VIABILIDADE E GERMINAÇÃO DE PÓLEN EM DIFERENTES PORTA-ENXERTOS DE PESSEGUEIRO 
PICOLOTTO, Luciano1; ROSSI, Andréa de2; GONÇALVES, Ciane Xavier3; SILVEIRA, Tiago M. Telesca da4; FACHINELLO, José Carlos5

1 Engenheiro Agrônomo, Doutorando do PPGA, área de concentração em Fruticultura de Clima Temperado. FAEM/UFPEL. Caixa postal 354, 96010-900, Pelotas, RS. E-mail: picolotto@gmail.com
2 Engenheira agrônoma, Dra., Professora do Departamento de Fitotecnia, FAEM/UFPel. E-mail: derossiandrea@yahoo.com.br
3 Bióloga, mestranda do PPGA, área de concentração em Fruticultura de Clima Temperado. FAEM/UFPel E-mail: anexg@hotmail.com
4 Engenheiro Agrônomo, mestrando do PPGA, área de concentração em Fruticultura de Clima Temperado. FAEM/UFPel E-mail: telesca.tiagro@gmail.com 
5 Engenheiro Agrônomo, Dr., Professor Titular do Departamento de Fitotecnia, FAEM/UFPel. E-mail: jfachi@ufpel.tche.br
INTRODUÇÃO
Na família Rosaceae, a auto-incompatibilidade está presente devido expressão do alelo S que em contato com o pistilo inibe o crescimento do tubo polínico (Batle et al. 1995). Entre as características de uma cultivar polinizadora está a compatibilidade do alelo S e a viabilidade de pólen (Certal et al. 1999).
Segundo Flanklin et al. (1995) citada por Dantas et al. (2005) a análise da fertilidade do pólen é condição preliminar indispensável ao melhoramento genético clássico. Para esses autores dados sobre a viabilidade e o desenvolvimento de grãos de pólen são importantes no estudo da biologia reprodutiva e para o desenvolvimento de programas de melhoramento genético desta espécie pois permitem obter maiores sucessos nos cruzamentos.
Em geral, o pólen colhido de flores em adequado estágio de desenvolvimento e corretamente preparado não necessita de testes de viabilidade. Entretanto, não são raras as situações em que o pólen a ser usado tenha sido colhido em outra região, ou mesmo, fornecido através de intercâmbio com outros países. Por outro lado, devido à não-coincidência de floração, é preciso, muitas vezes, armazenar o pólen colhido em um ano, para ser utilizado no ano seguinte. Neste caso, é recomendável testar a viabilidade do mesmo, antes de sua utilização (Einhardt et al., 2006).
À medida que o pólen envelhece, a porcentagem de germinação e o comprimento dos tubos polínicos decrescem. Ainda que o pólen pareça inviável, a presença de alguns tubos polínicos vigorosos indica que o mesmo ainda é suficientemente bom para assegurar, pelo menos, uma moderada frutificação efetiva, apesar da baixa porcentagem de germinação (Scorza & Sherman, 1995).
Pode-se agrupar os métodos de teste de viabilidade do pólen em quatro tipos: (1) por meio de corantes; (2) germinação in vitro; (3) germinação in vivo, e (4) porcentagem de frutificação efetiva, obtida com a utilização do pólen em teste.
Considera-se que o método do corante superestima a porcentagem de germinação do pólen, enquanto o teste in vitro a subestima (Galetta, 1983).
Segundo Stanley e Linskens (1974), nenhum teste de viabilidade é completamente satisfatório, principalmente após o pólen ter sido armazenado, pelas seguintes razões: os testes químicos usam corantes que reagem com constituintes químicos ou estruturas cujas presenças podem não refletir a capacidade do grão de pólen germinar; amostras de grãos de pólen que germinam bem in vitro, podem não produzir suficiente elongação do tubo polínico para induzir a fertilização. Por outro lado, amostras de pólen que parecem não-viáveis quando testadas in vitro, podem produzir boa porcentagem de sementes in vivo; o pólen armazenado pode germinar diferentemente em amostragens repetidas ou em diferentes meios.
O objetivo do presente trabalho foi avaliar a viabilidade de diferentes pólens empregados no programa de melhoramento genético de porta-enxertos para cultura do pessegueiro da Universidade Federal de Pelotas, através do método de germinação in vitro.
MATERIAL E MÉTODOS
O trabalho foi desenvolvido no laboratório de caracterização molecular de plantas lenhosas, do setor de fruticultura da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel (UFPel), no município de Capão do Leão-RS. Para o experimento foram utilizados pólens das cultivares de porta-enxertos Tsukuba, Flordaguard, Okinawa, Capdeboscq, IS 5/23, GF 386, Umezeiro e Aldrighi. 
Inicialmente coletou-se as flores em estágio de balão nas cultivares de porta-enxertos. A liberação do pólen presente nas anteras foi realizada através do emprego de peneira de 2 mm. Após a coleta, o pólen foi colocado sobre bandejas de papel e  secado sob luz artificial, à temperatura ambiente e com baixa umidade relativa. O tempo de secagem foi de aproximadamente 36 horas. 
Posteriormente a secagem, o pólen foi armazenado em tubos de plástico vedado com algodão. O armazenamento destes tubos com pólen, para posterior teste de viabilidade, foi em congelador, em vidro fechado contendo sílica para reter a umidade. Para a desinfestação das mãos e do material utilizado no momento do preparo do pólen utilizou-se álcool 70%.
A viabilidade de pólen foi determinada pelo método de germinação in vitro. O meio de cultura constituiu-se de 10 g de sacarose e 1 g de ágar para 100 ml de água destilada, a qual foi aquecida (4 minutos) para total diluição do ágar. Ainda quente, o meio foi distribuído em lâminas (4 gotas) adaptadas com dois anéis de PVC, de 21 mm de diâmetro e 3 mm de altura (cada anel correspondeu a uma repetição). O pólen foi polvilhado sobre o meio frio, com um pincel. As lâminas foram colocadas em placas de Petri com fundo coberto por papel umedecido (simulando uma câmara úmida), e levadas para incubação em estufa tipo BOD, com temperatura controlada em torno de 24ºC. Após três horas, foi feita a contagem de grãos de pólen germinados, sendo considerados como germinados aqueles que apresentaram tubo polínico de comprimento igual ou superior ao diâmetro do próprio pólen. 
O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com 4 repetições. Para análise dos resultados foram usados testes de análise da variação e de comparação de médias através do Programa estatístico, SANEST (Zonta & Machado, 1995).
RESULTADOS E DISCUSSÃO
A porcentagem de germinação do pólen teve diferenças significativas entre as cultivares conforme verificado na análise de variância (α = 0,05).
Os percentuais de germinação de pólen mais elevados ocorreram nas cultivares Capdeboscq, Flordaguard e Okinawa, chegando a 60%, 59% e 51%, respectivamente (Figura 1). Estes percentuais de germinação indicam que os pólens das cultivares acima são viáveis. Segundo Einhardt et al. (2006) a obtenção de pólen viável é uma característica importante para assegurar o sucesso das hibridações controladas. De acordo com Raseira e Nakasu (2002) um bom pólen deve apresentar de 50 a 85% de grãos germinados.
A germinação do pólen na cultivar GF 386 foi semelhante a verificada na cultivar Okinawa, no entanto, bem menor que nas cultivares Capdeboscq e Flordaguard. Verifica-se na Figura 1 que a germinação da cultivar GF 386 chegou a 47%, segundo Raseira e Nakasu (2002) a porcentagem de germinação é variável com: a cultivar, as condições em que foi realizado a coleta do pólen, as condições de secagem, o meio de cultura ou mesmo a qualidade do ágar utilizado no teste de viabilidade.

