AVALIAÇÃO DA MUTAGENICIDADE DA BABOSA (ALLOE VERA) POR MEIO DO TESTE DE ALLIUM CEPA.

STURBELLE, RT1; PINHO,DS1; CORRÊA,NS1; BENDER,AE2; MARTINO-ROTH,MG2; GARCIAS,G2; DODE;LB3; SANTOS SC3; COSTA,MA3

Laboratório de Genética- Bolsista PIBIC-  UCPEL1.
Laboratório de Genética, Escola de Medicina-  UCPEL2.
Escola de Ciências Ambientais- UCPEL3.
Universidade Católica de Pelotas. registsbio@yahoo.com.br

1- INTRODUÇÃO

          Assim como acontece com todas as formas de auto-medicação, o uso de fitofármacos representa um risco potencial para a saúde do ser humano. A opção por qualquer terapia por conta própria pode fazer com que o paciente deixe de consultar um profissional qualificado ou decida abandonar o tratamento. É de suma importância que todos os produtos medicinais sejam seguros. A segurança dos fitofármacos é especialmente importante, pois na maioria das vezes esses produtos não são prescritos por um profissional e são usados para tratar afecções leves, muitas vezes crônicas. O uso tradicional de plantas com finalidades terapêuticas permitiu que os medicamentos com sinais agudos e aparentes de toxicidade sejam bastante reconhecidos e evitados. Entretanto, a premissa de que o uso tradicional de uma planta por centena de anos estabelece a sua segurança não é necessariamente verdadeira. As formas mais sutis e crônicas de toxicidade, como carcinogenicidade, mutagenicidade e hepatotoxicidade, podem muito bem ter passado despercebidas pelas gerações anteriores, e esses tipos de toxicidade são os que mais preocupam na avaliação da segurança dos fitofármacos. Os dados toxicológicos sobre as plantas medicinais são limitados. Contudo, existe uma sobreposição considerável entre as plantas utilizadas para fins terapêuticos e as utilizadas para fins cosméticos ou culinários, sobre as quais existe um grande volume de informação. Não há razão para duvidar da segurança de várias plantas empregadas na culinária e que fazem parte da composição de fitofármacos, contanto que a dosagem e a forma da administração estejam de acordo com o seu emprego nos alimentos. Para doses terapêuticas mais elevadas, a segurança dessas plantas precisa ser reavaliada [7].
          Agentes genotóxicos são capazes de induzir instabilidade cromossômica, como por exemplo, aberrações cromossômicas não casuais, principalmente deleções, translocações e o ganho ou perda de cromossomos inteiros, contribuindo para o desenvolvimento de processos celulares malignos[3,6,8,10,12].
          Atualmente, há uma tendência geral, no campo das investigações farmacológicas, de investigar o efeito genotóxico, carcinogênico, embriotóxico e ou teratogênico das plantas utilizadas como medicinais [9]. Essa avaliação do potencial citotóxico e mutagênico se faz necessário para incrementar a segurança do uso feito pela população das plantas medicinais [11].
          A planta analisada segundo o seu potencial citotóxico foi a babosa (Alloe vera) pertencente a família Liliaceae que apresenta como características  folhas carnudas e suculentas, espinhosas e terminadas em pontas agudas. Cresce entre 60 cm a 1,50m e é uma planta comum usada em jardins [4]. 
      Evidências históricas indicam a origem africana da babosa, uma espécie cultivada no Egito há milhares de anos, com registros de sua utilização pelo povos do Mediterrâneo que remontam ao ano de 400 a.C. Seu nome científico, Aloe vera, foi dado por Carl Von Linne, em 1720, sendo, posteriormente, também referida como Aloe  barbadensis Miller. Ao longo dos séculos, centenas de artigos de cunho científico ou não, têm  sido publicados descrevendo essa espécie como fonte de compostos bioativos. Nesse contexto, o primeiro registro de utilização terapêutica de A. vera no continente americano data de 1697; todavia, sua inclusão na farmacopéia dos EUA (United States Pharmacopoeia-USP) ocorreu somente em 1820, como purgativo e cicatrizante [5].
        Estudos fitoquímicos têm demonstrado a presença de uma série de compostos de interesse farmacológico oriundos dos metabolismos primário e secundário da A. vera, utilizado sem formulações (géis e sucos) preparadas a partir desta planta. Como exemplos de compostos mencionam-se: enzimas (lipases, bradiquinases e proteases), mono e polissacarídeos (glucomananas), aminoácidos, vitaminas (A, B12, C e D), antraquinonas (aloína e emodina), saponinas, ácido salicílico, lignina e esteróides (lupeol e campesterol). A esses compostos têm sido atribuídas diversas atividades biológicas, tais como antisséptica (saponinase antraquinonas), antitumoral (mucopolissacarídeos), antiinflamatória (esteróides e ácido salicílico), antioxidante (vitaminas), imuno-reguladora e detoxificante (glucomananas) [13].

