LEPTOSPIROSE ovina: bacteriologia e sorologia em abatedouro do município de pelotas, rs
Bourscheidt, D1*.; Recuero, A.L.C2 ; Forster, K.M2.; Bermudez, V.L2; Seyffert, N2.; da Silva, P.L2 ; Brod, C.S2.
1Bolsista De Iniciação Científica - FAPERGS
2Centro de Controle de Zoonoses – DMVP – FV – UFPel 
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INTRODUÇÃO
A leptospirose é uma doença aguda de caráter sistêmico, que acomete o homem e os animais, causada por microrganismo pertencente ao gênero Leptospira. A distribuição geográfica da leptospirose é cosmopolita [6], no entanto a sua ocorrência é favorecida pelas condições ambientais vigentes nas regiões de clima tropical e subtropical, onde a elevada temperatura e os períodos do ano com altos índices pluviométricos favorecem o aparecimento de surtos epidêmicos de caráter sazonal.
Os animais portadores e convalescentes, silvestres ou domésticos, eliminam a leptospira pela urina e funcionam como reservatórios da doença contaminando água ,a partir da urina desses animais.
Os ovinos são os animais domésticos considerados menos susceptíveis, porém sofrem a infecção das leptospiras patogênicas e, em muitos casos, a evolução é assintomática, podendo, às vezes, ocorrerem surtos da doença com abortamento e morte de cordeiros. A leptospirose pode manifestar-se de forma aguda, sub-aguda e crônica, caracterizando-se por quadros clínicos de septicemia, hemorragia, nefrite, seguido por icterícia, hemoglobinúria, mastite sanguinolenta, retorno ao cio, abortamento nas ovelhas e anemia hemolítica nos cordeiros com morte na primeira semana de vida[4].
O presente trabalho tem por objetivo a apresentação das variantes sorológicas de leptospiras predominantes em teste sorológico em ovinos, pesquisando-se a presença de espiroquetas no sangue e inoculando-se amostras de rins e sangue em meio de cultura para o isolamento do agente.
MATERIAL E MÉTODOS
A partir de mês de abril de 2004, iniciou-se o presente trabalho no laboratório do Centro de Controle de Zoonoses (CCZ/UFPel), com a colaboração do frigorífico Bom Sul, abatendo ovinos da região sul do Rio Grande do Sul (RS).
Realiza-se coletas mensalmente sendo vinte amostras de sangue e cinco amostras de rins ao mês num período de um ano.
Para o presente trabalho foram utilizadas as amostras equivalentes aos meses de Abril, Maio, Junho e Julho, num total de oitenta amostras de sangue e vinte amostras de rins retiradas durante o abate e logo após enviadas ao CCZ/UFPel e inoculadas em meio de cultura para o isolamento do agente.
Com as amostras de sangue foram realizadas no laboratório a pesquisa direta de espiroqueta em microscopia de campo escuro (DFM) e o teste de soroaglutinação microscópica com antígenos vivos (MAT), segundo metodologia proposta por Faine [6].
A DFM foi realizada após a centrifugação das amostras de sangue a 3000 g durante 8 minutos, sendo analisada posteriormente uma gota de 3 µL entre lâmina e lamínula, com objetiva de 40 x e ocular de 10 x. Foi considerada positiva, a amostra que apresentou uma ou mais espiroquetas com morfologia e movimento característicos.
Através da técnica de soroaglutinação microscópica com antígenos vivos (MAT), foi efetuada a triagem na diluição de 1:50 e, quando houve aglutinação, os soros foram titulados. Usou-se para MAT uma coleção de antígenos que incluem sessenta sorovares leptospirais: 1 leptonema (illini), 40 patogênicos (australis, bratislava, autumnalis, butembo, rachmati, castellonis, ballum, bataviae, swart, canicola, celledoni, whitcomb, cynopteri, grippothyphosa, grippo. Duyster, grippo. Mandemakers, hebdomadis, copenhageni, icterohaemorrhagiae rga, ictero. Kantorowic, ictero. verdum, copenhageni Wijnberg, lai, copenhageni LI 130, javanica, poi, panamá, pomona, proechimys, pirogenes, serjoe, hardjo hardjoprajitno, wolffi, saxkoebing, hardjo Lely, shermani, tarassovi, djasiman, sentot, mini, hurstbridge, Louisiana ), 10 isolados locais ( Isoton, Hook, Kito, Skol, Cascata, Caco, Bonito, Kade, Ike, Tande, Pic ) e 8 saprófitas( andamana, andamana Bovedo, Buenos Aires, patoc 1, rufino, semaranga, garcia, jequitaia)
A técnica utilizada para o processamento dos rins foi a da Pipeta Pasteur [6], inoculando-se os fragmentos em meio de Fletcher (Difco Laboratories) e EMJH (Difco Laboratories), sendo os tubos incubados em estufa a uma temperatura de 30ºC e revisados semanalmente [6].
