CALOGÊNESE EM LÂMINAS FOLIARES DE Zantedeschia eliottiana,  DE FLOR AMARELA, COM DIFERENTES CONCENTRAÇÕES DE REGULADORES DE CRESCIMENTO

Guisso,A.P.*; Ferreira-Moura,I.; Donini,L.P.; Ribeiro, M.F.; Pereira, J.M.; Viégas, J.
Laboratório de Biologia Celular, Departamento de Zoologia e Genética, Instituto de Biologia, UFPel
 Campus Universitário  – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900 – Pelotas, RS 
anaguisso@yahoo.com.br

1. INTRODUÇÃO

A família Araceae ocorre, naturalmente, em todos os continentes, exceto na Antártida. É, no entanto, predominantemente tropical, pois a temperatura ideal, para suas espécies se desenvolverem, está entre 16°C e 30°C, com exceção do copo-de-leite que suporta temperaturas abaixo de 0°C. As aráceas, compostas por plantas terrestres, aquáticas ou epífitas, com hábitos herbáceo, arbustivo ou trepador, compreendem diversos gêneros que envolvem grande quantidade de plantas com características ornamentais devido à folhagem ou flores, como os antúrios, caládios, lírios-da-paz e copos-de-leite [3]. 
A floricultura é um dos setores da agricultura que tem proporcionado excelente retorno econômico. No Brasil, sua expansão comercial começou a partir de meados dos anos 60 e, desde então, o consumo de flores e plantas ornamentais apresenta crescente e elevada demanda, exigindo um sistema eficiente de distribuição e comercialização para a produção que utiliza, cada vez mais, tecnologias avançadas e exige do produtor maior conhecimento técnico [10]. 
A cultura de tecidos é um processo que isola pequenos fragmentos de tecido vivo, os explantes, e os induz a regenerar o organismo inteiro. A aplicação mais prática da cultura de tecidos é a propagação vegetativa in vitro, denominada micropropagação, devido ao tamanho dos propágulos utilizados, que possibilita uma grande e rápida produção de mudas de alta sanidade [5,2]. O sucesso desta técnica depende de cuidados, que devem ser observados em todas as etapas do processo, que vão desde o material vegetal utilizado até a manipulação deste [2]. A propagação in vitro pode ser feita por via direta ou indireta. Na organogênese indireta ou calogênese ocorre à indução e formação de calos previamente à regeneração de gemas adventícias que crescem e se desenvolvem em novas partes aéreas [1,2]. O tempo necessário para obter um calo é muito variável e depende da espécie de planta, da origem do tecido do explante e da composição do meio de cultura. A incorporação de reguladores de crescimento ao meio promove a indução de calos em explantes cultivados in vitro. Quanto mais jovem o tecido, melhor será a sua resposta. As plantas adultas obtidas a partir da diferenciação de calos podem apresentar fenótipos diferentes dos verificados nas plantas matrizes de onde foram retirados os explantes. Como algumas dessas novas características podem ser herdáveis, passam a contribuir para o melhoramento de plantas, uma vez que representam uma fonte de variabilidade genética antes inexistente [7].
Com este trabalho, objetivou-se promover o estabelecimento in vitro de Zantedeschia eliottiana, via calogênese, utilizando diferentes meios de cultivo.

2.	MATERIAL E MÉTODOS

Lâminas foliares de Zantedeschia eliottiana de flor amarela, genótipos 1 e 2,  excisadas das plantas-mãe, foram lavadas em água corrente/5’ e em água destilada /3 vezes. Em ambiente asséptico, as lâminas foram mergulhadas em álcool 70%/30’’, lavadas em água destilada estéril/3 vezes e imersas em solução de hipoclorito de sódio comercial com 1,5% de cloro ativo/20’. As folhas foram cortadas, com auxílio de pinça e bisturi, e os explantes ( 1cm2) foram colocados em frascos com 30mL de meio, com a face adaxial em contato com o mesmo. 
Os meios de cultura utilizados foram constituídos pelo meio básico MS [6], acrescidos de diferentes concentrações e combinações dos reguladores de crescimento Cin (cinetina) e 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético) e Cin e ANA (ácido naftalenoacético), conforme Tabela. Os frascos foram mantidos em câmara de crescimento/escuro/25  2°C. A unidade experimental foi de 5 explantes/frasco e o  delineamento estatístico inteiramente casualizado, com 5 repetições/tratamento. O material foi avaliado semanalmente/42 dias, de acordo com as seguintes notas: explantes oxidados e/ou contaminados (nota 0), sem modificações (nota 1), com bordas onduladas (nota 2), com pequenos calos (nota 3) e com calos totalmente formados (nota 4). A análise estatística constou da análise da variação e do teste de Duncan [11].

3- RESULTADOS E DISCUSSÃO

A tabela mostra que Zantedeschia eliottiana genótipo 1 teve indução de calos significativamente superior no meio MCA1, o qual diferiu somente dos meios MCD1 e MCD2. Zantedeschia eliottiana flor amarela genótipo 2 teve processo de calogênese significativamente melhor nos meios MCA4, MCA3 e MCA1, os quais diferiram dos demais.

