FREQÜÊNCIA DE TÍTULOS DE ANTICORPOS IgG ANTI-B.equi  EM ÉGUAS GESTANTES.

LOPES, Lorena Lacava1; GÖTZE, Marcelo Mendes1; NIZOLI, Leandro Quintana1; FELIX, Samuel Rodrigues1; SILVA, Sergio Silva1.

1Laboratório de Doenças Parasitárias – DVP – Fac. Veterinária/UFPel;
Campus Universitário  – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900. lorenallopes@yahoo.com.br

1.	INTRODUÇÃO

Babesia equi e B. caballi são hemoparasitos que causam a babesiose eqüina. A B. caballi é transmitida pelo Anocentor nitens (Roby & Anthony, 1963) e, no Brasil, sabe-se que o carrapato Boophilus microplus pode transmitir B. equi (Guimarães et al., 1998a,b; Heuchert et al., 1999). Durante a fase clínica da infecção, os sintomas clínicos da babesiose são febre, hemorragias petequiais, podendo ocorrer à morte do animal. Durante a fase crônica, pode ocorrer edema abdominal e nas extremidades, como também, apatia, e anorexia. Anticorpos maternais, contra B. caballi e B. equi, começam a cair constantemente até os quatro meses após o nascimento (Donnelly et al., 1982); Contudo em áreas endêmicas é esperado acontecer à infecção primária, antes da redução dos anticorpos colostrais. 
Hoje em dia, uma grande importância da babesiose eqüina está relacionada à transferência de áreas endêmicas para áreas livres, limitando a negociação internacional de animais. O objetivo do presente estudo foi determinar a prevalênica da produção de anticorpos IgG anti-B. equi em éguas gestantes, em condições naturais de campo no RS.

2.	MATERIAIS E MÉTODOS

Esse estudo foi realizado com eqüinos semiconfinados, mantidos sob mesmas condições de campo e estabulação em um haras, situado no município de Bagé, RS, Brasil. O haras selecionado destina-se a criação comercial de eqüinos da raça Puro Sangue Corrida (PSC). 
O manejo sanitário dos eqüinos seguia um programa de vacinação e vermifugação contra as principais enfermidades da espécie. O experimento foi conduzido com 14 éguas da raça PSC, de origem nacional e internacional, com idades compreendidas entre 3 e 22 anos. 
Os animais foram pré-selecionados a partir da reação de imunofluorescência indireta (RIFI), sendo todos portadores da infecção. Foram coletadas amostras de 5ml de sangue, mediante punção da veia jugular em tubos Vacutainer. As amostras foram mantidas em repouso durante 3 horas e foram centrifugadas a 3000 rpm por 5 minutos, para a obtenção dos soros, os quais, foram armazenados em alíquotas de 2ml e armazenados a -20°C para posterior estudo de anticorpos. 
Os soros foram analisados pela reação de imunofluorescencia indireta (RIFI) com seus respectivos controles positivos e negativos (Cunha, 1993), para a detecção de IgG contra B. equi.  Utilizou-se o conjugado anti-IgG eqüina, produzido em coelho com isotiocianato de fluoresceina (Sigma), em diluições de 1:160 com solução tampão fosfato (PBS). 
Os antígenos utilizados no estudo procederam do cultivo in vivo, de eqüinos esplenectomizados apresentando 70% dos eritrocitos parasitados por B. equi. Os soros controles foram diluídos a 1:80 em PBS (pH 7,2). As amostras de soro foram processadas com diluição a partir de 1:80 ate 1:2560, sendo considerados positivos, aquelas com observação de parasitos com coloração fluorescente e título > 1: 80. A leitura das amostras foi realizada em microscópio de epifluorescência (Nikon Fluophot, 400x). 
As análises das freqüências dos animais positivos, correlacionados com a idade, foram avaliadas estatisticamente pelo teste de Chi-square (x2) utilizando o software Statistix 8.0 (2003).

3.	RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os títulos de anticorpos anti-B. equi, dos animais experimentais, variaram de 1:80 a 1280, com 60,8% dos títulos entre 320 e 640. O título mais freqüente foi de 320 (32,2%) (Fig.1). Distribuição sorológica semelhante foi observada por Botteon et al. (2002), no Rio de Janeiro, Brasil, com 63% das amostras com títulos entre 260 e 640, sendo o titulo mais freqüente 320 (29,62%), em eqüinos criados em semiconfinamento. 
Esses dados se aproximam dos obtidos por Cunha et al. (1996), em animais do Jóquei Clube de Pelotas, os quais apresentaram 70% dos títulos com 320, justificado pela freqüência com que os animais são medicados com babesicidas, impedindo que a parasitemia alcance um nível capaz de estimular a produção de anticorpos de forma significativa. 
Passos et al., (1999), em seu estudo com éguas prenhes, observou animais positivos para B. equi com títulos de no máximo 1:640, sendo de maior freqüência títulos de 1:80. 

Figura 1 - Freqüência de títulos de anticorpos anti-B. equi em éguas gestantes da raça    PSC, de um haras no município de Bagé, RS, Brasil. 

