EFEITO ALELOPÁTICO, CITOTÓXICO E GENOTÓXICO DO GINSENG BRASILEIRO (Pfaffia paniculata Kuntze)

Büttow, M. V.¹*; Stein, V.¹; Heiden, G.¹; Iganci, J.R.¹; Cattelan, L.¹; Rocha, B.H.G.², Bobrowski, V.L.²
¹Acadêmico do Curso de Ciências Biológicas/UFPel ²Dra..Professora Adjunta do Departamento de Zoologia e Genética/IB-UFPel , Departamento   de Zoologia e Genética, Instituto de Biologia, UFPel Campus Universitário s/n, C.P. 354, Pelotas-RS CEP 96010-970 *mbuttow_ib@ufpel.tche.br

1. INTRODUÇÃO

A Pfaffia paniculata Kuntze, é uma das espécies pertences à família Amaranthaceae, conhecidas como ginseng brasileiro ou fáfia. Suas raízes são utilizadas como medicinais, tendo ação antinflamatória, cicatrizante, imunoestimulante e tônica para o organismo [3].
 Atualmente esta espécie vem sendo muito procurada devido as suas supostas ações anabolizantes. A alantoína presente em sua composição possui ação cicatrizante e regeneradora celular [5]. Dentre as várias drogas vegetais presentes no mercado nacional, a raiz de fáfia tem sido utilizada como substituta do "ginseng coreano" (Panax ginseng, planta exótica) no tratamento da impotência sexual, do estresse e da diabetes. Esse fato tem despertado grande interesse nas indústrias farmacêuticas, pois a demanda do P. ginseng é maior do que a sua capacidade produtiva, o que o torna uma fonte alternativa com lucratividade garantida. Estima-se que o período entre coletas deva ser de aproximadamente cinco anos, pois este é o tempo necessário ao amadurecimento da planta e ao desenvolvimento de seu princípio ativo [4]. Embora sem contra-indicação na literatura publicada, deve ser usada com indicação terapêutica. O ácido pfáfico mostrou efeito inibitório sobre o crescimento de células tumorais in vitro, [6] porém se ingerido em superdosagem pode causar nervosismo, hipertensão, diarréia e insônia [5].
Alelopatia é definida como a utilização de plantas que liberam substâncias tóxicas a outras, reduzindo, ou até mesmo inibindo completamente o seu desenvolvimento. Alguns adubos verdes já vêm sendo citados na literatura como potenciais produtores de substâncias alelopáticas [11]. 
As sementes são excelentes organismos para bioensaios. Enquanto estiverem desidratadas elas permanecem dormentes e podem ser armazenadas por longos períodos sem perder viabilidade. No entanto, assim que são reidratadas, elas entram no processo de germinação, durante o qual, sofrem rápidas mudanças fisiológicas e tornam-se altamente sensíveis ao estresse ambiental. A idéia por trás de um teste de toxicidade, é que o organismo teste, neste caso, sementes de alface, irão responder de acordo com a concentração de um composto químico, ou de um princípio ativo. Em determinada concentração, todos os organismos teste poderão morrer. Em soluções mais diluídas, algum nível de inibição irá ocorrer na germinação das sementes, ou no crescimento das radículas. Se a concentração for muito baixa, não será detectada nenhuma resposta. Este é chamado de experimento dose/resposta. A partir de várias doses de um composto, podemos medir a resposta do organismo utilizado no bioensaio [10]. 
Os bioensaios apresentam vantagens e desvantagens. Um ponto positivo, em um experimento como este, é que o organismo teste pode reagir com múltiplos compostos ao mesmo tempo, enquanto que a análise química mede apenas um composto de cada vez [7]. Esses tipos de bioensaios são úteis para verificarmos citotoxicidade e genotoxicidade.
O objetivo deste trabalho foi avaliar o efeito alelopático, citotóxico e genotóxico do decocto das raízes de P. paniculata sobre a germinação e divisões celulares de alface (Lactuca sativa L.).

