CALOGÊNESE EM Dieffenbachia sp.:
II. RESPOSTA A COMBINAÇÕES DOS REGULADORES BAP, ANA E 2,4-D

Guisso, A. P.*; Ferreira-Moura, I.; Donini, L. P.; Ribeiro, M.F. de.; Pereira, J. M.; Viégas, J. 
Laboratório de Biologia Celular, Departamento de Zoologia e Genética, Instituto de Biologia, UFPel
 Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900 – Pelotas, RS
anaguisso@yahoo.com.br

1. INTRODUÇÃO

O mercado mundial de flores vem apresentando um crescimento elevado desde a década de 90, tendo se tornado um dos fatores de grande importância para o agronegócio. A floricultura abrange desde o cultivo de plantas ornamentais, floríferas ou não, até produção de sementes, bulbos e mudas [2;17]. Dentre as ornamentais mais procuradas situam-se plantas da família Araceae, que possui de 108 gêneros e 3.750 espécies de monocotiledôneas ervas e trepadeiras, com muitas espécies ornamentais, como antúrio, lírio-da-paz, copo-de-leite, entre outras [6].
 	As aráceas possuem caule herbáceo; curto nas terrestres e palustres; comprido e trepador nas epifíticas. As folhas, grandes e coriáceas, dispõem-se em rosetas na base ou no ápice do caule, exceto nas espécies escandentes. Em folhas inteiras ou partidas, a nervação é reticulada ou aberta. Na maioria das espécies terrestres e palustres, as raízes são tuberosas, grandes e ricas em amilo; nas espécies ascendentes e epifíticas são adventícias. As flores, estão dispostas numa espiga espessa, o espádice, que é envolvido por uma folha modificada, a espata. O conjunto de espádice e espata, freqüentemente de cores vivas, é considerado como uma flor pelos leigos. As flores individuais são unissexuais ou hermafroditas, sésseis e muito pequenas. O fruto é sempre uma baga [16]. O gênero Dieffenbachia é composto por espécies que apresentam folhas largas, com manchas variegadas e chamativas, as quais variam de acordo com a espécie. As plantas deste gênero são conhecidas, popularmente, como comigo-ninguém-pode e são nativas da Colômbia e Costa Rica [2].
A produção de flores e plantas ornamentais exige, atualmente, além de um sistema eficiente de distribuição e comercialização do produto, um maior conhecimento técnico da parte do produtor e a utilização de tecnologias avançadas [17]. A cultura de tecidos é uma importante técnica para propagação que vem sendo utilizada com sucesso em várias espécies, podendo ser feita por via direta ou indireta. A organogênese indireta ocorre quando a regeneração de gemas adventícias é precedida pela formação de calo, que é uma massa de células de proliferação contínua e mais ou menos desordenada. A calogênese é um método potencial de propagação, caso as variações genéticas não atinjam valores percentuais elevados [3;4]. O sucesso no estabelecimento de calos depende de vários fatores, entre os quais o uso de reguladores de crescimento e nutrientes selecionados para rápida divisão das células, as condições fisiológicas do tecido utilizado como explante e da planta doadora de explante [14].
	Objetivou-se promover o estabelecimento in vitro de Dieffenbachia sp., via calogênese, utilizando meios de cultivo com diferentes concentrações e combinações de reguladores de crescimento.

2.	MATERIAL E MÉTODOS

Lâminas foliares de Dieffenbachia sp foram excisadas das plantas-mãe, lavadas em água corrente/5’ e em água destilada/3 vezes. Em ambiente asséptico, as folhas foram mergulhadas em álcool 70%/30’’, lavadas em água destilada estéril/3 vezes e imersas em solução de hipoclorito de sódio comercial com 1,5% de cloro ativo/20’. Após a desinfestação, as folhas foram imersas em solução antioxidante de 200 mg.L-1 de cisteína/20’. As folhas foram cortadas em placas de Petry, contendo a solução antioxidante, e os explantes ( 1cm2) foram colocados em frascos com 30mL de meio de cultura, com a face adaxial em contato com o meio. 
Os meios de cultura utilizados foram constituídos pelo meio básico MS [10], acrescidos de diferentes concentrações e combinações dos reguladores de crescimento BAP (6-benzilaminopurina) e 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético), conformeTabela 1, e BAP e ANA (ácido naftalenoacético), conforme Tabela 2. Os frascos foram mantidos em câmara de crescimento/escuro/252°C. A unidade experimental foi de 5 explantes/frasco e o delineamento estatístico foi inteiramente casualizado, com 5 repetições/tratamento. O material foi avaliado semanalmente/42 dias: explantes oxidados e/ou contaminados (nota 0), sem modificações (nota 1), com bordas onduladas (nota 2), com pequenos calos (nota 3) e com calos totalmente formados (nota 4). A análise estatística constou da análise da variação e do teste de Duncan [20].

