MICROPROPAGAÇÃO FOTOAUTOTRÓFICA DE FRAMBOESEIRA CV. BATUM

LEITZKE, Luciane Nolasco1; WULFF SCHUCH, Márcia2; DAMIANI, Cláudia Roberta3
1Laboratório de Micropropagação de Plantas Frutíferas – DF – FAEM/UFPel;
Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010-970 Pelotas/RS; BR. lucianeleitzke@gmail.com
2 Engenheira Agrônoma, Dra., Professora do Departamento de Fitotecnia. marciaws@ufpel.tche.br
3 Bióloga, Bolsista DTI/ CNPq. E-mail:claudami2004@yahoo.com.br 

1. INTRODUÇÃO
	As principais regiões produtoras de framboesa encontradas no Brasil estão localizadas nos estados do Rio Grande do Sul, São Paulo e Minas Gerais, estimando-se uma área de 40 hectares de cultivo (Pagot & Hoffmann, 2003). 	Muitos explantes ou plantas in vitro possuem a habilidade de crescer de forma fotoautotrófica (sem sacarose no meio de cultura e sob condições ambiente que promovam a fotossíntese) (Kozai, 1991). A micropropagação fotoautotrófica de plantas, além de aumentar o crescimento dos explantes in vitro, também minimiza os riscos de contaminação microbiana, reduz os custos de produção, melhora as características fisiológicas da planta e facilita sua aclimatização às condições ex vitro (Afreen et al., 2002). 
	Várias práticas têm sido testadas para promover o crescimento fotoautotrófico das plantas in vitro e, conseqüentemente, reduzir os custos de produção. Entre elas, destacam-se a eliminação total ou parcial da sacarose do meio de cultura (Kozai & Kubota, 2001; Arigita et al., 2002); o aumento da concentração de CO2 e consequentemente a redução da umidade relativa e da concentração de etileno do frasco de cultivo (Kanechi et al., 1998; Kozai & Kubota, 2001). Uma das maneiras para obter tais resultados é o uso de tampas como: algodão, alumínio filme PVC; e o aumento da intensidade luminosa (Kanechi et al., 1998; Kodym & zapata-arias, 1999; Kozai & Kubota, 2001; Kodym & zapata-arias, 2001). 
	O desenvolvimento de sistemas de micropropagação fotoautotrófica surge como possibilidades potenciais de aumentar a eficiência da micropropagação e auxiliar na redução dos custos, viabilizando esta forma de propagação comercialmente. Desta forma, o objetivo deste experimento foi determinar a melhor concentração de sacarose no meio de cultura, o tipo de vedação dos frascos e o local de incubação dos frascos com os explantes na multiplicação in vitro de framboeseira cv. Batum.

2. MATÉRIAL E MÉTODOS
	O experimento foi conduzido no Laboratório de Micropropagação de Plantas Frutíferas, do Departamento de Fitotecnia da Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel (FAEM), da Universidade Federal de Pelotas (UFPel), em Pelotas, RS.
	Foram utilizados para o experimento, segmentos caulinares de plantas de framboeseira cv. Batum, de aproximadamente 1 cm de comprimento (duas gemas) e o ápice excisado, sem folhas, oriundas do cultivo in vitro. Os fatores estudados foram o local de incubação dos frascos com os explantes (sala de crescimento convencional com temperatura de 25 ± 2°C, luminosidade de 27µmols.m-2.s-1 e fotoperíodo de 16 horas e casa de vegetação de vidro com temperatura de 25 ± 2°C fotoperíodo e luz natural ), concentração de sacarose no meio de cultura (0; 15 e 30 g.L-1) e o tipo de vedação dos frascos de cultivo (alumínio, filme de PVC e algodão). O delineamento experimental foi inteiramente casualizado, em esquema fatorial 2X3X3, totalizando 18 tratamentos com quatro repetições. Cada repetição foi constituída de um frasco com cinco explantes. Utilizou-se meio MS (Murashige & Skoog, 1962), acrescido de 7,5 µM de BAP, 100 mg.L-1 de mio-inositol e 6 g.L-1 de ágar, sendo o pH ajustado para 5,8, antes da inclusão do agar e, posteriormente autoclavado a 121°C e 1,5atm por 20 minutos.
	Após 30 dias de multiplicação in vitro foi avaliado o número de brotações, gemas e folhas por explante, comprimento das brotações e matéria fresca. Os dados foram submetidos à análise de variância e as médias dos tratamentos comparadas estatisticamente pelo teste de Duncan, através do programa estatístico WinStat (Machado & Conceição, 2002).
3. RESULTADOS E DISCUSSÃO
	Houve efeito significativo da interação entre concentração de sacarose e do local de incubação dos frascos para as variáveis número médio de gemas, de folhas e para o comprimento médio das brotações. Nas figuras 1, 2 e 3, observa-se que os explantes dos frascos mantidos na sala de crescimento mostraram um comportamento quadrático, para todas as variáveis citadas anteriormente, enquanto que os explantes dos frascos mantidos na casa de vegetação foram representados por uma tendência linear positiva, o aumento da concentração de sacarose no meio de cultura, propiciou um aumento do número de gemas, folhas e no comprimento das brotações. Na micropropagação de bananeiras, a maior taxa de multiplicação foi obtida em casa-de-vegetação e em sala de crescimento com luz natural (Kodym & zapata-arias, 1999).

	
Figura 1. Número médio de gemas de framboeseira  cvBatum  em diferentes concentrações de sacarose  e em função do local de incubação dos frascos com os explantes. Pelotas, RS, 2006.	Figura 2. Número médio de folhas de framboeseira  cvBatum  em diferentes concentrações de sacarose  e em função do local de incubação dos frascos com os explantes. Pelotas, RS, 2006.	

