SENSIBILIDADE A ANTIMICROBIANOS DE CEPAS DE Escherichia coli PRODUTORAS DE TOXINA SHIGA (STEC) DE SOROTIPOS RELACIONADOS COM SÍNDROME HEMOLÍTICA URÊMICA

CONCEIÇÃO, Rita de Cássia dos Santos1; DIAS, Priscila Alves1; HENTGES, Andréa1; ASSIS BRASIL, Nathalia Dode1; ALEIXO, José Antônio Guimarães2; TIMM, Cláudio Dias1

1 Inspeção de Leite e Derivados, Faculdade de Veterinária, UFPel. E-mail: inspleit@ufpel.tche.br  
Campus universitário, prédio 34, Pelotas, RS, CEP 96010-900
2 Laboratório de Imunologia Aplicada, Centro de Biotecnologia, UFPel 

1. INTRODUÇÃO

Diversas enfermidades em humanos, como diarréia, colite hemorrágica e síndrome hemolítica urêmica, têm sido associadas com Escherichia coli produtoras de toxina shiga (STEC) (Karmali, 1989). A síndrome hemolítica urêmica (SHU) é uma microangiopatia grave caracterizada por anemia hemolítica com eritrócitos fragmentados, trompocitopenia e falha renal aguda (Cleary, 2004).
Os bovinos são considerados o principal reservatório de STEC (Kaper et al., 2004). Alta ocorrência de STEC tem sido identificada em fezes de bovinos no Brasil (Cerqueira et al., 1999; Leomil et al., 2003; Moreira et al., 2003; Irino et al., 2005). O principal fator de virulência de STEC é uma potente citotoxina denominada toxina shiga, da qual existem dois tipos: Stx1 e Stx2. Outro fator de virulência descrito é a intimina, produto do gene eae (de E. coli attachment and effacing), uma proteína de membrana externa envolvida na adesão da bactéria aos enterócitos (Nataro & Kaper, 1998).
Antimicrobianos são utilizados na prevenção e no tratamento de infecções assim como promotores de crescimento para animais de produção. A exposição subletal repetida a agentes antimicrobianos não só promove a resistência adaptativa, como também confere diminuição na sensibilidade aos antimicrobianos utilizados. Embora infecções causadas por STEC não sejam tratadas com antimicrobianos, estudos recentes têm relado aparecimento de cepas de STEC resistentes. (Galland et al., 2001)
O trabalho teve por objetivo determinar o perfil de resistência a antimicrobianos de cepas de STEC isoladas de fezes de bovinos de sorotipos relacionados com SHU.  

2. MATERIAL E MÉTODOS

	Foram utilizadas 12 cepas de STEC do banco de cepas do Laboratório de Inspeção de Produtos de Origem Animal (LIPOA) da Universidade Federal de Pelotas isoladas de fezes de bovinos de corte e de leite no Rio Grande do Sul. Os sorotipos e os perfis moleculares das cepas quanto à presença dos genes stx1, stx2 e eae estão demonstrados na Tabela 1. Todas as cepas estudadas pertencem a sorotipos previamente associados à SHU (http://www.lugo.usc/ecoli).

Tabela 1: Cepas de STEC utilizadas no estudo, sorotipos, perfil molecular e fonte do isolado.
Identificação	Sorotipo	Perfil molecular	Fonte	
LIPOA 1035	O22:H8	stx1- stx2+ eae-	Bovino de corte	
LIPOA 1039	O22:H8	stx1- stx2+ eae-	Bovino de corte	
LIPOA 1064	O22:H8	stx1- stx2+ eae-	Bovino de corte	
LIPOA 1141	O22:H8	stx1- stx2+ eae-	Bovino de leite	
LIPOA 1164	O22:H8	stx1- stx2+ eae-	Bovino de leite	
LIPOA 1132	O91:H21	stx1+ stx2+ eae-	Bovino de leite	
LIPOA 1170	O91:H21	stx1- stx2+ eae-	Bovino de leite	
LIPOA 1155	O112:H2	stx1- stx2+ eae-	Bovino de leite	
LIPOA 1100	O113:H21	stx1- stx2+ eae-	Bovino de corte	
LIPOA 1103	O113:H21	stx1- stx2+ eae-	Bovino de corte	
LIPOA 1124	O163:H19	stx1+ stx2+ eae-	Bovino de leite	
LIPOA 1003	O174:H21	stx1- stx2+ eae-	Bovino de corte	

As cepas, após recuperação em Infusão de Cérebro e Coração (BHI, Oxoid, Basingstoke, Hampshire, England) a 37ºC por 24 h, foram testadas quanto à sensibilidade a antimicrobianos pelo Método de Difusão em Disco, usando ágar Mueller-Hinton (Acumedia, Baltimore, Maryland, USA) e incubação a 37°C por 18-24h, de acordo com o NCCLS (Comitê Nacional para Padrões de Laboratório Clínico). Os antimicrobianos utilizados foram ampicilina (10 mcg), cloranfenicol (30 mcg), norfloxacina (10 mcg), tetraciclina (30 mcg), ciprofloxacina (5 mcg), ácido nalidíxico (30 mcg), ceftriaxona (30 mcg), cefalotina (30 mcg) e trimetoprim (5 mcg) (Sensifar, São Paulo). 

