CALOGÊNESE EM Scindapsus pictus:
RESPOSTA AOS REGULADORES DE CRESCIMENTO ANA E BAP

Ribeiro, Mirian de Farias1*; Ferreira-Moura, Islaine 1; Donini, Lorena Pastorini 1;  Viégas, Judith 1

1. Laboratório de Biologia Celular, Departamento de Zoologia e Genética, Instituto de Biologia, UFPel
Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900 – Pelotas, RS
*mirianpelotas@yahoo.com.br

1. INTRODUÇÃO

O mercado mundial de flores vem apresentando um crescimento elevado desde a década de 90, tendo se tornado um dos fatores de grande importância para o agronegócio. A floricultura abrange desde o cultivo de plantas ornamentais, floríferas ou não, até produção de sementes, bulbos e mudas [2;9]. 
O consumo de flores e plantas ornamentais apresenta crescente e elevada demanda, exigindo um sistema eficiente de distribuição e comercialização para a produção que utiliza, cada vez mais, tecnologias avançadas e exige do produtor maior conhecimento técnico [9].
A cultura de tecidos é um processo que isola pequenos fragmentos de tecido vivo, os explantes, e os induz a regenerar o organismo inteiro. A aplicação mais prática da cultura de tecidos é a propagação vegetativa in vitro, denominada micropropagação, devido ao tamanho dos propágulos utilizados, que possibilita uma grande e rápida produção de mudas com alta sanidade [7,3]. O sucesso desta técnica depende de cuidados, que devem ser observados em todas as etapas do processo, que vão desde o material vegetal utilizado até a manipulação deste [3]. A propagação in vitro pode ser feita por via direta ou indireta. Na calogênese ocorre à indução e formação de calos, previamente à regeneração de gemas adventícias, que crescem e se desenvolvem em novas partes aéreas [4,3]. O tempo necessário para obter um calo é muito variável e depende da espécie estudada, do tecido doador do explante e da composição do meio de cultura. A incorporação de reguladores de crescimento ao meio promove a indução de calos em explantes cultivados in vitro. Quanto mais jovem o tecido, melhor será a sua resposta. As plantas adultas, obtidas a partir da diferenciação de calos, podem apresentar fenótipos diferentes dos verificados nas plantas matrizes de onde foram retirados os explantes. Como algumas dessas novas características podem ser herdáveis, passam a contribuir para o melhoramento de plantas, uma vez que representam uma fonte de variabilidade genética antes inexistente. [8].
Segundo Conceição et al. [1], várias espécies, inclusive as ornamentais, podem ser induzidas a formar calos em cultura, os quais podem ser induzidos a diferenciar plantas inteiras, pela inclusão de reguladores de crescimento nos meios de cultura e incubação em ambiente adequado.
Dentre as ornamentais mais procuradas situam-se plantas da família Araceae, que possui cerca de 108 gêneros e de 3.750 espécies de monocotiledôneas ervas e trepadeiras, com muitas espécies ornamentais. [6].
Do gênero Scindapsus são conhecidas cerca de 20 espécies, todas trepadeiras, que emitem suas raízes aéreas para se fixar em qualquer vara ou cana utilizadas como suporte. Tem aspecto parecido com os filodendros de folhas pequenas, com os quais também possui grande parentesco. As suas folhas em forma de coração tornam-se grandes com o crescer da planta, chegando ao dobro do tamanho das folhas juvenis. A espécie Scindapsus pictus é conhecida como jibóia. [2].
O presente trabalho objetivou induzir calos em lâminas foliares de Scindapsus sp, utilizando meios de cultura com diferentes concentrações de ANA e BAP combinados.