Figura 3. Comprimento  médio das brotações de framboeseira  cvBatum  em diferentes concentrações de sacarose  e em função do local de incubação dos frascos com os explantes. Pelotas, RS, 2006.	

	As figuras 4 e 5, mostram um efeito significativo da interação entre concentração de sacarose e do tipo de material utilizado na vedação dos frascos, para as variáveis número médio de gemas e de folhas. Observa-se um comportamento quadrático para os frascos fechados com alumínio e filme PVC, para as duas variáveis citadas anteriormente, obtendo um ponto de máxima entre 15 e 30 g.L-1, respectivamente, enquanto que os frascos mantidos com algodão tiveram comportamento linear positivo, aumento na concentração de sacarose resulta em aumento do número de gemas e de folhas. O tipo de tampa utilizado tem grande influência no desenvolvimento da cultura, pois é ela que vai determinar o nível de trocas gasosas com o ambiente externo. Frascos fechados com película de PVC, não têm mostrado bons resultados, ocasionando problemas de alongamento nas culturas da macieira, Eucalyptus e Citrus (Grattapaglia & Machado, 1998).

	
	
Figura 4. Número médio de gemas de framboeseira  cvBatum  em diferentes concentrações de sacarose  e em função do tipo de material utilizado no fechamento dos frascos. Pelotas, RS, 2006	Figura 5. Número médio de folhas de framboeseira  cvBatum  em diferentes concentrações de sacarose  e em função do tipo de material utilizado no fechamento dos frascos. Pelotas, RS, 2006.	

	A figura 6 mostra um efeito isolado da concentração de sacarose no meio de cultura, para a variável número médio de brotações. Observa-se um comportamento linear ascendente,o aumento da concentração de sacarose promoveu aumento do número médio de brotações. Faria et. al., 2004, trabalhando com Dendrobium nobile sob diversas concentrações de sacarose, observaram uma maior taxa de multiplicação utilizando 60g L-1 de sacarose.

	
Figura 6. Número médio de brotações de framboeseira  cvBatum  em função de diferentes concentrações de sacarose . Pelotas, RS, 2006.	

4. CONCLUSÕES

	Pelos resultados obtidos no experimento pode-se concluir que os melhores resultados obtêm-se com uma maior intensidade de luz, concentração de 15 g.L-1 de sacarose e com o uso de algodão na vedação dos frascos. 

5. AGRADECIMENTOS

	Ao Ministério da Ciência e Tecnologia (MCT), ao Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), em ainda, a  Fundação de Amparo à Pesquisa no Estado do Rio Grande do Sul (FAPERGS).

6. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

AFREEN, F.; ZOBAYED, S.M.A.; KOZAI, T. Photoautotrophic culture of Coffea arabusta somatic embryos: photosynthetic ability and growth of different stage embryos. Annals of Botany, London, v.90, p.11-19, 2002.
ARIGITA, L. et al. Influence of CO2 and sucrose on photosynthesis and transpiration of Actinidia deliciosa explants cultured in vitro. Physiologia Plantarum, Copenhagen, v.115, p.166-173, 2002. 
FARIA, R.T.; RODRIGUES, F.N.; OLIVEIRA, L.V.R.; MÜLLER, C. In vitro Dendrobium nobile plant growth and rooting in different sucrose concentrations. Horticultura Brasileira, Brasília, v.22, n.4, p.780-783, out-dez 2004.
GRATTAPAGLIA, D, & MACHADO, M, A, Micropropagação, In, TORRES, A,C,; CALDAS, L,S,; BUSO, J,A, Cultura de Tecidos e transformação genética de plantas, Brasília: Embrapa – SPI / Embrapa – CNPH, 1998, v,1, p,183-260.
KANECHI, M. et al. The effects of carbon dioxide enrichment, natural ventilation, and light intensity on growth, photosynthesis, and transpiration of cauliflower plantlets cultured in vitro photoautotrophically and photomixotrophically. Journal of the American Society for Horticultural Science, Mount Vernon, v.123, n.2, p.176-181, 1998. 
Kodym, a.; Zapata-Arias, f.j. Natural light as an alternative light source for the in vitro culture of banana (Musa acuminata cv. ‘Grande Naine’). Plant Cell, Tissue and Organ Culture, Hague, v.55, p.141-145, 1999.
KODYM, A.;  ZAPATA-ARIAS, F.J. Low-cost alternatives for micropropagation of banana. Plant Cell, Tissue and Organic Culture, The Ahague, v.66, p.67-71, 2001.
KOZAI, T. Micropropagation under photoautotrophic conditions. In: DEBERGH, P.C.; ZIMMERMAN, R.H. (eds) Micropropagation-technology and application. Dordrecht, Kluwer Academic, 1991. p.447-469.
Kozai, t; Kubota, c. Developing a photoautotrophic micropropagation system for woody plants. Journal of Plant Research, Tokyo, v.114, p.525-537, 2001.
MACHADO, A., CONCEIÇÃO, A.R. Programa estatístico WinStat - Sistema de Análise Estatístico para Windows, versão 2.0. Pelotas, RS, 2002
MURASHIGE, T.; SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and biossay with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, Cepenhagen, v.15, p.473-497, 1962.
PAGOT, E.; HOFFMANN, A. Produção de Pequenas frutas no Brasil. In: SEMINÁRIO BRASILEIRO SOBRE PEQUENAS FRUTAS, 1, 2003. Vacaria. Anais... Bento Gonçalves: Embrapa Uva e Vinho, 2003.64p. (Embrapa Uva e Vinho. Documento, 37).