COMPARAÇÃO DE DIFERENTES MÉTODOS PARA AVALIAÇÃO DA CONCENTRAÇÃO DE SÊMEN SUÍNO

MADEIRA, Elisângala Mirapalheta1; BIANCHI, Ivan1; CALDERAM, Kérlin1; MASCHIO, Éder Francisco1, CORRÊA, Érico Kunde1, PERONDI, Arlan1; LUCIA JR., Thomaz1; COLARES, Tiago2; CORRÊA, Marcio Nunes1.

1PIGPEL – Pesquisa, Ensino e Serviços em Produção de Suínos
Departamento de Clínicas Veterinária, Hospital de Clínicas Veterinária, Campus Universitário s/n°, Universidade Federal de Pelotas, Pelotas/RS/Brasil, CEP: 96010-900.elisangelamadeira@bol.com.br
²EMTA: Grupo de Estudo em Embriologia e Transgênese Animal

1.	INTRODUÇÃO

A inseminação artificial (IA) é uma biotecnologia aplicada para maximizar os processos reprodutivos da espécie suína, e esta tem contribuído para otimizar a eficiência reprodutiva dos sistemas de produção. No entanto a qualidade do sêmen utilizado na IA é de extrema importância, portanto alguns parâmetros de avaliação espermática que estão relacionados com a fertilidade podem refletir diretamente no retorno ao cio e taxa de parição, um exemplo é a concentração espermática (Corrêa et al., 2001). Os métodos mais utilizados para avaliar a concentração espermática são: espermiodensímetro, espectrofotômetro, aspecto e pela câmara de Neubauer. A técnica normalmente utilizada como padrão é a câmara de Neubauer (Bearden & Fuquay, 1997b). 
O objetivo do trabalho foi comparar diferentes métodos de avaliar a concentração espermática de um ejaculado e simular a quantidade e qualidade de doses inseminantes que este ejaculado poderá originar.

2. MATERIAL E MÉTODOS

O experimento foi realizado com quatro machos suínos cruzados (Landrace x Large White) com aproximadamente 24 meses de idade, os quais apresentavam fertilidade conhecida e eram mantidos em baias individuais, sob as mesmas condições ambientais, na Estação Experimental da Palma, Universidade Federal de Pelotas (RS). Os machos eram coletados semanalmente e o ejaculado era processado no centro de Biotecnologia no Laboratório de Reprodução Animal (Bearden & Fuquay, 1997a; Bearden & Fuquay, 1997b).
Foram coletados 40 ejaculados de cada macho através da técnica da “mão enluvada” em todos os ejaculados foram mensurados o volume, motilidade, osmolaridade, pH. A avaliação da concentração de cada ejaculado foi feita através de 4 métodos: aspecto, espermiodensímetro, câmara de Neubauer e espectrofotômetro (Bearden & Fuquay, 1997b; Corrêa et al., 2001).
Através da visualização do ejaculado pode se determinar o aspecto do sêmen e quantificar a concentração espermática de acordo com o mesmo, o que permite estimar subjetivamente a concentração de células espermáticas (Corrêa et al., 2001).
O espermiodensímetro é um instrumento que destina-se à determinação da densidade espermática do ejaculado, através da observação do grau de turvação de uma suspensão de espermatozóides (Bearden & Fuquay, 1997b).
O espectrofotômetro trata-se de um aparelho que mede a concentração espermática através da densidade óptica, tendo como principais vantagens a sua praticidade e rapidez (Bearden & Fuquay, 1997b).
A determinação da concentração pela câmara de Neubauer é um método direto de contagem de células, porém é mais demorado, tornado se menos prático quando o volume de ejaculados a serem processados for muito grande. Como se trata de um método confiável ainda é o mais indicado tecnicamente sendo utilizado neste trabalho como o método de referência (Bearden & Fuquay, 1997b; Corrêa et al., 2001).
A análise dos resultados foi feita através da análise de variância e a comparação de médias das concentrações obtidas de cada método foi feita pelo teste de Tukey . A análise estatística foi feita através do programa Statistix (2004).

2.	RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os resultados de concentração obtidos em cada técnica de avaliação estão apresentados na Tabela 1. Houve diferença estatística (P< 0.05) entre os métodos de avaliação. 

Tabela 1. Concentração de espermatozóides de acordo com o método de concentração utilizado.

