PROPAGAÇÃO IN VITRO DE MANJERICÃO (Ocimum basilicum L.) 

ROCHA, Carla Lima1; SCHMITZ, Douglas Damé1; PETERS, José Antonio1, BOBROWSKI, Vera Lucia2.

1Laboratório de Cultura de Tecidos de Plantas – Deptº Botânica – IB/UFPel;
2Laboratório de Genética Vegetal – Deptº Zoologia e Genética – IB/UFPel
Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900. carladelicate@hotmail.com

1. INTRODUÇÃO

O uso de plantas medicinais pela população mundial tem sido muito significativo nos últimos tempos. Dados da Organização Mundial de Saúde (OMS) mostram que cerca de 80% da população mundial faz uso de algum tipo de erva na busca de alívio de alguma sintomatologia dolorosa ou desagradável. Desse total, pelo menos 30% dá-se por indicação médica [5]. Dentre as medicinais mais conhecidas pela população encontra-se a espécie de Ocimum basilicum L., conhecida popularmente por manjericão.
O Manjericão verde também conhecido por alfavaca cheirosa, tem origem no Oriente Médio e norte da África. Esta é uma espécie muito valorizada pela qualidade de óleo essencial e aroma que produz sendo amplamente utilizada como planta condimentar e aromática [7], porém, apresenta também um alto potencial medicinal, devido aos princípios ativos como: estragol, eugenol, linalol, alcânfora e tanino, óleos essenciais e voláteis, saponinas, terpenos, além de cálcio, vitamina A e B2. Possui entre outras propriedades ação carminativa, digestiva, antibiótica, anti-reumática, emenagoga e sudorífica [10].
A principal dificuldade no uso das espécies pertencentes à família Lamiaceae para os propósitos farmacêuticos é a imensa heterogeneidade dos compostos da espécie, assim dificultando o estudo genético e bioquímico [10],
A cultura de tecidos é um processo através do qual são isolados pequenos fragmentos de tecido vivo de um organismo, que chamamos de explantes, os quais são cultivados sob condições assépticas em um meio de cultura específico. Estes explantes podem ser de diferentes tamanhos, grandes como plântulas e órgãos ou pequenos como células e protoplastos [6].
A micropropagação é um meio efetivo para multiplicação rápida de espécies nas quais é necessário obter alta uniformidade de progênie. Então, há um grande interesse de utilização destas técnicas para ampliar a propagação de plantas medicinais e aromáticas [6]. A composição do meio de cultura, assim como a concentração dos seus componentes, é fundamental para o desenvolvimento dos tecidos [1]. 
A fonte de carboidrato é um fator muito importante para o crescimento e o desenvolvimento organizado dos explantes. Sabe-se que a atividade fotossintética in vitro é limitada devido à baixa luminosidade e pequenas trocas gasosas [4]. Uma fonte suplementar de carboidrato tal como sacarose é importante para suportar o crescimento e diferenciação in vitro, embora outros compostos (hexoses e pentoses) possam ser utilizados. 
O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito da concentração da sacarose no meio de cultivo para o estabelecimento e multiplicação in vitro de plantas de Manjericão (Ocimum basilicum L.).

2. MATERIAL E MÉTODOS

O trabalho foi desenvolvido no Laboratório de Cultura de Tecidos do Departamento de Botânica, do Instituto de Biologia, da Universidade Federal de Pelotas, RS.  Foram utilizados como explantes os segmentos nodais do material vegetal obtido do melhor protocolo de desinfestação, os quais foram utilizados em meios de cultura com diferentes concentrações de sacarose. O meio de cultivo utilizado como meio mineral básico foi o MS [8] contendo variações na concentração de açúcar, com tratamentos de 1, 3, 5 e 7% de sacarose. Cada tratamento foi constituído por 5 frascos contendo 30 mL de meio, com 4 explantes cada, onde foram inoculados sob condições assépticas em câmara de fluxo laminar horizontal, perfazendo um total de 5 frascos por tratamento, em um universo de 20 frascos. Os meios e soluções foram esterilizados por autoclave a 1210 C, por um período de 20 minutos. O pH dos meios foi ajustado para 5,8 antes da autoclavagem. Os frascos foram mantidos em câmara de crescimento com fotoperíodo de 16h, sob temperatura controlada de 25  2ºC no período claro e 23  2ºC no período escuro, com fluxo de fótons de 15 mol m-2 s-1, fornecido por lâmpadas fluorescentes, tipo branca-fria. O delineamento experimental foi inteiramente casualizado. A avaliação foi realizada aos 30 dias tendo como variáveis-resposta o número de brotos por explante, folhas por explante, área foliar e comprimento da raiz do explante e ainda, presença ou ausência de hiperhidricidade.
     A análise estatística dos dados consistiu de análise da variação e desdobramento de medias pelo teste de Duncan, com o auxílio do programa SANEST [11]. 

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

   As sementes de manjericão apresentaram excelente germinação in vitro em meio mineral básico MS sem reguladores de crescimento (Figura 1). 