2. MATERIAL E MÉTODOS

A presente pesquisa foi desenvolvida no Laboratório de Biologia Celular, do Departamento de Zoologia e Genética do Instituto de Biologia, UFPel. Lâminas foliares de Scindapsus pictus foram lavadas em água corrente e água destilada (3x), antes de serem levadas para a capela de fluxo laminar para a instalação do experimento. A seguir, ficaram imersas em solução de álcool 70%, por 30 segundos, e em solução de hipoclorito de sódio comercial (1,5% de cloro ativo), adicionada de 2 gotas de Tween 20, por 30 minutos. As lâminas foliares, assim desinfestadas, foram cortadas, com o auxílio de pinça e bisturi, em explantes, com área aproximada de 1cm2, que foram inoculados em frascos com 30 mL de meio de cultivo. Os meios utilizados foram os seuintes: M32 = MS + 0,5 mg.L-1 ANA + 0,5 mg.L-1 BAP, M33 = MS + 0,5 mg.L-1 ANA + 1,0 mg.L-1 BAP, M34 = MS + 0,5 mg.L-1 ANA + 1,5 mg.L-1 BAP, M35 = MS + 0,5 mg.L-1 ANA + 2,0 mg.L-1BAP, M36 = MS + 0,5 mg.L-1 ANA + 2,5 mg.L-1 BAP, M37 = MS + 0,5 mg.L-1 ANA + 3,0 mg.L-1 BAP, M38 = MS + 1,0 mg.L-1 ANA + 0,5 mg.L-1 BAP, M39 = MS + 1,0 mg.L-1 ANA + 1,0 mg.L-1 BAP M40 = MS + 1,0 mg.L-1 ANA + 1,5 mg.L-1 BAP, M41 = MS + 1,0 mg.L-1 ANA + 2,0 mg.L-1 BAP M42 = MS + 1,0 mg.L-1 ANA + 2,5 mg.L-1 BAP, M43 = MS + 1,0 mg.L-1 ANA + 3,0 mg.L-1BAP, M44 = MS + 1,5 mg.L-1 ANA + 0,5 mg.L-1 BAP, M45 = MS + 1,5 mg.L-1 ANA + 1,0 mg.L-1 BAP, M46 = MS + 1,5 mg.L-1 ANA + 1,5 mg.L-1 BAP, M47 = MS + 1,5 mg.L-1 ANA + 2,0 mg.L--1 BAP, M48 = MS + 1,5 mg.L-1 ANA + 2,5 mg.L-1 BAP, M49 = MS + 1,5 mg.L-1 ANA + 3,0 mg.L-1 BAP, M50 = MS + 2,0 mg.L-1 ANA + 0,5 mg.L-1 BAP, M51 = MS + 2,0 mg.L-1 ANA + 1,0 mg.L-1 BAP, M52 = MS + 2,0 mg.L-1 ANA + 1,5 mg.L-1 BAP, M54 = MS + 2,0 mg.L-1 ANA + 2,5 mg.L-1 BAP, M55 = MS + 2,0 mg.L-1 ANA + 3,0 mg.L-1 BAP, M56 = MS + 2,5 mg.L-1 ANA + 0,5 mg.L-1 BAP, M57 = MS + 2,5 mg.L-1 ANA + 1,0 mg.L-1 BAP, M58 = MS + 2,5 mg.L-1 ANA + 1,5 mg.L-1 BAP, M59 = MS + 2,5 mg.L-1 ANA + 2,0 mg.L-1 BAP, M60 = MS + 2,5 mg.L-1 ANA + 2,5 mg.L-1 BAP, M61 = MS + 2,5 mg.L-1 ANA + 3,0 mg.L-1 BAP, M62 = MS + 3,0 mg.L-1 ANA + 0,5 mg.L-1 BAP, M63 = MS + 3,0 mg.L-1 ANA + 1,0 mg.L-1 BAP, M64 = MS + 3,0 mg.L-1 ANA + 1,5 mg.L-1 BAP, M65 = MS + 3,0 mg.L-1 ANA + 2,0 mg.L-1 BAP, M66 = MS + 3,0 mg.L-1 ANA + 2,5 mg.L-1 BAP, M67 = MS + 3,0 mg.L-1 ANA + 3,0 mg.L-1 BAP.
Os frascos foram incubados, por 49 dias, em câmara de crescimento com temperatura controlada (25ºC   2ºC), no escuro. Nesse período, foram realizadas avaliações semanais e atribuídas as seguintes notas, quanto ao aspecto do explante: nota 0 = explante oxidado e/ou contaminado, nota 1 = explante sem modificação, nota 2 = explante com bordas onduladas, nota 3 = explante com formação de pequenos calos e nota 4 = explante com calos totalmente formados. 
A unidade experimental foi composta de 5 explantes por frasco. O experimento fatorial foi delineado inteiramente ao acaso, com 5 repetições por tratamento. Os resultados obtidos foram analisados com o auxílio do pacote estatístico SANEST [10], sendo aplicado o teste de Duncan, ao nível de 5% de probabilidade.
3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

A análise da variação mostrou serem altamente significativas as diferenças entre os meios e entre as avaliações, sendo que não foram significativas as diferenças na interação entre estes dois fatores.
Tabela 1: Calogênese em Scindapsus pictus cultivado em MS acrescido de diferentes concentrações de ANA e BAP
	