Técnica	Coletas	Concentração, X 106 SPTZ/mL	
Câmara de Neubauer	40	400 a	
Espectrofotômetro	40	464 b	
Espermiodensímetro	40	520 bc	
Aspecto	40	701 c	

A simulação do número de doses produzidas em relação ao método padrão de avaliar concentração (câmara de Neubauer) está apresentado na Tabela 2. Na simulação foi considerando um ejaculado de 250 mL com 80% de motilidade progressiva (Corrêa et al., 2001).
Pode-se observar que pelo método de concentração baseado no aspecto do ejaculado, a quantificação da concentração, o número de espermatozóides e o número de doses, superestimou estes ejaculados, já que pela técnica padrão (Neubauer) foi calculada aproximadamente a metade da concentração. 
Semelhante é o resultado das médias de concentrações obtidas através do método de avaliação através do espermiodensímetro, que por ser um teste subjetivo, depende muito da pessoa que esta analisando a turvação da amostra avaliada. 
Já o método do espectrofotômetro foi o que mais se aproximou da técnica padrão com uma pequena diferença no número de doses, mais especificamente quatro doses na média.
Todos os métodos comparados com o método padrão superestimaram a concentração real de espermatozóides (SPTZ) nos ejaculados, o que vai conferir uma concentração de espermatozóides inferior àquela recomendada por dose inseminante na IA intracervical que é de 3 x 109 SPTZ viáveis (Corrêa et al., 2001). 
Com isso, um número menor de espermatozóides que o ideal chegará ao oviduto reduzindo a possibilidade de sucesso na fertilização (Bruno et al., 2003). Portanto, a avaliação da concentração é crítica, pois, o útero impõe barreira à passagem dos espermatozóides (Steverink et al., 1998), e, além disso, ocorre fagocitose dos espermatozóides através das células de defesa do trato reprodutivo da fêmea suína e ainda por perdas de espermatozóides durante o percurso do trato reprodutivo (Krueger et al., 1999).

Tabela 2. Simulação do número de doses produzidas de acordo com o método de concentração.

Parâmetro	Método de avaliação	
	Neubauer**	Espectrofotômetro	Espermiodensímetro	Aspecto	
Volume do ejaculado, mL*	250	250	250	250	
Concentração, X 106 SPTZ/mL	400	464	520	701	
Motilidade, %*	80	80	80	80	
Doses calculadas***	37	31	35	47	
Percentual de doses produzidas a mais em relação ao controle	0	15	28	73	
Concentração real da dose produzida no método utilizado, X 109 SPTZ	3,0	2,5	2,3	1,7	
* Valores utilizados como referência (Corrêa et al., 2001).
** Método considerado como padrão.
*** Concentração utilizada na dose produzida foi de 3,0 X 109 SPTZ.

4. CONCLUSÕES

O espectrofotômetro foi o método, que mais se aproximou da concentração obtida pelo método padrão. Além disso, pelas vantagens da praticidade e rapidez na apuração dos resultados é o método de eleição para substituir o método da câmara de Neubauer, em caso de se ter um grande fluxo de sêmen a ser processado. 
Os demais métodos pesquisados quando aplicados nos sistemas de produção podem trazer conseqüências negativas à produtividade de uma granja de suínos, o que significa perdas econômicas.

5.	REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

BEARDEN, H.J.; FUQUAY, J.W. Semen collection. In: BEARDEN, H.J.; FUQUAY, J.W. Applied Animal Reproduction. 4th Ed.New Jersey: Prentice Hall, 1997a. Cap. 14, p.147-157.

BEARDEN, H.J.; FUQUAY, J.W. Semen evaluation. In: BEARDEN, H.J.; FUQUAY, J.W. Applied Animal Reproduction. 4th Ed.New Jersey: Prentice Hall, 1997b. Cap. 15, p.159-170.

CORRÊA, M.N.; MEINCKE, W.; LUCIA, T. et al. Inseminação Artificial em Suínos. Pelotas - RS, 2001. 181p.

STEVERINK, D.W.B.; SOEDE, N.M.; BOUWMAN, E.G. et al. Semen backflow after insemination and its effect on fertilization results in sows. Animal Reproduction Science, v.54, p.109-119, 1998. 

KRUEGER, C., RATH, D., JOHNSON, L.A. Low dose insemination in synchronized gilts. Theriogenology, v.52, p.1363-1373, 1999. 

BRUNO, D.G.; NAMINDOME, A.; VIANNA, W.L. ROSSETO, A.C. RODRIGUES, P.H.M. MORETTI, A.S. et al. Estudos comparativos da eficiência de diferentes técnicas de mensuração da concentração espermática em suínos. Anais do XI Congresso da Abraves, v. 2, p.223-224, 2003.

STATISTIX®. Statistix for Windows User’s Manual. Ed. Analytical Software. Tallahassee, Fl. 2004.