Figura 1 - Aspecto morfológico dos explantes, formados a partir de segmentos nodais de sementes manjericão germinado in vitro em diferentes concentrações de sacarose.

	
	Este resultado esta de acordo com os obtidos por Rocha [9], que testando meio com suplementação de hormônio verificou a formação de calos a partir das folhas e muitas delas tornando-se totalmente calos, ao contato com o meio de cultura, perdendo sua forma estrutural.
	 A análise da variação entre as concentrações de sacarose indicou diferenças  significativas. Pelo teste Duncan pode-se constatar que as concentrações de 1 e 3%  apresentaram o maior numero médio de folhas (7,9 e 8,3, respectivamente),  superando a concentração de 7% (3,4) e não diferindo da de 5% (5,5). Resultado semelhante foi observado para a variável comprimento de raiz principal (p< 0,05) (Tabela 1), com valores de 2,89, 3,88, 0,83 e 1,99, respectivamente.
	Para variável área foliar foi observado que as melhores concentrações foram a de 1% (6,43) e a de 3% (6,22) sendo superiores as de 5% (1,96) e a de 7% (0,35), ao nível de significância de 1% (Tabela1).
	O numero médio de brotos em relação as diferentes concentrações de sacarose testadas não foi significativamente diferente pelo teste de Duncan (Tabela1).
		Uma diferença altamente significativa foi encontrada na análise da variação para variável resposta porcentagem de vitrificação. Através do Teste de Duncan observou-se que as concentrações que reduziram a vitrificação foram as de 1 (zero), 3 (13) e 7% (zero), diferindo de 5% que promoveu a vitrificação de 100% dos explantes.
	
   Tabela 1- Efeito da concentração de sacarose sobre o crescimento in vitro de Manjericão após 30 dias de cultivo.

Teor de sacarose no meio de cultura	
N° médio de folhas	
Área Foliar
(cm2).	
N° médio de brotos
	
Comprimento médio de raiz principal
(cm)	
% de
vitrificação
	
1%	7,9 a	6,43 a	2,04 a	2,89 a	0  b	
3%	8,3 a	6,22 a	2,53 a	3,88 a	13  b	
5%	5,5 ab	1,96  b	2,13 a	1,99 ab	100 a	
7%	3,4   b	0,35  b	1,49 a	0,83   b	0  b	
   * Letras distintas nas colunas diferem ao nível de significância indicado

	A importância nutricional de uma fonte de carbono adequada em um meio de cultura e extensamente conhecida, porém, a adição de componentes, especialmente macronutrientes como fonte de carbono, pode ocasionar uma diminuição considerável no potencial osmótico [3]. Apesar da grande importância dos aspectos nutricionais e osmóticos da fonte de carbono, são restritas as literaturas que salientam a influência dos componentes osmóticos na planta, nas células, nos tecidos e crescimento de órgão e morfogenia [2].
		
4. CONCLUSÃO

A utilização de baixas concentrações de sacarose no meio de cultivo são mais eficientes para micropropagação de manjericão verde.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] CALDAS, L.S., HARIDASAN, P., FERREIRA, M. E. A. Cultura de tecidos e Meios Nutritivos. In: TORRES, C.A. CALDAS, L.S., BUSO, J. Transformação genética de plantas. Brasília: Embrapa –CNPH, 1998, p. 87-132.
[2] DERROTE, G.; SHOBHA RANI, B. In vitro propagation of Eucalyptus grandis L. by tissue culture. Plant Cell Reports, v.4, p.63-65, 2000. 
[3] GEORGE, E. F.; SHERRINGTON, P. D. Plant Propagation by tissue cultured-handbook and directory of commercial laboratories. Eversly: Exegetics,1994. 709p.
[4] LAKS0, P. J.; Somaclonal variation: a novel source of variability from cell cultures for plant inprovement. Theoretical and Applied Genetics, v.60, p.197-214,1996. 
[5] MARTINS, M. Plantas Medicinais.Edição Imprensa Universitária-UFV. Viçosa. Minas Gerais. 1995. 220p.
[6] MANTHELL, S. H. MATTHEWS, J. A.; MCKEE, R. A. Princípios de Biotecnologia em Plantas, Ribeirão Preto: SBG, 1994. 334P.
[7] MIRANDA, P.,Internet. 1998. Segredos e Virtudes das Plantas Medicinais
 URL; http//www.winbr.com/abc/medicina.	
[8]  MURASHIGE, t.; SKOOG, F. I. A revised medim for rapid growth and biossays with tabacco tissue cultures. Physiologia Plantarum, v.15, p.473-497, 1962.
 [9] ROCHA, C. L., Aspectos fisiológicos e sanitários de sementes de plantas medicinais, Pelotas: UFPEL, 2003. p.24-35.
[10] VIEIRA, M. L. C. Conservação de germoplasma. Disponível no site http://www.biotecnologia.br capturado em 20  de 2003. 
[11] ZONTA E MACHADO,1987. Pelotas, DMEC- IFM- UFPel.138p.