Avaliação da mutagenicidade de carqueja (Baccharis trimera) em teste de linfócitos de sangue periférico humano.

PINHO, DS1; Sturbelle, RT 1; Costa, MA3; Dode, L3; Garcias,G2; Martino-Roth, MG2.

1Laboratório de Genética – Bolsista PIBIC UCPEL;
2Laboratótio de Genética, Escola de Medicina – UCPEL;
3Escola de Ciências Ambientais – UCPEL;
Universidade Católica de Pelotas. daiane_bio@yahoo.com

1- Introdução

A utilização de plantas com fins medicinais, para o tratamento, cura e prevenção de doenças, é uma das mais antigas formas de prática medicinal da humanidade. 
É válido ressaltar que substâncias que em princípio podem ser consideradas como terapêuticas também podem causar efeitos indesejados ou tóxicos. Os princípios ativos são os componentes químicos existentes na planta que conferem sua ação terapêutica peculiar. É incorreto pensar que as plantas são benéficas ao organismo humano somente por serem plantas, ou seja, elas devem conter substâncias farmacologicamente ativas (princípios ativos) para que atuem de alguma forma no corpo. Por isso, não há sentido em dizer que os medicamentos sintetizados por vegetais ou aqueles sintetizados pela mão do homem (portanto artificialmente) são diferentes entre si ou que aqueles provindos de plantas são melhores. Na verdade, as substâncias são idênticas, podendo ser menos tóxicas devido às baixas concentrações encontradas nos vegetais ou pela interação direta ou indireta com outras substâncias existentes na planta. A maior parte da população costuma achar que qualquer planta medicinal não causa o menor efeito prejudicial à saúde, dizendo que "é só um chazinho e caso não faça bem, nada de mal fará". Por isso este conceito conferido às preparações como chás e infusões, por exemplo, deve ser revisto, pois se houver ingestão em excesso ou se alguns componentes da planta forem nocivos ao homem, os efeitos indesejados serão exatamente iguais àqueles produzidos por substâncias fabricadas industrialmente e tomadas na forma de comprimidos, cápsulas ou sob outras formas farmacêuticas [7]. 
Atualmente, há uma tendência geral, no campo das investigações farmacológicas, de investigar o efeito genotóxico, carcinogênico, embriotóxico e ou teratogênico das plantas utilizadas como medicinais [8]. Essa avaliação do potencial citotóxico e mutagênico se faz necessário para incrementar a segurança do uso feito pela população das plantas medicinais [10].
Procurou-se, neste trabalho, através de teste de aberrações cromossômicas, avaliar o potencial mutagênico da carqueja (Baccharis trimera), pertencente a  família Asteraceae. Originária da América do Sul, provavelmente dos Andes Peruanos, cresce em terrenos altos, solos rochosos, pradarias e em campos arenosos no Sul do Brasil, Paraguai, Bolívia, Uruguai e Argentina. Tem como propriedades químicas, óleos essenciais, contendo monotérpicos (alfa-pineno, beta-pineno, nopineno), álcoois sesquiterpênicos (carquejol, esteres terpênicos, acetato de carquegila), flavonas e flavononas, flavonóides, princípios amargos (lactonas) e saponinas. Pode ser utilizada no combate a anemia, cálculos biliares, diarréias, enfermidades da bexiga, rins, pâncreas, antibiótica, anti-helmíntico e diurético. Devido a seus princípios ativos amargos, influencia o pâncreas, a produzir mais insulina, ajudando a normalizar a glicemia nos portadores de diabetes tipo II, embora não se tenha evidenciado qualquer tendência de redução a glicemia no extrato de Baccharis trimera testado [3]. Contra indicado durante a gestação e lactação [4].

2 – Material e método

Os linfócitos de sangue periférico humano foram usados para as culturas do teste in vitro, sendo obtidos de quatro indivíduos (dois homens e duas mulheres), saudáveis, aparentemente sem infecções, que não tivessem feito nenhum tratamento nos últimos seis meses, com aproximadamente 20 anos de idade. As células foram incubadas por 24 h em 5 mL de meio de cultura, consistindo de 80% de meio RPMI 1640, 4% de fitohemaglutinina, e 20% de soro fetal bovino, a 37ºC. As culturas foram então tratadas com 0,1 mL de infusão teste, preparadas em duas concentrações, T2: com 20 g/L (dose usualmente usada pela população) e T3 com 200g/L (dose concentrada). O controle positivo (T4) foi tratado com 400mg/L de paracetamol e o controle negativo (T1) com água aerada a temperatura ambiente. Após as culturas foram incubadas por mais 48 h e, então colhidas. Em cada cultura foi adicionado 0,5 mL de solução de colchicina antes da fixação. As macroculturas de sangue periférico humano foram preparadas e utilizadas para determinar a freqüência e a distribuição de aberrações cromossômicas. Cem (100) metáfases foram analisadas, em teste cego, de cada indivíduo (4), totalizando (4 tratamentos) 3.200 células.
Para análise estatística os dados foram armazenados em banco de dados no programa SPSS, versão 10.0 “for Windows” e analisados pelo teste de, Mann-Witney-U, com um nível de significância de P<0,05.