Calogênese de Zantedeschia eliottiana, flor amarela, genótipos 1 e 2, formados em diferentes meios de cultura, em 42 dias de cultivo in vitro.
MS acrescido de	Zantedeschia eliottiana	
Meio	Cinetina
mg.L-1	ANA
mg.L-1	2,4-D
mg.L-1	Genótipo 1	Genótipo 2	
MCA1	0,5 	0,5	-	          2,38 a	          1,51 a	
MCA2	0,5	1,0	-	          1,97 abc	          0,63 c	
MCA3	1,0	0,5	-	          2,13 ab	          1,52 a	
MCA4	1,0	1,0	-	          1,93 abc	          1,64 a	
MCD1	0,5	-	0,5	          1,91 bc	          1,06 bc	
MCD2	0,5	-	1,0	          1,68 c	          1,09 b	
MCD3	1,0	-	0,5	          2,27 ab	          1,08 b	
MCD4	1,0	-	1,0	          2,17 ab	           0,83 bc	
 As médias seguidas por letras distintas, nas colunas, diferem entre si, pelo teste de Duncan, ao nível de 5%.

De modo geral, o genótipo 1 parece mais responsivo aos meios indutores de calogênese do que o genótipo 2. Ambos genótipos responderam melhor ao meio MCA1, que possui as menores concentrações tanto de cinetina como de ANA. Os meios de cultura em que o genótipo 2 teve desempenho superior foram aqueles acrescidos como ANA, apesar de que seu pior desempenho ocorreu, também, em um meio acrescido com este regulador de crescimento (MCA2). O genótipo 2, também, apresentou níveis de calogênese inferiores nos meios complementados com 2,4-D.
Zantedeschia aethiopica, de flor branca, apresentou os primeiros calos aos 21 dias de incubação e a Zantedeschia aethiopica de flor verde, aos 35 dias, tanto no meio MS/2 (MS com metade da concentração de macronutrientes) acrescido de 0,08 mg.L-1 de 2,4D + 1,0 mg.L-1 de BAP + 1,0 mg.L-1 de 2ip (2-isopenteniladenina), como no meio MS acrescido de 1,0 mg.L-1 de BAP + 1,0 mg.L-1 de ANA [4]. Este último meio, de melhor resultado para Caladium x hortulanum [8], também foi o que levou a uma maior indução de calos em Zantedeschia aethiopica, de flor verde [4]. O meio MS acrescido de 1,0 mg.L-1 de 2,4D + 1,0 mg.L-1 de CIN, utilizado por Rosa [9] para Scindapsus pictus foi, também, o de melhor resultado para a calogênese de Scindapsus aureus, que iniciou aos 21 dias de incubação [4]. 

4. CONCLUSÕES

	Os resultados obtidos permitem concluir que o processo de indução de calogênese em Zantedeschia eliottiana deve-se tanto ao desempenho genotípico, como ao tipo de meio de incubação. No entanto, independentemente de genótipo, esta espécie responde melhor ao meio com menores quantidades tanto de cinetina como de ANA.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 

[1] GEORGE, E.F.; SHERRINGTON, P.D. Plant propagation by tissue cultured. Handbook and directory of commercial laboratories. Eversley: Exegetics, 1984. 709p.
[2] GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M.A. Micropropagação. In: Cultura de Tecidos e Transformação Genética de Plantas. Brasília: Embrapa SPI / Embrapa – CNPH, 1998, 864p.  
[3] GRAYUM, M.H. Evolution and Phylogeny of the Araceae. In: Annals of the Missouri Botanical Garden, p. 629-697, 1990.
[4] GUISSO, A. P.; FERREIRA-MOURA, I.; SOUZA, J.A. de.; DONINI, L.P.; PEREIRA, J.M.; VIÉGAS, J. Indução de calogênese em lâminas foliares de aráceas ornamentais. IN: XII Congresso de Iniciação Científica – Prêmio Pesquisador – UFPel, 2003, Pelotas. Resumos. V.CD.
[5] MANTELL, S. H.; MATTHEWS, J. A.; MCKEE, R. A. Princípios de biotecnologia em plantas: uma introdução à engenharia genética em plantas. Ribeirão Preto: Sociedade Brasileira de Genética, 1994. 344p. 
[6] MURASHIGE, T.; SKOOG, F.I.A.. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum.  n. 15, p.473-497, 1962.
[7] PINTO, R.J.B. Introdução ao Melhoramento Genético de Plantas. Maringá, PR: Universidade Estadual de Maringá, 1995, 275p.
[8] ROCHA, M.T.R. da. Propagação in vitro  dos gêneros Anthurium e Caladium. Pelotas,1999. 82f. Dissertação (Mestrado em Ciências: Agronomia – Fitomelhoramento. Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, Universidade Federal de Pelotas,1999.
[9] ROSA, D.L.; FERREIRA, I.T.; PASTORINI, L.D.; SOUZA, J.A.; PEREIRA, L.M.; CORREA, M.G.S.; VIÉGAS, J. Indução de calos em duas espécies da família Araceae. IN: 47º Congresso Nacional de Genética, 2001, Águas de Lindóia. Genetics and Molecular Byology, Supplement, Águas de Lindóia, SP: Sociedade Brasileira  de Genética, 2001.
[10] SILVEIRA, R.B.A./Sociedade Brasileira de Flores e Plantas Ornamentais (Adap.  José, A.R.S./UESB) Floricultura no Brasil. Capturado em 25 setembro 2003. On line. Disponível na Internet: http://www.uesb.br/flower/florbrasil.html#inicio, 1993. 
[11] ZONTA, E.P.; MACHADO, A. D.; SILVEIRA JUNIOR, P. Sanest: Sistema de análise estatística para microcomputadores. Registrado na secretária especial de informática sob nº 066060 – categoria  A. Pelotas, RS: UFPel. 1984.