2. MATERIAL E MÉTODOS

O experimento consistiu em testar diferentes concentrações de decocto de P. paniculata sobre o poder germinativo e o índice mitótico de L. sativa. 
Para o preparo do decocto, utilizou-se raízes desidratas de fáfia, adquiridas no comércio local. Pesou-se 20g de raízes de fáfia que foram depois fervidas em 500mL de água destilada por um período de 15 minutos. O decocto obtido desta forma foi diluído de modo a obter-se três concentrações diferentes, sendo elas: 10, 20 e 40 mg/mL.
O delineamento experimental utilizado foi inteiramente casualizado. As sementes de alface, obtidas no comércio local, foram distribuídas em quatro repetições de 100 sementes para cada concentração. Elas foram acondicionadas em gerbox contendo papel germiteste embebido com as diferentes concentrações,(2,5x p/v), além de um controle com água destilada. As sementes foram mantidas em BOD com temperatura contínua de 20ºC e fotoperíodo de oito-dezesseis horas. A germinação foi avaliada aos quatro e sete dias após a semeadura, conforme as regas de análise de sementes [8].
Os efeitos citotóxicos e genotóxicos foram avaliados através da análise das divisões celulares, do índice mitótico (IM) e de aberrações cromossômicas (AC). Para tanto, os meristemas apicais radiculares das sementes germinadas aos 4 dias foram coletados e fixados em Carnoy (3:1 álcool étílico: ácido acético). O material assim obtido foi armazenado em temperatura ambiente por 2 a 24h e após transferido para o freezer até o momento da confecção das lâminas. As lâminas foram preparadas através da hidrólise dos meristemas em HCl 5N por 15 minutos em temperatura ambiente, e, em seguida, coradas com orceína acética 2%. Foram contadas 2000 células por tratamento em microscópio óptico a uma magnitude de 40x. Para comparação de médias foi utilizado o teste de Duncan. 

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Quanto ao percentual de germinação, não houve diferença significativa entre os tratamentos e o controle. A viabilidade média das sementes de alface foi de 94% no controle. As concentrações utilizadas não inibiram a germinação. Desse modo, não foi detectado efeito alelopático sobre a germinação de sementes de alface (Figura 1). Atualmente, vários experimentos vêm sendo realizados com o objetivo de estudar a citotoxicidade de extratos vegetais, avaliando a ação destes sobre a germinação de sementes de alface. Moraes, et. Al. (2003) verificou inibição significativa (P<0,01) da germinação de sementes de alface por extratos feitos com matéria seca de Amenia tomentosa var. anthriscifolia e A. villosa (Schizaeaceae). Estes também inibiram o desenvolvimento das plântulas [9]. Plantas sensíveis a compostos originários de outros organismos podem ser influenciadas na assimilação de nutrientes, no crescimento, na fotossíntese, na respiração, na síntese de proteínas, etc. Assim, é importante que se conheça essas substâncias, entendendo seu modo de ação, e em que estádio de desenvolvimento da planta elas são mais efetivas [12].

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Figura 1 – Percentual de germinação de sementes de alface sob efeito de diferentes 
concentrações do decocto de fáfia

Carneiro et. Al. (2003) verificou que extratos de três espécies de Eucalyptus inibiram tanto a velocidade como a porcentagem de germinação de sementes de alface em diferentes concentrações [2]. Ao contrário, Almeida et. al. (2003) não encontrou efeito de extrato aquoso de rubim (Leonorus sibiricus L.) sobre sementes de alface. [1]

	
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Figura 2 – Índice mitótico em células meristemáticas apicais radiculares de alface sob efeito de diferentes concentrações do decocto de fáfia.

Porém, encontrou-se diferença estatisticamente significativa na avaliação do IM entre as concentrações de 40 e 20 mg/mL e o controle. Houve redução do IM (P<0,05) de 27,26% no controle para 16,18 (40mg/mL) e 15,32% (20mg/mL), demonstrando ação citotóxica (Figura 2).  

