ACLIMATIZAÇÃO DE PLANTAS DE Tagetes sp. APÓS CULTIVO IN VITRO

TURCHETTO, Andreia Carina1; ZANADREA, Ilisandra1; NASSI, Fernanda de Lima1; RIBEIRO, Márcia Vaz1; SCHIMITZ, Douglas Damé1; PETERS, José Antonio1; BRAGA, Eugenia Jacira Bolacel1 

1Laboratório de cultura de tecidos de plantas -DB/UFPel;
Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900. 
dandajs@gmail.com

1. INTRODUÇÃO

Várias espécies do gênero Tagetes são conhecidas pelas suas propriedades medicinais e são utilizadas como fonte de compostos secundários. Tem sido relatado seu uso como pesticida natural e antagônicas no controle de fitonematóides [2].
A cultura in vitro tem sido muito utilizada para a produção de plantas com propriedades medicinais e aromáticas, as quais são fontes de princípios ativos utilizados para a fabricação de muitos medicamentos e cosméticos [9]. 
Embora muitos compostos derivados de plantas medicinais possam ser sintetizados em laboratório, tal síntese é freqüentemente complexa, sendo importante o desenvolvimento de técnicas apropriadas de cultivo para estas plantas [5]. 
Reguladores de crescimento, tais como o GA3, são muito utilizados para modificar o crescimento e o desenvolvimento de plantas, funcionando na regulação  da divisão e do alongamento das células, sendo usados em várias espécies. As giberelinas desempenham uma importante função intermediando os efeitos de estímulos ambientais no desenvolvimento das plantas. Fatores ambientais como fotoperíodo e temperatura podem alterar os níveis de giberelinas ativas afetando passos específicos na rota de biossíntese [10].
Após as plantas serem cultivadas in vitro, é necessário que as mesmas sejam adaptadas ao ambiente ex vitro, que são denominadas comumente de aclimatização [5]. Durante esse processo as plantas passam por modificações morfo-anatômico-fisiológicas para que as mesmas sobrevivam ao novo ambiente [1]. O processo de aclimatização é criterioso e exige muitos cuidados, pois a planta passa de um ambiente de baixa transpiração para outro que exige maior incremento, podendo ocorrer estresse hídrico. Nesse processo, há a passagem de um estado heterotrófico para autotrófico, a disponibilidade de sais é diferente e, finalmente, a planta é transferida de um estado asséptico para ficar sujeita ao ataque de microorganismos [4]. Além do mais, muitos fatores do cultivo in vitro podem influenciar no processo de aclimatização, inclusive o uso de reguladores de crescimento.
O objetivo do presente trabalho foi avaliar o crescimento das plantas de Tagetes sp. após terem passado pelo processo de cultura de tecidos.

2. MATERIAL E MÉTODOS

O experimento foi conduzido em casa de vegetação, com umidade relativa e temperatura controlada, na Universidade Federal de Pelotas, RS, no ano de 2005. 
A fonte de material vegetal para o experimento foi obtida de plantas de Tagetes sp. cultivadas in vitro, em meio MS [9] suplementado com sacarose (50 g L-1), GA3 (0; 0,5; 1,0; e 2 mg L-1) e os frascos vedados com filme de polivinilcloreto e papel alumínio. 
As plantas formadas in vitro após um período de 40 dias, foram retiradas dos frascos, lavadas com água corrente, para retirar o excesso do meio de cultura, e transferidas para recipientes do tipo pet, contendo o seguinte substrato: vermiculita, plantmax® e solo, na proporção 1:1:1. Após transcorrido 40 dias, em casa de vegetação, foram avaliadas as variáveis número e altura média das brotações e o número médio de flores formadas.
O delineamento experimental foi inteiramente casualizado com quatro repetições, sendo os tratamentos considerados os oriundos do cultivo in vitro.

3. RESULTADOS E DISCUSSÕES

Com base nos dados da análise de variância observou-se interação significativa entre os tratamentos para todas as variáveis analisadas.
A taxa de sobrevivência das plantas após o período de aclimatização foi de 75% para aquelas oriundas dos frascos vedados com filme de polivinilcloreto, independente das concentrações de GA3. Para as plantas oriundas dos frascos com vedação com papel alumínio, obteve-se uma taxa de sobrevivência de 50% nas concentrações zero e 0,5 mg L-1 de GA3 e 100% e 75% para as doses 1,0 e 2,0 mg L-1, respectivamente.
Durante o processo de aclimatização, houve a produção de maior número de flores em plantas advindas do meio contendo 2,0 mg L-1 de GA3 e frascos vedados com papel alumínio, com uma média de 9,0 flores por planta. Para as plantas oriundas de meio contendo 0,5 mg L-1 de GA3 e frascos vedados com filme de polivinilcloreto, foram obtidas 7,7 flores por planta (Tabela 1).

Tabela 1: Número médio de flores de plantas de Tagetes sp., oriundas do cultivo in vitro, avaliadas após 40 dias de aclimatização 
Tipo de vedação	Doses de GA3 (mg L-1)	
	0	0,5	1,0	2,0	
Filme de polivinilcloreto	3,7   bAB	7,7 aA	2,3   bB	5,0  bAB	
Papel alumínio	6,0 a  AB	4,5   bB	8,2 aA	9,0 a A	
*Médias seguidas por letras distintas, maiúsculas nas linhas e minúsculas nas colunas, diferem estatisticamente ao nível de 5% de probabilidade de erro, pelo teste de Tukey. 