3 - Resultados e discussão

Através do teste de cultura de linfócitos humanos, procurou-se, neste trabalho, avaliar o potencial mutagênico de carqueja (Baccharis trimera) que é popularmente utilizada pela população em geral, com inúmeras finalidades, apesar disso pouco se conhece do seu potencial tóxico para a célula.
Utilizou-se para este estudo, um tratamento controle negativo (T1), um positivo (T4) no qual foi submetido a uma solução de paracetamol, uma dose usualmente utilizada pela população- uso interno- (T2) e outro com a dose mais concentrada (T3).
Foram analizados o índice mitótico (IM), as anomalias estruturais (AE), as anomalias numéricas (AN) e o total de anomalias (TA). 
Na tabela 1 encontram-se os resultados obtidos, que foram analisados pelo teste de Manm-Whitney-U. 

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Tratamento	CD (X/DP)	IM	AE (X/DP)	AN (X/DP)	TA (X/DP)	
	 	 	 	 	 	
T1	7,75 ± 3,20	7,8	8,25 ± 1,70 a	5,75 ± 0,95 d	14,00 ± 2,44 g, h	
T2	4,00 ± 0,82	4,03	19,50 ± 5,25 a, b	10,00 ± 1,41 d, e	29,50 ± 6,45 g, i	
T3	5,00 ± 1,41	5,02	78,25 ± 21,74 a, b, c	14,75 ± 2,21 d, e, f	93,00 ± 23,95 h, i, j	
T4	6,00 ± 0,82	6,07	15,50 ± 6,60 c	8,50 ± 3,69  f	24,00 ± 10,09 j	
Tabela 1. Resultados obtidos em teste de linfócitos humanos.
CD-células em divisão; IM- índice mitótico; AN- anomalias cromossômicas numéricas; AE- anomalias cromossômicas estruturais; TA- total de anomalias. a,b,c,d,e,f,g,h,i,j =p < 0,05.

 As CD apresentaram-se elevada em T1 e diminuiram nos demais tratamentos. Relacionando com o IM, a média do número de células em divisão, não diferiu significativamente dos demais tratamentos, evidenciando que a infusão de carqueja na dose usual não inibiu a divisão celular em teste de linfócitos.
Quanto as AE, T3 (78,25 ± 21,74) diferiu de todos os tratamentos, pois apresentou um elevado número de separações das cromátides irmãs nas células metafásicas de linfócitos. T1e T2 não diferiram de T4, sendo que T1 apresentou a menor média (8,25). Pode-se concluir que a dose dez vezes mais elevada de carqueja foi danosa para as células. 
O número médio de AN foi relativamente maior em T3 (14,75 ± 2,21) do que nos demais tratamentos. Com relação as células hiperdiplóides, não houve diferença entre os tratamentos, porém T3 teve maior média e T1 menor média, já nas células hipodiplóides. T1 não diferiu de T4, já os demais tratamentos diferiram entre si, sendo que T3 apresentou maior média e T1 menor média.
Ao analisar o total de anomalias (TA), foram detectados resultados semelhantes as AE e AN, com o T3 diferindo significativamente dos demais tratamentos e T1 e T2  não diferindo de T4.
Estes resultados demonstraram que a dose usual de carqueja (T2) não inibiu a divisão celular e, que T3 (dose 10x mais concentrada) aumentou o número de anomalias estruturais, numéricas e gerais. 
Trabalhos investigando a potencialidade mutagênica da carqueja não foram encontrados. Alguns estudos investigando a atividade bacteriostática e bactericida de carqueja evidenciam o possível uso dessa planta em determinadas situações, porém estas não são especificadas [1].
Estudos evidenciam, o efeito antiinflamatório e analgésico de extrato de carqueja, utilizando camundongos em sua investigação. Os autores concluem que a carqueja possui propriedades antiinflamatórias e analgésicas, que podem ser devidas, em parte, pela inibição da biosintese de prostaglandinas [6].
Estudos sobre propriedades medicinais, associando extrato de plantas a atividades fitofarmacológicas, são raros, especialmente com relação ao seu potencial mutagênico, embora essas plantas sejam usadas pela população em geral, como medicinais, elas possuem em sua constituição alcalóides, flavonóides, taninos e outros compostos complexos que atuam como mecanismos de proteção e que podem ser tóxicos quando utilizados com relativa freqüência [2]. 
Trabalhos sobre mecanismos envolvidos na atividade cardiovascular do extrato aquoso e frações purificadas de Baccharis trimera, demonstraram que o fenilpropanóide bloqueia o influxo de cálcio através de canais de cálcio voltagem dependentes em preparações de musculatura lisa e cardíaca de ratos. Provavelmente o efeito hipotensor produzido pelo extrato da planta está relacionado com o efeito vasodilatador [5].
Em estudos com fungos, verificou que o extrato bruto de Baccharis trimera inibiu parcialmente o crescimento micelial de fungos patogênicos testados (Alternaria Salani e C. graminicola) [9].

