ANÁLISE DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE PLANTAGO AUSTRALIS LAM. FRENTE A ISOLADOS ALIMENTARES

SERPA, Rosana1; RODRIGUEZ, Gleice Canez2; LUND, Rafael Guerra3, RODRIGUES, Maria Regina Alves4; RIBEIRO, Gladis Aver2.

1Bolsista - Laboratório de Bacteriologia – DEMP – IB/UFPel
2Laboratório de Bacteriologia – DEMP – IB/UFPel
3 Programa de  Pós-Graduação em Odontologia – FO/UFPel
4Laboratório de Oleoquímica – IQG/UFPel
Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010900. rosanaserpa@gmail.com

1.	Introdução

Um antibiótico é definido como uma substância produzida por um microrganismo que, em microgramas, inibe o crescimento de outro microrganismo. Com o avanço da tecnologia na obtenção de antibióticos alopáticos com espectro de ação cada vez maior e ainda, pelo uso indiscriminado destes, é considerável o surgimento de patógenos resistentes a determinadas drogas. Essas drogas atuam como seletores, eliminando as bactérias mais suscetíveis, facilitando a multiplicação das mais resistentes, mais aptas à infecção. Porém, o surgimento dessas novas drogas desencadeia, além deste processo evolutivo, muitas outras reações nos pacientes, geralmente maléficas, tais como reações de hipersensibilidade e imunodepressão, dadas como contra-indicações [11] [5].
Os fitoterápicos são medicamentos cujos componentes terapeuticamente ativos são exclusivamente partes de plantas (caule, folhas, raiz, semente, fruto, etc.) ou derivados vegetais (extratos brutos, sucos, óleos, ceras, etc.), não tendo em sua composição a inclusão de substâncias ativas isoladas de outras origens, nem associações destas com extratos vegetais.  Estão sob a regulamentação de produtos naturais das respectivas leis nacionais de medicamentos e apresentam as indicações profiláticas ou terapêuticas [7].
Plantago australis Lam., conhecida como tansagem, pertence à família Plantaginaceae e ocorre em regiões de clima temperado, como o Sul do Brasil [1]. Possui compostos mucilaginosos, fenólicos, lipídicos e alcaloídicos em seus tecidos [10]. [4] relata também a presença de taninos, pectinas, colina, enxofre, flavonóides e vitamina C. Além disso, foi constatada a presença de um glicosídeo denominado Plantamajosídeo, isolado de uma outra espécie deste mesmo gênero, denominada Plantago major, capaz de inibir bactérias e fungos [8] apud [5]. Popularmente, P. australis Lam. é utilizada no tratamento de infecções do trato gastrintestinal e vias aéreas superiores [6]. Os principais agentes causadores das afecções gastrintestinais são bacilos Gram negativos como Salmonella spp., Escherichia coli e Shigella spp., e bacilos Gram positivos, como Bacillus cereus. Outro agente importante de infecção é o Staphylococcus aureus, cocos Gram positivos, componente da microbiota humana de vias aéreas superiores e pele, e também causador de enfermidades na pele e intoxicação alimentar [11]. 
O presente trabalho objetivou investigar a ação inibitória de extratos brutos aquoso e hidroalcoólico de P. australis sobre o crescimento de Salmonella sp., Shigella sp., Escherichia coli, Bacillus cereus e Staphylococcus aureus.

2.	Materiais e métodos

As plantas foram coletadas no município de Morro Redondo, na localidade Rincão da Caneleira, onde nasceram espontaneamente. Exsicatas foram feitas para identificação da espécie no Herbário PEL, da Universidade Federal de Pelotas. Suas folhas foram secas sobre papel jornal, sendo diariamente reviradas, ao abrigo do sol, até o momento da obtenção dos extratos.
Foram utilizados dois métodos de extração para a obtenção dos extratos brutos: o aquoso, com 35 g da planta seca e triturada em 400mL de água destilada; e o hidroalcoólico, utilizando 35 g da planta acrescidos de etanol 95 % e água destilada (7:3). Os extratos foram então armazenados a 4°C por sete dias, com agitação ocasional. Após esse período os extratos foram filtrados a vácuo, e os resíduos resultantes foram secos a 105°C, obtendo-se assim 23,6g de resíduo do extrato aquoso e 24,8g do hidroalcoólico. Após a filtragem, os extratos foram acrescidos de 100 mL de água para o aquoso, e de 100ml de etanol, para o alcoólico. Por Gravimetria, obteve-se uma concentração aproximada de 0,026g/mL do extrato aquoso e de 0,025g/mL do extrato hidroalcoólico.
Os extratos foram filtrados em membrana de 0,45µm de porosidade e 21mm de diâmetro. As bactérias testadas (Shigella spp., Salmonella spp., Escherichia coli, Bacillus cereus e Staphylococcus aureus) pertenciam a Bacterioteca do Laboratório de Bacteriologia do Departamento de Microbiologia e Bacteriologia do Instituto de Biologia da UFPel. A atividade antimicrobiana destes extratos foi investigada através de duas técnicas de semeadura dos microrganismos testados: Semeadura em superfície e Pour-Plate, ambas em ágar Brain Heart Infusion (BHI Ágar). Sobre essas duas técnicas de semeadura foram utilizados dois métodos de difusão dos extratos: Difusão em Disco, utilizando discos de papel filtro estéreis, e Difusão por Perfurações, utilizando cilindros de metal de 8 mm de diâmetro, ocupando toda a altura do ágar.
Na semeadura em superfície foi utilizada uma alíquota de 50L de cada suspensão bacteriana analisada, padronizada em espectrofotômetro com absorbância de 0,135 a 660nm [2]. A técnica Pour-Plate foi semeada utilizando 40L de cada suspensão bacteriana, também padronizada em espectrofotômetro, em 40mL de ágar BHI a 45ºC. Após agitação, o meio inoculado com a suspensão de cada microrganismo foi distribuído em placas contendo uma camada base de ágar “Mueller-Hinton” [3]. Sobre os discos e perfurações foram colocados 100L de cada um dos extratos e controles. Etanol 96º e água destilada estéril foram utilizados como controles negativos e discos do antibiótico Cloranfenicol 30mg como controle positivo dos testes. As placas foram incubadas por 18h a 36°C. Foram realizadas cinco repetições por técnica para cada microrganismo utilizado. 