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Tabela 1: Calogênese em lâminas foliares de Dieffenbachia sp, incubadas em meio de cultura MS contendo diferentes combinações de BAP e ANA, após 42 dias de cultivo in vitro.
Meio de cultivo 	MS acrescido de	Médias de calogênese	
	BAP (mg.L-1)	ANA (mg.L-1)		
MBA1	0,5 	0,5 	2,74 	
MBA2	0,5 	1,0	2,68 	
MBA3	1,0	0,5	2,63 	
MBA4	1,0	1,0	2,66 	
As médias, nas colunas, não diferem entre si, pelo teste de Duncan, ao nível de 5%.

Tabela 2: Calogênese em lâminas foliares de Dieffenbachia sp, incubadas em meio de cultura MS contendo diferentes combinações de BAP e 2,4-D, após 42 dias de cultivo in vitro.
Meio de cultivo 	MS acrescido de	Médias de calogênese	
	BAP (mg.L-1)	2,4-D (mg.L-1)		
MBD1	0,5 	0,5 	1,74 a	
MBD2	0,5 	1,0 	   0,94   b	
MBD3	1,0 	0,5 	1,66 a	
MBD4	1,0 	1,0	    0,94   b	
As médias seguidas por letras distintas, nas colunas, diferem entre si, pelo teste de Duncan, ao nível de 5%.

Verificou-se que, apesar do bom desenvolvimento de calos nos explantes incubados nos meios com as combinações de BAP e ANA, as diferenças entre os mesmos não foram significativas (Tabela 1).  As combinações de MS com BAP e 2,4-D não propiciaram um processo rápido de calogênese, mas verificou-se que os meios MBD1 e MBD3, ambos com 0,5 mg.L-1 de 2,4-D, foram superiores aos demais apesar de não terem diferido entre si (Tabela 2).
Rocha [14] utilizou MS/2 (MS com metade da concentração de macronutrientes) acrescido de 0,08 mg.L-1 de 2,4D + 1,0 mg.L-1 de BAP + 1,0 mg.L-1 de 2ip (2-isopenteniladenina), para indução de calos em Anthurium andraeanum, tendo obtido uma diminuição de cerca de 140 para 56 dias no período de calogênese do antúrio, em comparação ao meio proposto por Castro et al. [1], com 0,2 mg.L-1 de BAP. Pierik et al. [11] e Pierik [12], também, obtiveram bons resultados com MS/2 acrescido de 0,1 e 0,08 mg.L-1 de 2,4-D, respectivamente. Pierik [12], otimizou este meio acrescentando 1,0 mg.L-1 de BAP. A importância do BAP no meio de indução de calos de antúrio é reforçada pelos trabalhos de Kunisaki [8] e Kuehnle & Sugii [7], que utilizaram MS com 0,2 a 1,0 mg.L-1 de BAP. Malhotra et al [9] verificaram que a calogênese para A. andraeanum foi mais rápida e mais freqüente em meio de Nitsch com 1 mg.L-1 de BAP + 0,1 mg.L-1 de 2,4-D. Somaya et al. [18] obtiveram maior produção de calos a partir de explantes de folhas, pecíolos, entrenós e raízes de antúrio com MS acrescido com 0.1 mg.L-1 de 2,4-D + 1.0 mg.L-1 de BAP. Utilizando explantes foliares e de gemas basais de A. andraeanum, Yakandawala et al. [19] induziram calos em MS com 0,3 mg.L-1 de 2,4-D + 0,5 mg.L-1 de BAP. Guisso et al. [5] utilizaram, com bons resultados, os meios MS/2 + 0,08 mg.L-1 de 2,4D + 1mg.L-1 de 2ip + 1mg.L-1 de BAP e meio MS + 1mg.L-1 BAP + 1mg.L-1 ANA para indução de calogênese em duas variedades de Zantedeschia aethiopica, tendo observado que os primeiros calos de Z. aethiopica branca surgiram aos 21 dias e os de Z. aethiopica verde foram observados somente aos 35 dias de incubação.