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os resultados de sensibilidade e resistência das cepas de STEC estudadas aos antimicrobianos testados estão demonstrados na Figura 1. Nenhum isolado (0%) foi resistente à norfloxacina, à ciprofloxacina, ao trimetoprim, ao ácido nalidíxico e à ceftriaxona e todos (100%) foram resistentes à cefalotina. Dois isolados (12,7%) apresentaram resistência total ou parcial à tetraciclina e ao cloranfenicol e dez isolados (83,3%) foram resistentes à ampicilina. Trabalhos realizados por outros pesquisadores encontraram resultados similares a esse experimento. Radu et al. (2001) verificaram o perfil de resistência de 28 isolados de STEC O157:H7 e observaram que 13% dos isolados eram resistentes ao ácido nalidíxico, 10% ao cloranfenicol e 7% à tetraciclina. Mora et al. (2005) analisaram o perfil de resistência de 722 cepas de STEC isoladas de humanos, bovinos, ovelhas e alimentos na Espanha e observaram que 32% dos isolados foram resistentes à tetraciclina, 10% à ampicilina, 8% ao trimetoprim e 7% ao cloranfenicol. No presente experimento, ampicilina foi o antimicrobiano que apresentou diferença mais significativa em relação ao trabalho de Mora et al. (2005). A ampicilina não é mais a droga de escolha para o tratamento de infecções causadas por Escherichia coli, haja vista o aparecimento de muitas cepas resistentes a esse antimicrobiano (Reese et al., 2002). 

Figura 1 – Perfis de resistência e sensibilidade das cepas de STEC estudadas a antimicrobianos.

4. CONCLUSÃO

As cepas de STEC estudadas, isoladas a partir de amostras de fezes de bovinos, apresentaram sensibilidade à maioria dos antimicrobianos testados. 

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

CERQUEIRA, A.M.F.; GUTH, B.E.C.; JOAQUIM, R.M.; ANDRADE, J.R.C. High ocurrence of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) in healthy cattle in Rio de Janeiro State, Brazil. Vet. Microbiol., v. 70, p. 111-121, 1999.
CLEARY, T.G. The role of shiga-toxin-producing Escherichia coli in hemorrhagic colitis and hemolytic uremic syndrome. Ped. Infect. Dis., p. 260-265, 2004.
GALLAND, J.C.; HYATT, D.R.; CRUPPER, S.S.; ACHESON, D.W. Prevalence antibiotic susceptibility, and diversity of Escherichia coli O157:H7 isolates from a longitudinal study of beef cattle feedlots. Appl. Environ. Microbiol., v. 67, p. 1619-1627, 2001.
IRINO, K.; KATO, M.A.M.F.; VAZ, T.M.I.; RAMOS, I.I.; SOUZA, M.A.C.; CRUZ, A.S.; GOMES, T.A.T.; VIEIRA, M.A.M.; GUTH, B.E.C. Sorotypes and virulence markers of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) isolated from dairy cattle in São Paulo, Brazil. Vet. Microbiol., v. 105, p. 29-36, 2005.
KAPER, J.B.; NATARO, J.P.; MOBLEY, H.L.T. Pathogenic Escherichia coli. Nature Rev., v. 2, p. 123-140, 2004.
KARMALI, M.A. Infection by verocytotoxin-producing Escherichia coli. Clin. Microbiol. Rev., v. 2, p. 5-28, 1989.
LEOMIL, L.; AIDAR-UGRINOVICH, L.; GUTH, B.E.C.; IRINO, K.; VETTORATO, M.P.; ONUMA, D.L.; CASTRO, A.F.P. Frequency of Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) isolates among diarrheic and non-diarrheic calves in Brazil. Vet. Microbiol., v. 97, p. 103-109, 2003.
MORA, A.; BLANCO, J.E.; BLANCO, M.; ALONSO, M.P.; DHABI, G.; ECHEITA, A.; GONZÁLEZ, E.A.; BERNÁRDEZ, M.I.; BLANCO, J. Antimicrobial resistance of Sigha toxin (verotoxin) – producing Escherichia coli O157:H7 and non-O157 strains isolated from humans, cattle, sheep and food in Spain. Res. Microbiol., v. 156, p. 793-806, 2005.
MOREIRA, C.N.; PEREIRA, M.A.; BROD, C.S.; RODRIGUES, D.P.; CARVALHAL, J.B.; ALEIXO, J.A.G. Shiga toxin-producing Escherichia coli (STEC) isolated from healthy dairy cattle in southern Brazil. Vet. Microbial., v. 93, p. 179-183, 2003.
NATARO, J.P.; KAPER, J.B. Diarrheagenic Eschericha coli. Clin. Microbiol. Rev., v. 11, p. 142-201, 1998.
RADU, S.; LING, O.W.; RUSUL, G.; KARIM, M.I.A.; NISHIBUCHI, M. Detection of Escherichia coli O157:H7 by multiplex PCR and their characterization by plasmid profiling, antimicrobial resistance, RAPD e PFGE analyses. J. Microbiol. Methods, v. 46, p. 131-139, 2001.
REESE, R.E.; BETTS, R.F.; GUMUSTOP, B. Manual de Antibióticos, 3ª ed., Rio de Janeiro: Médica e Científica, 2002. 719 p.