Segundo Cunha et. al (2002), eqüinos infectados com B. equi desenvolvem altos títulos de anticorpos contra proteínas de superfície de merozoítos, o que provavelmente está envolvido no controle da multiplicação e eliminação do parasito. A participação de anticorpos na neutralização de merozoítos, impedindo diretamente a reinvasão de eritrócitos também tem sido demonstrada (Cavinato et al., 2001).
Assim sendo, tanto mecanismos celulares como aqueles dependentes de anticorpos parecem desempenhar papeis fundamentais nos controles de hematozoários.
Segundo Schein (1988), eqüinos infectados por B. equi desenvolvem uma sólida imunidade, que protege contra a doença clínica no caso de re-exposições ao parasito. Esta proteção tem sido atribuída à contínua estimulação do sistema imune por parasitos que persistem no organismo durante a fase crônica da enfermidade, mesmo em baixas parasitemias. 
Para De Waal (1992) um eqüino portador pode apresentar variações de títulos de anticorpos, justificáveis por ciclos de reagudização de parasitemia, condição física e estado fisiológico ou sanitário. Na análise da freqüência de animais soropositivos para B. equi, de acordo com a idade, não se demonstrou diferença estatística entre as éguas (Chi-quadrado P>0.05), sugerindo uma situação de estabilidade enzoótica na região, onde os animais jovens apresentam sorologia positiva, que os fornece proteção imunológica prolongada para desafios futuros. Esses dados coincidem com os demonstrados por Pfeifer et al., (1995) e Botteon (2002). 
Para Schein (1988) e Kuttler et al,. (1988) a dinâmica de anticorpos detectáveis por qualquer método sorológico na infecção por B. equi esta representada graficamente por uma curva gausiana, já que aparecem aos 15-20 dias da primoinfecção, aumentando posteriormente. Os títulos tendem à manutenção em alta durante 6-10 meses começando decrescer até chegar a níveis basais indetectáveis, em muitas ocasiões, por alguns métodos sorológicos. 

4.	CONCLUSÕES

Eqüinos infectados com B. equi desenvolvem altos títulos de anticorpos contra proteínas de superfície de merozoítos, o que provavelmente está envolvido no controle da multiplicação e eliminação do parasito. 
O nível de anticorpos anti-B. equi de 1:320 é justificado pela freqüência com que os animais são medicados com babesicidas, impedindo que a parasitemia alcance um nível capaz de estimular a produção de anticorpos de forma significativa.
Tanto mecanismos celulares como aqueles dependentes de anticorpos parecem desempenhar papeis fundamentais nos controles de hematozoários.
Eqüinos infectados por B. equi desenvolvem uma sólida imunidade que protege contra a doença clínica no caso de re-exposições ao parasito. Esta proteção tem sido atribuída à contínua estimulação do sistema imune por parasitos que persistem no organismo durante a fase crônica da enfermidade, mesmo em baixas parasitemias. 

5.	REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

BOTTEON, P. T. L. et al. Seroprevalencia de Babesia equi en tres diferentes sistemas de crianza de eqüinos: Rio de Janeiro - Brasil. Parasitologia Latinoamericana 2002, v. 57, n. 3-4, p. 141-145.
CAVINATO, R. A., K. R. BASTOS, L. R. SARDINHA, R. M. ELIAS, J. M. ALVAREZ, AND M. R. IMPERIO LIMA. Susceptibility of the different developmental stages of the asexual (schizogonic) erythrocyte cycle of Plasmodium chabaudi chabaudi to hyperimmune serum, immunoglobulin (Ig)G1, IgG2a and F(ab')2 fragments. Parasite Immunol., 2001, v23, p. 587-597.
CUNHA, C.W. Babesiose Eqüina: Padronização da Reação de Imunofluorescência Indireta para sorodiagnóstico em eqüinos Puro Sangue Inglês. Tese de Mestrado. Curso de Pós-Graduação em Veterinária - Área de Concentração em Sanidade Animal, UFPel, Pelotas, 1993.
CUNHA, C W, SILVA S. S,; PIMENTAL, C. A. Avaliação da freqüência de eqüinos soropositivos a Babesia equi no Jóquei Clube de Pelotas e em dois haras da Zona Sul do Rio Grande do Sul, RS. Rev Bras Parasitol Vet., 1996, v. 5, p. 119-22. 
CUNHA, C. W., L. S. KAPPMEYER, T. C. MCGUIRE, O. A. DELLAGOSTIN, AND D. P. KNOWLES. Conformational dependence and conservation of an immunodominant epitope within the Babesia equi erythrocyte-stage surface protein equi merozoite antigen-1. Clin. Diagn. Lab. Immunol., 2002, v. 9, p. 1301-1306.
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GUIMARÃES, A. M., LIMA, J. D., RIBEIRO, M. F. B. Sporogony and experimental infection of Babesia equi by Boophilus microplus ticks. Parasitol. Res., 1998b, v.84, p.323-327, 
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