AVALIAÇÃO PRESUNTIVA DA ATIVIDADE ANTIMICROBIANA DE            Pycnoporus sanguineus

Gameiro, P. H.1*; Nascimento, J. S.1; Ribeiro, G. A. 2

1 Laboratório Experimental de Micologia – DEMP – IB – UFPel
2  Laboratório de Microbiologia – DEMP  – IB  – UFPel
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1. INTRODUÇÃO

Muitos dos antibióticos utilizados para o tratamento de doenças foram extraídos de fungos a exemplo da Penicilina, substância produzida pelo fungo Penicilium notatum, descoberta por Alexander Fleming em 1928 [1]. Já a primeira investigação do potencial de Basidiomycota como agentes produtores de antibióticos foi realizada por Anchel, Hervey, Wilkins em 1941, observando extratos de basidiomas e cultura de micélios de inúmeras espécies. Dentre estes cabe destacar a atividade antimicrobiana de Pycnoporus sangüineus, que tem sido pesquisada desde 1946, quando Bose isolou poliporina, um componente ativo contra bactérias gram-negativas e gram-positivas [4]. Este fungo é um Basidiomycota pertencente à família Poliporaceae, responsável pela podridão branca de madeiras e popularmente vem sendo utilizado empiricamente no tratamento de várias enfermidades em aldeias indígenas como anti-hemorrágico [3,8]. Estudos vêm indicando sua alta capacidade de inibição do desenvolvimento de bactérias, actinomicetes e até outros fungos devido à presença da substância cinabarina, um componente com pigmento alaranjado [5, 6, 7]. Este cogumelo é de ocorrência ampla, sendo facilmente encontrado em regiões tropicais e subtropicais e fáceis cultivo [2].
Objetiva-se com este trabalho avaliar a atividade antimicrobiana presuntiva de P. sanguineus, contra Escherichia coli, Salmonella spp. e Staphylococcus aureus. 

2. MATERIAIS E MÉTODOS

O isolado de P. sanguineus (PSA0104) foi multiplicado em meio ágar dextrose batata (BDA), a partir da transferência de uma porção do basidioma para a superfície central do meio de cultivo em placas de Petry. A incubação foi realizada a 25°C por cinco dias, para obtenção de crescimento miceliano (Figura 1). A partir do crescimento miceliano obtido, tomaram-se três discos de 0,5 cm de diâmetro da cultura, colocados eqüidistantes entre si sobre o meio BDA, sendo as placas incubadas nas mesmas condições durante 24 horas.

As cepas de Escherichia coli, Salmonella spp. e Staphylococcus aureus foram semeadas nas placas com meio BDA após 24 h de crescimento parcial do fungo, em triplicatas para cada bactéria analisada. A partir da utilização de um “swab”, a semeadura foi feita próxima do crescimento de P. sanguineus, porém, para possibilitar o crescimento das bactérias e observar se houve inibição, deixou-se um espaço de ± 0,5 cm entre a margem da colônia fúngica em fase de crescimento e a bactéria semeada, incubando-se nas mesmas condições por cinco dias.  O inóculo foi ajustado a partir da escala de Mac Farland, utilizando-se o tubo 0,5 da mesma como concentração padrão, o que equivale a 1,5x108 bactérias/mL.
Para análise da atividade antimicrobiana adotou-se uma metodologia presuntiva na execução deste trabalho. Para isto, observou-se a reação de crescimento entre os microrganismos inoculados, classificando-os como antagônicos ou indiferentes, conforme o padrão de crescimento. 