2- MATERIAL E MÉTODO
               
          As folhas da babosa (Alloe vera) foram trituradas e filtradas. As soluções testes consistiram de 4 tratamentos (com quatro bulbos cada), nos quais foram analisados a mutagenicidade. T1 (controle negativo), onde as raízes dos bulbos ficaram imersas em água;  T2 (dose usual), tratamento com infusão a 40mL/L; T3 (dez vezes mais concentrada), com infusão a 400mL/L; T4 (controle positivo), tratamento com  paracetamol a 800 mg/L. 
          No teste de ponta de raíz de Allium cepa L, os bulbos de cebola foram colocados em frascos com água aerada, a temperatura ambiente, para enraizar. Quando as raízes estavam com 5 cm foram colocadas nas soluções de tratamentos durante 24 horas. Após este período as pontas de raíz foram removidas e fixadas. Para a análise microscópica foram coradas com orceína acética a 2%. Foram avaliados 1000 células por bulbo, totalizando 4000 células para cada tratamento.
          Foram avaliados os índices mitóticos (IM), as anomalias do ciclo mitótico (ACM), as anomalias interfásicas (AI), como células micronucleadas (CMN), binucleadas (CBN), com núcleos ligados (CNL), brotos nucleares (BN) e o total de anomalias (TA).
     Para a análise estatística os dados foram armazenados em banco de dados no programa SPSS, versão 11.0 “for Windows” e analisados pelo teste de, Mann-Witney-U, com um nível de significância de P< 0,05.

3- RESULTADOS E DISCUSSÕES

     Através do teste de Allium cepa, procurou-se, neste trabalho, avaliar o potencial mutagênico da babosa (Alloe vera) que é popularmente utilizada pela população em geral, sob diversas formas e  com inúmeras finalidades, apesar disso pouco se conhece do seu potencial tóxico para a célula.
Utilizou-se para esse estudo, um  tratamento controle negativo (T1), um controle positivo (T4), no qual foi submetido a uma solução de paracetamol e uma com dose usualmente utilizada pela população - uso interno- (T2) e outra com  uma dose dez vezes mais concentrada (T3). Na tabela 1 encontram-se os resultados obtidos no experimento.

Tabela 1- Resultados celulares obtidos em teste de Allium cepa L. 

Tratamento	  C        _
C  CD (X/DP)	    
   IM	         _
AM (X/DP)	       _     
AI (X/DP)	         _
 TA (X/DP)	
T1	11 1118,50 ±56,2 a b	  11,85	   0 ± 0     	2,50  ± 3,10 c	     2,50 ± 3,10 d	

T2	
48,75 ± 31,02	      
        4,91	
      0,75 ± 0,95	  
     5,25 ± 5,56	       
              6,00 ± 4,83	

T3	
17,50 ± 8,18 a	     
       1,75	      
    0,25 ± 0,50	   
  5,25 ± 6,55	    
     5,50 ± 6,35	

T4	
5,50 ± 8,54 b	     
       0,55	      
       0 ± 0	   
 11,00 ± 2,00 c	    
  11,00 ± 2,00 d	
CD- células em divisão; IM- índice mitótico; AM- anomalias mitóticas; AI- anomalias interfásicas; TA- total de anomalias; X- média; DP- desvio padrão; a,b,c,d P< 0,05. 