Meio nº	Calogênese	
M32	0,544 j	
M33	0,819 defg	
M34	1,364 a	
M35	0,769 efghi	
M36	0,864 defg	
M37	1,003 bcd	
M38	0,934 bcde	
M39	0,989 bcde	
M40	0,839 defg	
M41	0,713 fghij	
M42	1,504 a	
M43	0,803 defg	
M44	0,609 hij	
M45	0,954 bcde	
M46	0,954 bcde	
M47	0,994 bcd	
M48	1,389 a	
M49	0,593 ij	
M50	0,688 ghij	
M51	0,916 bcde	
M52	0,933 bcde	
M53	0,783 defgh	
M54	0,919 bcde	
M55	0,817 defg	
M56	1,344 a	
M57	0,873 defg	
M58	0,934 bcde	
M59	1,114 b	
M60	1,000 bcd	
M61	1,099 bc	
M62	0,964 bcde	
M63	0,849 defg	
M64	0,980 bcde	
M65	0,814 defg	
M66	0,899 cdef	
M67	0,914 bcde	

O desdobramento das médias pelo Teste de Duncan (5%) mostrou que os meios 34, 42, 48 e 56 foram superiores estatisticamente aos demais e que o meio 32 foi inferior.
	Em trabalho realizado com calogênese em duas variedades de Zantedeschia aethiopica, Guisso et al. [5] avaliaram a influência dos reguladores de crescimento ANA (1,0 mg.L-1) e BAP (1,0 mg.L-1), obtendo bons resultados, tendo observado que os primeiros calos de Z. aethiopica branca surgiram aos 21 dias e os de Z. aethiopica verde foram observados somente aos 35 dias de incubação.

4- CONCLUSÃO

Os resultados obtidos permitem concluir que a utilização de algumas concentrações de ANA e BAP no meio de cultura foi propícia para a indução de calogênese nessa espécie, mas seria necessário um estudo com a combinação de outros reguladores de crescimento para tentar se verificar um melhor resultado, já que nem todas combinações foram favoráveis.
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5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] CONCEIÇÃO, H. E. O. da; PINTO, J. E. B.; OLIVEIRA, C. de S.; BARBOSA, A. S. A. B.; VIE IRA, I. M.S. Indução, formação e manutenção de calos em explante radical de timbó-vermelho.In: XIV Congresso Brasileiro de Floricultura e plantas Ornamentais e I Congresso Brasileiro de Cultura de Tecidos, 2003, Lavras, MG, Anais. Lavras: UFLA/FAEPE, 2003, p.237
[2] DONINNI, L.P. Preparo de lâminas foliares de aráceas ornamentais: desinfestação e tratamento antioxidante. Pelotas. 51 p. Monografia de Conclusão de Curso (Bacharelado em Ciências Biológicas - Meio Ambiente, Instituto de Biologia, UFPel), 2004.
[3] GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M.A. Micropropagação. In: Cultura de Tecidos e Transformação Genética de Plantas. Brasília: Embrapa SPI / Embrapa – CNPH, 1998, 864p.
[4] GEORGE, E.F.; SHERRINGTON, P.D. Plant propagation by tissue cultured. Handbook and directory of commercial laboratories. Eversley: Exegetics, 1984. 709p.
[5] GUISSO, A.P.; FERREIRA-MOURA, I.; DONINI, L.P.; PEREIRA, J.M.; VIÉGAS, J. Indução de calogênese em lâminas foliares de aráceas ornamentais. XII Congresso de Iniciação Científica e V ENPOS , 2003, Pelotas, RS, Anais. Pelotas: UFPel, 2003. 
[6] IAS- International Aroid Society, Inc. The Genera of Araceae. Capturado em 5 de outubro de 2003. http://www.aroid.org/genera/index.html
[7] MANTELL, S. H.; MATTHEWS, J. A.; MCKEE, R. A. Princípios de biotecnologia em plantas: uma introdução à engenharia genética em plantas. Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética, 1994. 344p.
[8] PINTO, R.J.B. Introdução ao melhoramento genético de plantas. Maringá, PR: Universidade Estadual de Maringá, 1995, 275p.
[9] SILVEIRA, R.B.A./Sociedade Brasileira de Flores e Plantas Ornamentais (Adap. José, A.R.S./UESB) Floricultura no Brasil. Capturado em 25 setembro 2003. On line. Disponível na Internet: http://www.uesb.br/flower/florbrasil.html#inicio, 1993.
[10] ZONTA, E.P., MACHADO, A. A. SANEST - Sistema de Análise Estatística para Microcomputadores. Registrado na Secretaria Especial de Informática sob nº 066060 - categoria A. Pelotas, RS: Universidade Federal de Pelotas.