RESULTADOS E DISCUSSÕES
Os resultados da MAT foram positivos para 88,75% das amostras, identificando 26 sorovares reagentes, onde os mais prevalentes foram: Illini (16,9%), Andamana Bovedo (9,9%), Caco e Cascata (7%), Lai, Ike, Patoc, Proechimys (5,6%) e outros 18 sorovares com percentuais menores de 5%.
Diversos trabalhos em diferentes regiões do país, avaliando anticorpo antileptospira na espécie ovina encontraram prevalências variando de 34,26% [7]; 63,8% [3]; 71,5% [2]; evidenciando como nós uma alta prevalência de anticorpo antileptospira na espécie estudada.
Em um trabalho realizado no Rio Grande do Sul, encontrou-se títulos aglutinantes de 100 até 3.200, em 774 amostras reagentes. Desses, 634 (81,91%) eram menores ou iguais a 200 e, 140 (18,19%) iguais ou superiores a 400.Os autores concluem que isto significaria uma grave situação epidemiológica, demonstrando que a infecção esta ativa [7], concordando com outro, que investigando falhas reprodutivas na espécie ovina encontrou animais recentemente infectados com título variando entre 100 e 200 [5]. Em nosso trabalho encontramos situação semelhante, ou seja, 78,9% de títulos de 100, 18,3% de 200 e 2,8% de 400 entretanto, concordamos parcialmente com os referidos autores uma vez que títulos baixos podem indicar infecção recente, mas ao mesmo tempo podem indicar ausência de antígeno específico na bateria de diagnóstico, o que parece mais provável em nosso trabalho, já que os sorovares mais prevalentes foram cepas saprófitas indicando reação cruzada e isolados locais que se não tivessem na bateria não iriam ser detectados.
Das vinte amostras de rins inoculadas 5% evidenciaram presença de espiroqueta, com os quais foram realizadas repiques adicionais em para isolamento. Devido ao crescimento lento não se descartou nenhuma tentativa de isolamento, ainda que alguns tubos contaminados tenham sido descartados, persistimos na tentativa a exemplo de outros [1] que demoraram quatro meses para um isolamento da espécie ovina.
CONCLUSÕES
Em nosso trabalho encontramos alta freqüência de anticorpos antileptospira evidenciando sua importância econômica, bem como papel de reservatório para outras espécies, ainda que não tenhamos obtido sucesso de isolamento até o momento.
REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
[1] BOURSCHEIDT,D., et al. :Avaliação sorológica e isolamento de leptospira em ovinos de abatedouros da região sul do RS.In: Anais... XXII Congresso Brasileiro de Microbiologia, Florianópolis, 2003, p.228.
[2] CALDAS, E. M. et al. Aglutininas antileptospira em hemosorode animais domésticos no Estado da Bahia,1990/1993.Arquivo da Escola de Medicina Veterinária, UFBA, Salvador, v. 18, n.1, p.49-59, 1993.
[3] CALDAS, E. M. et al. A glutininas antileptospira em hemosoro de animais domésticos no Estado da Bahia,1994/1996.Arquivo da Escola de Medicina Veterinária, UFBA, Salvador, v. 18, n.1, p.268-280, 1995/96
[4] CICERONI, L. et al. Prevalence of antibodies to Leptospira serovars in sheep and goats in Alto Adige-South Tyrol. Journal Veterinary Medicine, v.47, n.5, p.217-223, 2000. 
[5] ELLIS, W.A. Leptospirosis as a cause of reproductive failure. Veterinary Clinics of North America: Food Animal Practice, v.10, n.3 p.463-478, 1994.
[6] FAINE, S. Guidelines for the control of leptospiroses. WHO offset publication. Geneva. 1982. 171 p. 
[7] Herrmann,G. P.; Soroprevalência de aglutininas anti-Leptospira spp. em ovinos nas Mesorregiões Sudeste e Sudoeste do Estado Rio Grande do Sul, Brasil Ciência Rural, v.34, n.2 Santa Maria mar./abr. 2004.