4 – CONCLUSÕES

Os estudos acima citados concordam com os resultados encontrados, que indicam uma ação mutagênica em células humanas cultivadas, determinada por doses elevadas. Sugere-se, então que o chá de carqueja deva ser utilizado com moderação.

5 - Referências bibliográficas

[1]     AVANCINI, C.A.M., Wiest, J.M. and Mundstock, E. Atividade bacteriostática e bactericida do decocto de Baccharis trimera (Less.) D.C., Compositae, carqueja, como desinfetante ou anti-séptico. Arq. Bras. Med. Vet. Zootec., Jun 2000, v.52, n°.3, p.230-234. ISSN 0102-0935. 
[2]     CAMPAROTO, Marjori Leiva, TEIXEIRA, Ronsangela de Oliveira, MANTOVANI, Mário Sérgio, VICENTINI, Veronica Elisa Pimenta. Effects of Maytenus ilicifolia Mart. And Bauhinia candicans Benth infusions on onion root-tip and rat bon-marrow cells. Genet. Mol. Biol., V. 25, n. 1, p.85-89, 2002.
[3]  ENDRINGER, C. D., Caracterização química e avaliação da atividade hipoglicemiante de Solanum lycocarpum A. St. Hill., Syzygium cumini (L.) Skeels e Baccharis trimera (Less.) DC., plantas utilizadas na medicina tradicional brasileira no tratamento do diabetes, V1. 126p,2002. 
[4]   FRANCO, Lobo. As sensacionais 50 plantas medicinais campeãs de poder curativo. V. 1. Curitiba: Editora Lobo Franco LTDA,2001.
[5] Gamberini, M. T., Caracterização e mecanismos envolvidos na atividade cardiovascular do extrato aquoso e frações de Baccharis trimera Less. Universidade Federal de São Paulo.,Doutorado, farmacologia; V.1. 86p, 1997.
[6]  GENÉ. R.M., Cartaña C; Adzet T; Marín E; Parella T; Cañigueral. Anti-inflammatory and analgesic activity of Baccharis trimera: identification of its active constituents. Unitat de Farmacologìa i Farmacognòsia, Facultat de Farmàcia, Universitat de Barcelona, 1996 Jun. ISSN: 0032-0943.
[7]  JUNIOR.V.V; PINTO.C.A; MACIEL.A.M. Plantas medicinais: cura segura? Revista Química Nova v.28 n°3 São Paulo May/June 2005. ISSN 0100-4042
[8] SÁNCHES-LAMAR, Ángel, FLORES, Manuel. Genotoxicidad de Phyllanthus orbicularis evaluada el ensayo de micronúcleos em células de ovario de hámster chino. Rev. Cubana Invest. Biomed., v.18, n °1, p.22-23, 1999.
[9] STANGARLIN. R. J., Plantas Medicinais e controle alternativo de fitopatógenos. http://biotecnologia.com.br/revista/bio11/plantas.pdf. 2003.
[10]  TEIXEIRA, Rosangela de Oliveira, CAMPAROTO, Marjori Leiva, MANTOVANI, Mário Sérgio, VICENTINI, Veronica Elisa Pimenta. Assessment of two medicinal plants, Psidium guajava L. and Achillea millefolium L., in vitro and in vivo assays. Genetics and Molecular Biology, v. 26, n°.4, p. 551-555, 2003.