mULTIPLICAÇÃO IN VITRO DE PORTA-ENXERTOS DE Prunus spp. com diferentes níveis de benzilaminopurina.
Campos, R.V1*; Radmann, E.B1; Bianchi, V.J1; Schuch, M.W.; Fachinello, J.C 
1Laboratório de Micropropação de Plantas Frutíferas  – DF – FAEM/UFPEL
Campus Universitário  – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900  
camposrv@hotmail.com

1.	INTRODUÇÃO

Devido a grande importância socioeconômica da cultura do pessegueiro no Brasil, atualmente, diversas tecnologias vêm sendo desenvolvidas a fim de possibilitar uma produtividade maior dos pomares. Desta forma, a escolha de um porta-enxerto é de suma importância para a formação de mudas de qualidade tanto genética como sanitária, uma vez que estas são consideradas insumos de extrema importância para a formação de pomares [3].
 Tradicionalmente, os porta-enxertos são obtidos através da propagação sexuada a partir de sementes obtidas de industrias de conserva. Embora os genótipos utilizados apresentem alta percentagem de germinação e boa compatibilidade com a maioria das cultivares copa de pessegueiro, ameixeira e nectarineira, a propagação por sementes pode ocasionar variabilidade genética [4].
Sendo assim, diversos porta-enxertos foram introduzidos no país, estando entre esses algumas seleções de Mirabolano (Mr. S. 1/8 e Mr. S. 1/14) e também o Julior, pertencentes às espécies Prunus cerasifera Ehrn e P. insititia, respectivamente. Entretando, são poucas as informações dos melhores métodos de propagação destes [1].
Dentre as características desejadas em um porta-enxerto, a fácil propagação vegetativa de alguns genótipos vem possibilitando a propagação em larga escala, tanto por meio de estacas enraizadas como pela propagação in vitro. Ambos os métodos permitem a manutenção das características genéticas, porém a propagação in vitro tem sido muito estudada e preferida, como método de propagação em várias espécies lenhosas [5].
Sendo assim, o presente trabalho objetivou avaliar dentre quatro concentrações de 6-benzilaminopurina (BAP), qual a mais adequada para a multiplicação in vitro dos porta-enxertos Mr. S. 1/8, Mr. S. 1/14 e Julior.

2.	MATERIAL E MÉTODOS

O trabalho foi realizado no Laboratório de Micropropagação de Frutíferas de Clima Temperado da Faculdade de Agronomia “Eliseu Maciel”, da Universidade Federal de Pelotas
Foram utilizados explantes com aproximadamente 1,0 cm, dos porta-enxertos Mr.S 1/8, Mr.S 1/14 e Julior estabelecidos in vitro. Os explantes foram inoculados em meio de cultivo composto pelos macronutrientes do meio SH [10] e micronutrientes do meio MS [7], este foi suplementado com 0,25 M de AIB e com diferentes concentrações de BAP (0,0; 1,33; 2,66 e 3,99 M) e adicionado das vitaminas do meio MS, sacarose 30 g L-1, mio-inositol 100 mg L-1, ágar 6,0 g L-1 e pH ajustado para 5,2. Posteriormente, estes foram autoclavados a 120C por 15 minutos, e em câmara de fluxo laminar os explantes foram inoculados nos respectivos meios. Em seguida foram transferidos para sala de crescimento sob condições de luz fluorescente com intensidade de 20E. m-2.s-1, fotoperíodo de 16 hs e temperatura de 232C, permanecendo nestas condições por 35 dias. 
O delineamento experimental foi em blocos inteiramente casualizado com 4 repetições, sendo cada unidade experimental constituída por 1 frasco com 4 explantes. Após o período de 35 dias, avaliou-se a percentagem de brotação, número e comprimento médio de brotos. 
Realizou-se análise da variância dos dados e a comparação de médias pelo teste de Duncan, ao nível de 5% de probabilidade, através do programa SANEST [14]. A variável expressa em percentagem e número, foram transformados, segundo arc. sem. raiz quadrada de X/100 e raiz quadrada de x+k, respectivamente.

3. 	RESULTADOS E DISCUSSÃO

Para a variável percentagem de brotação, os resultados indicam que a mesma foi influenciada apenas para o fator porta-enxerto. 
Na Tabela 1 pode-se observar que o maior percentual de brotação ocorreu nos genótipos Mr. S. 1/8 e Mr. S. 1/14, com 98,30 e 90,64%, respectivamente. 

