	5	
	TB438	PAMPEANO	14,56	0,84	0,35	0,12	6	
			CÓDIGO					
NEH	1	2	3	4	5	6	NGC	
1	-	ns	Ns	ns	ns	ns	1	
2	ns	-	Ns	*	ns	ns	2	
3	*	*	-	*	ns	ns	3	
4	ns	ns	Ns	-	ns	ns	4	
5	ns	ns	Ns	ns	-	ns	5	
6	ns	ns	Ns	*	ns	-	6	
NPDH	1	2	3	4	5	6	NPH	
1	-	ns	*	ns	ns	*	1	
2	ns	-	Ns	ns	ns	ns	2	
3	*	ns	-	ns	ns	ns	3	
4	ns	ns	Ns	-	ns	ns	4	
5	ns	ns	Ns	ns	-	ns	5	
6	*	ns	Ns	*	ns	-	6	
*Significativo a 5 % de probabilidade de erro pelo teste t; ns= não significativo.
	
	Na Tabela 3, considerando o ano de 2004, diferenças também foram constatadas em relação as fontes de pólen para o número de embriões haplóides na população TB188♀, indicada pela superioridade do genótipo BR400 sobre o PAMPEANO (código 1 e 3). Resultado similar também foi observado comparando o AG6018 com PAMPEANO (código 2 e 3) que diferiram entre si com médias de 1,09 e 0,58 embriões recuperados por espiga. Entretanto, os caracteres das etapas seguintes não evidenciaram diferenças, possivelmente, pela morte de um grande número de plântulas. Além disto, neste ano de avaliação (Tabela 3) não foram constatadas diferenças entre as distintas fontes de pólen empregadas no estudo levando em considerando a população TB 438♀, exceto no caráter número de plantas duplo-haplóides entre BR400 versus PAMPEANO (código 4 e 6), que diferiram estatisticamente. 

Tabela 3. Teste t aplicado aos tratamentos genótipo (GEN) e fontes de pólen (FP) sobre os caracteres número de grãos cheio formados (NGC), número de embriões haplóides resgatados (NEH), número de plantas haplóides formadas (NPH) e número de plantas duplo-haplóides obtidas (NPDH) no ano de 2004. FAEM/UFPel, 2005.
ANO	GEN ♀	FP	NGC	NEH	NPH	NPDH	CÓDIGO	
	TB 188	BR400	17,02	1,21	0,30	0,19	1	
2004	TB 188	AG6018	14,79	1,09	0,48	0,20	2	
	TB 188	PAMPEANO	13,86	0,58	0,31	0,10	3	
	TB 438	BR400	16,98	0,90	0,48	0,25	4	
2004	TB 438	AG6018	17,21	0,89	0,33	0,12	5	
	TB438	PAMPEANO	15,19	0,70	0,22	0,03	6	
			CÓDIGO					
NEH	1	2	3	4	5	6	NGC	
1	-	ns	ns	ns	Ns	ns	1	
2	ns	-	ns	ns	Ns	ns	2	
3	*	*	-	ns	*	ns	3	
4	ns	ns	ns	-	Ns	ns	4	
5	ns	ns	ns	ns	-	ns	5	
6	ns	ns	ns	ns	ns	-	6	
NPDH	1	2	3	4	5	6	NPH	
1	-	ns	ns	ns	ns	ns	1	
2	ns	-		ns	ns	ns	2	
3	ns	ns	-	ns	ns	ns	3	
4	ns	ns	ns	-	ns	ns	4	
5	ns	ns	ns	ns	-	ns	5	
6	ns	ns	ns	*	ns	-	6	
*Significativo a 5 % de probabilidade de erro pelo teste t; ns= não significativo.

4. CONCLUSÃO
	As fontes de pólen são de extrema importância para obtenção de embriões haplóides e como conseqüência na produção de duplo-haplóides no cruzamento trigo e milho. O favorecimento na obtenção de grãos cheios, embriões e plantas haplóides e de duplo-haplóides, não têm apoio na hipótese de efeito materno em trigo.
5. REFERÊNCIAS BIBILOGRÁFICAS
LAURIE, D.A.; BENNETT, M. D. Wheat x Maize hybridization and the production of haploid wheat plants. In: International Wheat Genetics Symposium, 7., 1988, Cambridge, U.K. Proceedings. Cambridge, p. 349 – 354, 1987.
SILVA, J.A.G.; CARVALHO, F.I.F.; SILVA, S.A.; BARBIERI, R.L.; MARCHIORO, V.S.; LORENCETTI, C.; BENIN, G. Temperatura e seus efeitos na polinização para a obtenção de embriões haplóides de trigo em cruzamento intergenérico. Revista Brasileira de Agrociência, v.8, n.2, p.97-102, 2002.