As divisões celulares observadas não apresentaram aberrações cromossômicas evidenciando a ausência de atividade genotóxica.
Do mesmo modo, Marques et. al. (2003) encontrou resultados de baixa toxicidade para o liofilizado e o extrato seco padronizado da espécie Pfaffia glomerata (ginseng brasileiro) em roedores e humanos, sendo que também não apresentam efeitos agudos em modelos animais e promovem benefício na aprendizagem e na memória de ratos idosos tratados cronicamente, apesar de não mostrar benefícios sobre a capacidade física de voluntários testados [13]. 

4. CONCLUSÃO

Concluiu-se que o extrato aquoso de Pfaffia paniculata, nas concentrações utilizadas não apresentou efeito alelopático sobre a germinação de alface, assim como não apresentou efeito genotóxico. Observou-se, porém efeito citotóxico, devido à redução no índice de divisões celulares em tecidos meristemáticos apicais radiculares de sementes de cebola.

5. REFERÊNCIAS

[1]ALMEIDA L.F.R.; DELACHIAVE. M.E.A.; BRAGA, J.F. Ação alelopática de extratos aquosos de rubim (Leonorus sibiricus L.) na germinação e desenvolvimento inicial de alface, tomate e milho. Brazilian journal of plant physiology, 2003, v.15, p.307
[2]CARNEIRO, I.L.R.; COELHO, J.C.; GARCIA, Q.S. Potencial alelopático de Eucalyptus camaldulensis Dehnh, E. randis (W. Hill ex Maien) e E.urophyla (S.T.Blake) na germinação de angico (Anadenanthera pererina (L.)Speg), tamboril (Enterolobium sp.), alface (Lactuca sativa L.) e sorgo (CV BR 304). Brazilian journal of plant physiology, 2003, v.15, p.306. 
[3]GOMES, P.C.L.; CUNICO, S. C.; AMARAL W. DO. Estudos sobre o cultivo de Pfaffia glomerata (Amaranthaceae) Capturado em 10/04/04. Disponível na internet http://www.unibem.br/pesquisa/academica/projeto%20cultivo%20de%20pfaffia%20gl omerta. Capturado em 10/08/04
[4]http://www.henrifarma.com.br/fafia.htm Capturado em 10/08/04
[5]http://planeta.terra.com.br/educacao/inventabrasil/pfaffia.htm Capturado em 10/08/04
[6]http://www.unilavras.edu.br/cepe/fotos/ginsengbrasil.htm Capturado em 10/08/04.
[7] Inquiry - Lettuce Seed Bioassays.htm Capturado em 10/08/04. Disponível na internet ei.cornell.edu/toxicology/bioassays/lettuce/RefTest.asp -
[8]MINISTÉRIO DA AGRICULTURA E REFORMA AGRÁRIA, SECRETARIA NACIONAL DE DEFESA AGROPECUÁRIA, DEPARTAMENTO NACIONAL DE DEFESA VEGETAL & COORDENAÇÃO DE LABORATÓRIO DE VEGETAL., Regras para Análise de Sementes. Brasília: 1992.365p. 
[9]MORAES, M.G. DE; OLIVEIRA A.A.Q. DE; BARBOSA, J. DA S.P.; SANTOS, M.G. Efeito alelopático de extratos aquosos de Anemia tomentosa e A. villosa (pteridophyta) na germinação e crescimento de alface. Brazilian journal of plant physiology, 2003, v. 15, p. 288.
[10]The Volunteer Monitor, Vol_ 8, No_ 1, Spring 1996 -- A Simple Bioassay Using Lettuce Seeds.htm. Capturado em 10/08/04. Disponível na internet ei.cornell.edu/toxicology/bioassays/lettuce/
[11]VIDAL, M.C.; DINIZ, B.M.; PEIXOTO, H.F.N. Efeito da aplicação de extratos de sementes de adubos verdes na germinação de cenoura. Brazilian journal of plant physiology, 2003, v.15, p.293. 
[12]VIDAL, M.C.; PEIXOTO, H.F.N., DINIZ, B.M. Aplicação de extratos da parte aérea de espécies de adubos verdes e possível efeito na germinação de tomate. Brazilian journal of plant physiology, 2003, v.15, p.292. 
[13] www.fundjpar.org.br/pre_2001.htm Capturado em 10/08/04. On line.