3.	Resultados e discussão

Os extratos brutos aquoso e hidroalcoólico de P. australis não apresentaram ação sobre B. cereus, E. coli, Shigella spp. ou Salmonella spp. No entanto, para Staphylococcus aureus foi constatado um grau de inibição pelo extrato hidroalcoólico em 40% das placas testadas pela técnica Disco/Pour-Plate, porém foi observada a ocorrência de colônias satélite. O mesmo foi constatado utilizando Perfuração/Superfície e Perfuração/Pour-Plate, que apresentaram certo grau de inibição em todas as placas testadas, também apresentando colônias satélite. Não houve ação do extrato aquoso sobre S. aureus. 
As perfurações no ágar permitem o uso de uma maior quantidade de extrato, fato que pode ter sido significante na determinação dos resultados, quando comparados aos discos, que concentram uma menor quantidade do extrato.
A propriedade antibacteriana também pode estar associada ao glicosídeo isolado por [8] apud [5], já que é solúvel em solventes orgânicos como etanol [9], utilizado no processo de extração. O uso de um solvente orgânico pode ter contribuído para uma melhor extração desse princípio ativo. Porém, o aparecimento de colônias-satélite nos halos de inibição poderia ser justificado pela baixa concentração dos princípios ativos presentes nos extratos utilizados, ou ainda, pela existência de princípios ativos voláteis.

4.	Conclusões

Os resultados encontrados permitem concluir que, baseado na metodologia utilizada, os extratos brutos aquoso e hidroalcoólico de Plantago australis Lam. não apresentaram ação antimicrobiana sobre B. cereus, E. coli, Shigella spp. ou Salmonella spp. O extrato aquoso não apresentou nenhuma ação antimicrobiana sobre S. aureus. Porém o extrato hidroalcoólico apresentou algum grau de inibição sobre este microrganismo, entretanto novos estudos serão necessários, com concentrações maiores destes extratos e posterior isolamento dos princípios ativos, para determinar seu real potencial como agente antimicrobiano.

5.	Referências Bibliográficas

[1] BARROSO, G. M. Sistemática de Angiospermas do Brasil Volume 3. Viçosa: UFV/Imprensa Universitária. 1991. 326p.

[2] BAWER, A. W.; KIRBY, W. M. W.; SHENHIS, I. C.; TURCK, M. Antibiotic susceptibility testing by a standardized single disc method. American J. Clin. 1966; 493

[3] DUARTE, S.; Estudo in vitro do efeito da Própolis da Bahia sobre Streptococcus do grupo mutans e atividade das glucosiltransferases. 2002. Unesp. Piracicaba/SP. 102p.

[4] FRANCO, L. L. As sensacionais 50 plantas medicinais, campeãs de poder curativo Volume 1. 5ª edição. Curitiba: Editora Lobo Franco. 2001.

[5] FREITAS, A. G. et al. Atividade antiestafilocócica do Plantago major L. Revista Brasileira de Farmacognosia, v.12, supl., p. 64-65, 2002.

[6] LORENZI, H.; MATOS, F. J. A. Plantas medicinais do Brasil: nativas e exóticas. Nova Odessa: Editora Nova Odessa. 2002. 512p.

[7] MS (Ministério da Saúde) Proposta de Política Nacional de Plantas Medicinais e Medicamentos Fitoterápicos. Brasília: Secretaria de Políticas de Saúde, Ministério da Saúde, 2001.

[8] RANV, H.; BRIMER, L. Structure and antibacterial activity of Plantamajoside, a caffeic acid sugar ester from Plantago major subsp. major. Phytochemistry 1988, 27: 3433-7.

[9] RATES, S. M. K.; BRIDI, R. Heterosídeos cardioativos. Farmacognosia: da planta ao medicamento/ organizado por Claudia Maria Oliveira Simões et al. Porto Alegre/Florianópolis: Editora UFRGS/Editora UFSC. p. 685-709. 2003.

[10] ROCHA, J. F. et al. Estudo Anatômico e Histoquímico de Plantago major L. e Plantago australis Lam. (Plantaginaceae). Rev. Uni. Rural Série Ciências da Vida, v.22, n.1, p 33-41, 2002.

[11] TORTORA, J. G.; FUNKE, B. R.; CASE, C. L. Microbiologia. 6ª edição. Porto Alegre: Editora Artmed, 2000, 827p.