          O IM não diferiu significamente entre T1 e T2 (p=0,083), T3 e T4 (p=0,146), diferindo entre os demais tratamentos, sendo que T4 apresentou o menor índice. As ACM  não diferiram entre os tratamentos. Nas AI não houve diferenças entre os tratamentos, com exceção de T1 e T4 (p=0,018). Quanto ao TA, diferiram-se T1 e T4 (p=0,018), sendo que T4 apresentou a maior média destacando-se as células micronucleadas e com brotos nucleares. Esses dados demonstram que  T2 (dose usual), não apresentou problemas em relação aos parâmetros avaliados e que T3 (dose 10 vezes mais concentrado), inibiu a divisão celular, mas não influenciou significamente em relação ao número de anomalias. Esse fato levanta a hipótese de que doses elevadas de Alloe vera podem apresentar efeito citotóxico, inibindo a divisão celular.
  Estudos sobre genotoxicidade e mutagenicidade de Aloe vera são raros, o que demonstra a necessidade de se investigar essa planta quanto a esse efeito. Estudos com relação ao efeito citotóxico de Alloe barbadensis Miller em fibroblastos de galinha, encontraram falhas no cultivo devido a disrupção das junções intercelulares e do desprendimento de células. Concluíram que essa planta contém componentes com moléculas tóxicas que prejudicam o crescimento uniforme das células [1].
Estudos de genotoxicidade mostram que laxantes  contendo babosa trazem um risco de câncer em humanos quando usado como sugerido[2].
Esses dados concordam com os achados por este estudo, onde a principal alteração encontrada foi na redução da divisão celular e apenas na concentração mais alta. 
         
4- CONCLUSÕES
            
             Porém, esses resultados são preliminares e parciais de um trabalho maior, com várias outras repetições com diferentes dosagens de Alloe  vera. Dados mais conclusivos, poderão ser obtidos ao final do estudo.

.5- REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

  [1]   Ávila H, Rivero J, Herrera F, Fraile G.; Cytotoxicity of a low molecular weight fraction from Aloe vera (Aloe barbadensis Miller) gel. Toxicon. 1997 .Sep;35(9):1423-30.
[2] BRUSICK D, Mengs U. Assessment of the genotoxic risk from laxative senna products. Environmental and Molecular Mutagenesis 29:1-9, 1997.
[3]  CAVANEE, W. K.; DRYJA, T. P.; PHILLIPS, R. A.; BENEDICT, W. F.; GOBOUT, R.; GALLIC, B. L.; MURPHEE, A. L.; STRONG, L. C. & WHITE, R. L., 1983. Expression of recessive alleles by chromosomal mechanisms in retinoblastoma. Nature, 305:779-784.
[4]  FRANCO, Lobo. As sensacionais 50 plantas medicinais campeãs de poder curativo.  Volume 1. Curitiba: Editora Lobo Franco LTDA, 2001.
[5] HEDEMBAL BE. Whole Leaf Aloe Vera - Almost a panacea. Health Consciusness, v. 13, N01, 2000.
[6]  KLEIN, G., 1981. The role of gene dosage and genetic transposition in carcinogenesis. Nature, 294:313-316.
[7]  NEWALL, CAROL A., ANDERSON, Linda A., PHILLIPSON, J. David. Plantas Medicinais. Guia para Profissional de Saúde. Editorial Premier, 2002.
[8]  ROWLEY, J. D., Biological implications of consistent chromosome rearrangements in leukemia and lymphoma. Cancer Research, 44:3159-3161.(1984).
[9]  SÁNCHES-LAMAR, Ángel, FLORES, Manuel. Genotoxicidad de Phyllanthus orbicularis evaluada el ensayo de micronúcleos em células de ovario de hámster chino. Rev. Cubana Invest. Biomed., v. 18, n. 1, p.22-23, (1999).
[10]  TSUTSUI, T.; McLACHLAN, J. A. & BARRET, J. C.,. Aneuploidy induction and cell transformation by diethylstilbestrol: A possible chromosomal mechanism in carcinogenesis. Cancer Research, 43: 3814-3821. 
(1983).
[11] TEIXEIRA, Rosangela de Oliveira, CAMPAROTO, Marjori Leiva, MANTOVANI, Mário Sérgio, VICENTINI, Veronica Elisa Pimenta. Assessment of two medicinal plants, Psidium guajava L. and Achillea millefolium L., in vitro and in vivo assays. Genetics and Molecular Biology, v. 26, n.4, p. 551-555, (2003).
[12]  YUNIS, J. J.,. The chromosomal basis of human neoplasia. Science, 221:227-236,(1983).
[13]  Weiner M & Weiner JA. Herbsthat heal. Mill Valley, Quantum Books, 1994.