Verificou-se um possível efeito residual do GA3 sobre a indução do florescimento de plantas de Tagetes sp., durante o processo de aclimatização, nos dois tipos de vedação dos frascos utilizados na fase de cultivo in vitro, porém sendo este efeito mais evidente nas plantas oriundas dos frascos vedados com papel alumínio. Pode ser observado também que ocorreu florescimento em todos os tratamentos (Figura 1). O GA3 é considerado um componente do florescimento em algumas plantas, e seu uso para este fim tem sido relatado para várias espécies [9]. 

E

F

G

H

D

C

B

A

Figura 1: Plantas de Tagetes sp. aclimatizadas após cultivo in vitro com doses de GA3 e dois tipos de vedação. A, B, C e D – Vedação com filme de polivinilcloreto + 0; 0,5; 1,0 e 2,0 mg L-1 GA3, respectivamente. E, F, G e H - Vedação com Alumínio + 0; 0,5; 1,0 e 2,0 mg L-1de GA3, respectivamente.

Nas plantas oriundas do cultivo in vitro com 1,0 mg L-1 de GA3 e frascos vedados com papel alumínio (22,2 brotos por planta) foi verificado que maior número de brotos por planta desenvolveram-se durante o processo de aclimatização, seguido de 17,0 brotos por planta, oriundas do cultivo in vitro sem a presença de GA3 e frascos vedados com filme de polivinilcloreto (Tabela 2).

Tabela 2: Número médio de brotos de plantas de Tagetes sp., oriundas do cultivo in vitro, avaliadas após 40 dias de aclimatização
Tipo de vedação	Doses de GA3 (mg L-1)	
	0	0,5	1,0	2,0	
Filme de polivinilcloreto	16,7   bA	17,0 aA	    12,3   bB	      16,3   bA	
Papel alumínio	   21,5 a   B	    13,0   b C	22,2 aA	      20,3 a    B	
*Médias seguidas por letras distintas, maiúsculas nas linhas e minúsculas nas colunas, diferem estatisticamente ao nível de 5% de probabilidade de erro, pelo teste de Tukey. 

Como pode ser observado na Tabela 3, a maior altura das brotações durante o processo de aclimatização foi de 191,0 mm, para plantas oriundas do meio com 1,0 mg L-1 de GA3 e frascos vedados com papel alumínio. Na ausência de GA3 durante o cultivo in vitro e vedação com filme de polivinilcloreto, as plantas alcançaram uma altura máxima de 154 mm (Tabela 3). 

Tabela 3: Altura média em mm de plantas de Tagetes sp. oriundas do cultivo in vitro, após  40 dias de aclimatização
Tipo de vedação	Doses de GA3 (mg L-1)	
	0	0,5	1,0	2,0	
Filme de polivinilcloreto	154,0 aA	140,3   bB	111,7   b C	140,0   bB	
Papel alumínio	141,0   bD	149,0 a    C	191,2 aA	160,3 a  B	
*Médias seguidas por letras distintas, maiúsculas nas linhas e minúsculas nas colunas, diferem estatisticamente ao nível de 5% de probabilidade de erro, pelo teste de Tukey. 

4. CONCLUSÕES
Os tratamentos com GA3 na fase de cultivo in vitro, promoveram o florescimento em plantas de Tagetes sp. durante o período de aclimatização.
O GA3 utilizado durante o cultivo in vitro, teve influência sobre a altura e número de brotos formados durante o processo de aclimatização, quando adicionados aos frascos vedados com alumínio. 

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] CARVALHO, G.R. et al. Aclimatização de plantas de cafeeiro (Coffea arabica L.) propagadas “in vitro”. Ciência e Agrotecnologia, Lavras, v.23, n.3, p.483-490, 1999. 
[2] FERRAZ, S. & GRASSI DE FREITAS, L. o controle de fitonematóides por plantas antagonistas e produtos naturais. Universidade Federal de Viçosa. Viçosa, 2004.
[3] FIGUEIREDO, S. F. L.; ALBARELLO, N.; VIANA, V. R. C. Micropropagation of Rollinia mucosa (Jacq.) Baill. In Vitro Cellular & Developmental Biology Plant, Wallingford, v.  7, n. 4, p. 471-475, 2001.
 [4] GRATAPAGLIA, D.; MACHADO, M.A. Micropropagação. In: TORRES, A.L.; CALDAS, L.S. eds. Técnicas e Aplicações da Cultura de Tecidos de Plantas. Brasilia: ABCTP/EMBRAPA - CNPH, 1990, 89 - 164 p.
[5] KOROCH, A. R.; JULIANI, H. R. Jr.; TRIPPI, V. C. Micropropagation and acclimatization of Hedeoma multiflorum. Plant Cell, Tissue and Organ Culture. v. 48, p. 213–217, 1997.
 [6] MITROVIC, A.; ZIVANOVIC, B.; CULAFIC, Lj. The effects of growth regulators on flowering of Chenopodium murale plants in vitro. Biologia Plantarum, v. 43, n. 3, p. 451-454, 2000.
[7] MULDER-KRIEGER, T. H.; VERPOORTE, R.; BAERHEIM SVENDREN A & SHEFFER J. J. C. Production of essential oils and flavours in plant cell and tissue cultures. A review. Plant Cell Tissue and Organ Culture. v.13, 85–154,1988.
[9] MURASHIGE, T.; & SKOOG, F. A revised medium for rapid growth and biossays with tobacco culture tissue. Physiology Plant. v.15, p. 473-497, 1962).
[10] TAIZ, L. & ZEIGER, E. Fisiologia vegetal. Trad. SANTARÉM, E. R. et al. 3 ed., Porto Alegre, 2004.