Figura 1: Porcentagem de pólen germinado nas cultivares de porta-enxerto Tsukuba, Flordaguard, Okinawa, Capdeboscq, IS 5/23, GF 386, Umezeiro e Aldrighi. FAEM/UFPel, Pelotas-RS, 2006.

Nas cultivares Umezeiro e Tsukuba a porcentagem de pólen germinado foi ainda menor que as cultivares citadas anteriormente. A germinação próxima dos 40% (Figura 1) indica que a utilização deste pólen necessita de cuidados adicionais que devem ser tomados no momento da coleta, secagem e armazenamento do mesmo. De acordo com Raseira e Nakasu (2002) o pólen normalmente utilizado para hibridações possui acima de 30% de germinação, indicando ser possível a utilização do pólen das cultivares Umezeiro e Tsukuba em práticas de polinização.

A menor germinação (Figura 1) foi verificada nas cultivares Aldrighi e IS 5/23 (20,3% e 12,8%, respectivamente). Há aparentemente uma baixa viabilidade do pólen das cultivares Aldrighi e IS 5/23. É possível que o método de germinação in vitro seja influenciado por diferentes fatores (Frazon et al., 2006), conforme citado anteriormente. O tempo de incubação está entre os fatores que podem ter influenciado a baixa germinação do pólen nas cultivares Aldrighi e IS 5/23. Nunes et al. (2001) fazem esta constatação ao estudar a germinação de pólen de macieira, esses autores verificaram que a germinação é aumentada com o aumento do tempo de incubação. De acordo com Frazon et al. (2006) estas referências confirmam que o tempo de incubação necessário para iniciar a germinação in vitro varia de acordo com a espécie, e até mesmo entre cultivares da mesma espécie.
CONCLUSÕES 
Concluiu-se que a viabilidade do pólen é diferente entre as cultivares em amplo intervalo, indicando com isso a importância dos testes de viabilidade para a obtenção de pólen de qualidade. 
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 
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ZONTA, E. P.; MACHADO, A. A. SANEST – Sistema de análise estatística para microcomputadores. Pelotas: SEI n. 066060, Categoria A. 48p, 1995.