4- CONCLUSÃO

A adição dos reguladores de crescimento ANA e 2,4-D ao meio de cultura MS, acrescido de BAP, leva a bons resultados na indução de calos em Dieffenbachia sp. O processo de calogênese é diminuído/retardado em meio com concentração maior de 2,4-D.

5- REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS 

[1] CASTRO, C.E.F.; FONSECA, S.; SONDAHL, M.R.; MATHES, L.A.F. Propagação vegetativa de  antúrio in vitro. IN: CONGRESSO BRASILEIRO DE FLORICULTURA E PLANTAS ORNAMENTAIS. 1986. Campinas. Resumos... Campinas / SP. Sociedade Brasileira de Floricultura e Plantas Ornamentais, 1986, p.13-25.
[2] DONINNI, L.P. Preparo de lâminas foliares de áraceas ornamentais: desinfestação e tratamento antioxidante. Pelotas. 51 f. Monografia de Conclusão de Curso (Bacharelado em Ciências Biológicas - Meio Ambiente, Instituto de Biologia, UFPel), 2004.
[3] GEORGE, E.F.; SHERRINGTON, P.D. Plant propagation by tissue cultured. Handbook and directory of commercial laboratories. Eversley: Exegetics, 1984. 709p.
[4] GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M.A. Micropropagação. In: Cultura de Tecidos e Transformação Genética de Plantas. Brasília: Embrapa SPI/Embrapa–CNPH, 1998, 864p.  
[5] GUISSO, A.P.; FERREIRA-MOURA, I.; SOUZA, J.A.; DONINI, L.P.; PEREIRA, J.M.; VIÉGAS, J. Indução de calogênese em lâminas foliares de aráceas ornamentais. XII Congresso de Iniciação Cientifica e V ENPOS – UFPel – 2003
[6] IAS- International Aroid Society, Inc. The Genera of Araceae. Capturado em 5 de outubro de 2003. http://www.aroid.org/genera/index.html
[7] KUEHNLE, A.R.; SUGII, N. Callus induction and plantlet regeneration in tissue cultures of Hawaiian anthuriums. HortScience, v.26, n.7, p.919-921, 1991
[8] KUNISAKI, J.T. In vitro propagation of Anthurium andraeanum Lind., HortScience, v.15, n. 4, p.508-509, 1980
[9] MALHOTRA, S.; PUCHOOA, D.; GOOFOOLYE, K. Callus induction and plantlet regeneration in three varieties of Anthurium andraeanum. Revue Agricole et Sucriere de l'Ile Maurice. v 77, n.1, p.25-32, 1998
[10] MURASHIGE, T.; SKOOG, F.I.A. A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures. Physiologia Plantarum.  v. 15, p.473-497, 1962.
[11] PIERIK, R.L.M.; STEEGMANS, H.H.M.; VAN DER MEYS, J.A.J. Plantlet formation in callus tissues of Anthurium andraeanum Lind. Scientia Horticulturae, v.2, p.193-198, 1974.
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[13] PINTO, R.J.B. Introdução ao Melhoramento Genético de Plantas. Maringá, PR: Universidade Estadual de Maringá, 1995, 275p.
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[16] SCHULTZ, A. Introdução à botânica sistemática. 6ªed. Porto Alegre: Editora da Universidade- SAGRA,1990, 414 p.
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[19] YAKANDAWALA, G., PEIRIS, S.E., YAKANDAWALA, Y.L.N. Transient expression of uidA reporter gene in regenerable callus tissue of Anthurium andraeanum Lind. By Agrobacterium mediated transformation. Tropical Agricultural Research, v. 12, p. 50-55, 2000
[20] ZONTA, E.P.; MACHADO, A.D.; SILVEIRA JUNIOR, P. Sanest: Sistema de análise estatística para microcomputadores. Registrado na secretária especial de informática sob nº 066060 – categoria A. Pelotas, RS: UFPel. 1984.