Figura 1. Isolamento de P. sanguineus: a) retirada da porção do basidioma; b) disposição da porção sobre o meio de cultura à base de batata (BDA)

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Entre as três espécies de bactérias analisadas Salmonella spp interferiu no crescimento micelial de P. sanguineus, enquanto que no teste para E. coli e S. aureus houve crescimento do fungo sobre as colônias destas bactérias (Figura 2). Mesmo as bactérias tendo sido semeadas próximas a colônia fúngica, estas podem ter se multiplicado antes que P. sanguineus exercesse algum efeito antimicrobiano. Provavelmente este fungo exerça sua atividade antimicrobiana sobre E. coli e S. aureus quando o princípio ativo estiver presente no meio antes da multiplicação bacteriana. Conforme resultados obtidos por [7] a cinabarina, produzida por P. sanguineus, é mais ativa contra bactérias gram-positivas do que contra gram-negativas. Porém, a partir do trabalho realizado, foram obtidos resultados diferentes, visto que ação desta estirpe de Basidiomycota não inibiu gram-negativas, como E. coli e gram-positivas, como              S. aureus. Já no caso da Salmonella spp. onde ocorreu a inibição do desenvolvimento micelial de P. sanguineus pode-se evidenciar um efeito antagônico entre estes dois organismo.
Tendo-se em vista que o fungo cresce de forma radial enquanto as bactérias dispersam-se por todo o meio num tempo de geração menor, a ação antimicrobiana deste fungo pode ser inibida e como a metodologia empregada possui apenas caráter presuntivo, evidencia-se a importância de se realizar testes confirmativos que possibilitem a real avaliação do efeito antimicrobiano do P. sanguineus para as bactérias analisadas.

  

Figura 2. Culturas de bactérias para avaliação presuntiva da atividade antimicrobiana in vitro de P. sanguineus . (a) E. coli, (b) S. aureus e (c) Salmonella spp.

4. CONCLUSÕES
A partir do experimento realizado pode-se concluir que Pycnoporus sanguineus cresce na presença de E. coli e S. aureus, diferentemente de seu comportamento em relação a Salmonella spp. Sendo assim, é importante salientar a necessidade da realização de testes utilizando diretamente o princípio ativo extraído do cogumelo, visto que a partir da semeadura deste fungo em conjunto com a bactéria a ser analisada não foi possível obter-se resultados satisfatórios.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] ALEXOPOULOS, C.J.; MIMS, C.W., BLACKWELL, M. Introductory Mycology. 4.ed. Nova York:John Wiley & Sons, 1996, p.509–681.
[2] GAMEIRO, P.H.; ARMAS, R. D.; BERNARDI, E.; NASCIMENTO, J. S. Levantamento de Fungos Macroscópicos na Região de Pelotas – RS. In: XII Congresso de Iniciação Científica, 2003. Anais do XII Congresso de Iniciação Científica. Pelotas: UFPel, 2003. 
[3] RAVEN, P. H.; EVERT, R.F.; EICHHORN, S.E. Biologia Vegetal. 6.ed. Rio de Janeiro, Guanabara Koogan, , 2001, p.297–333.
RIBEIRO, M.C; SOARES, M. M. S. R. Microbiologia Prática – Roteiro e Manual – Bactérias e Fungos. São Paulo, Atheneus, 1.ed., 2000, p.71-80.
[4] ROSA, L.H.; MACHADO, K.M.G; JACOB, C.C. et al. Screening of Brazilian basidiomycetes for antimicrobial activity. Mem. Inst. Oswaldo Cruz, 2003, v.98, n.7, p.967-974. 
[5] SMÂNIA, A.J; SMÂNIA, E.F.A.; GIL, M.L.; BENCHETRIT, L.C; CRUZ, F.S. Antibacterial activity of a substance produced by the fungus Pycnoporus sanguineus (Fr.) Murr. J. Ethnopharmacol.1995, v. 45, p.177-181.
[6] SMÂNIA, E. F. A. Optimal Parameters For Cinnabarin Synthesis By Pycnoporus Sanguineus. J. Chem. Biotechnol, 1997, v.70, p.57-59. 
[7] SMÂNIA, E.F.A.; SMÂNIA, A.J; LOGUERCIO-LEITE, C. Cinnabarin synthesis by Pycnoporus sanguineus strains and antimicrobial activity against bacteria from food products. Rev. Microbiol. São Paulo, 1998, v.29, n.4, p.317-320.
[8] TEIXEIRA, D.E.; COSTA, A.F., SANTANA, M. A. E. Test for natural decay resistance of the sugar cane bagasse particleboard. Scientia Forestalis. 1997, n.52, p.29-34.