Tabela 1- Percentagem de brotação e número de brotos, obtidos durante a multiplicação in vitro dos porta-enxertos Mr. S. 1/8, Mr. S. 1/14 e Julior, aos 35 dias de cultivo. Pelotas/RS, 2004

Porta-enxertos	Percentagem de brotos	Número de brotos	
Mr. S. 1/8	98,30 a 	   2,44 a	
Mr. S. 1/14	90,64 ab	   1,69    b	
Júlior	84,18   b	   1,61    b       	
Média seguidas de mesma letra minúscula na coluna não diferem entre si pelo Teste de Duncan ao nível de 5%.
		
Com relação ao número de brotos, constatou-se diferença estatística dentro do fator porta-enxerto e dentro do fator concentração de BAP. 
Entre os porta-enxertos, o Mr. S. 1/8 apresentou resposta superior aos demais genótipos estudados (2,44 brotações/explante) (Tabela 1). 
A melhor resposta dos porta-enxertos Mr. S. 1/8 e Mr. S. 1/14 pode ser explicada pelas características genéticas que cada cultivar apresenta. De acordo estão Péres-Tornero & Burgos [8], os quais ressaltam que as diferenças observadas nas taxas de multiplicação in vitro, para espécies e/ou variedades de Prunus pode estar atribuída ao genótipo.
Segundo a regressão polinomial, verificamos que o incremento de BAP no meio de cultura influencia positivamente no número de brotos. (Figura 1). Resultados semelhantes foram obtidos por Chaves [2] com os porta-enxertos Mr. S. 1/8 e Okinawa. Em contrapartida, Rogalski et al. (2003) não observou diferença significativa entre as concentrações de BAP para ameixeira cv. Santa Rosa. Essas respostas mostram que a máxima multiplicação varia com a combinação entre, a concentração dos reguladores presente no meio de cultura e a concentração endógena do explante. 

Para o parâmetro comprimento de brotação, os resultados indicam que a mesma foi influenciada pela interação dos dois fatores (porta-enxerto x BAP). 
Com relação aos porta-enxertos, até 2,66M de BAP não se observou diferença significativa, porém na concentração mais alta testada (3,99M), o maior comprimento de brotação foi obtido com os genótipos Mr. S. 1/14 e Julior, com 4,55 e 4,67 mm, respectivamente (Tabela 2). 

Tabela 2 - Comprimento médio das brotações de três porta-enxertos de Prunus spp. em resposta a quatro diferentes concentrações de BAP, aos 35 de cultivo, Pelotas/RS, 2004
	Comprimento médio das brotações (mm)	
 	                              Concentrações de BAP (µM)	 	
Porta-enxertos	0,0	1,33	2,66	3,99	
Mr. S. 1/8	3,71 a	   3,94 a	  3,52 a	  2,90 b	
Mr. S. 1/14	2,56 a	   3,71 a	  3,79 a	  4,55 a	
Julior	3,72 a	   2,96 a	  2,55 a	  4,67 a	
 Média seguidas de mesma letra minúscula na coluna não diferem entre si pelo Teste de Duncan ao nível de 5%.

Entre as concentrações de BAP testadas, observou-se que o comprimento de brotação aumentou conforme o acréscimo do fitorregulador para o porta-enxerto Mr. S. 1/14 (Figura 2). Entretanto, Sczepanski [11] verificou um incremento no comprimento de brotos com a cultivar Mirabolano até 1,78µM de BAP, após esta concentração foi observado uma redução no tamanho destas. De acordo está Lucas [6], o qual cita que as citocininas geralmente estimulam a multiplicação e inibem o comprimento das brotações. Estes resultados também foram observados por Tabachinik & Kester [12] onde verificaram que a concentração acima de 4,44µM de BAP reduziu o tamanho das brotações, porém quando reduziram a concentração para 0,44µM predominou o alongamento das brotações. 
O comprimento médio das brotações de “Julior” mostrou um comportamento quadrático, onde os maiores comprimentos foram obtidos na maior concentração de BAP (3,99µM). Resultados semelhantes foram obtidos por Wagner Júnior et al. [13], onde multiplicando in vitro o porta-enxerto Julior observaram que concentrações mais elevadas de BAP no meio de cultivo favorecia um aumento no comprimento médios das brotações. 

4. CONCLUSÕES
•	A adição de BAP no meio de cultivo aumenta a multiplicação in vitro dos  porta-enxertos  Mr.S 1/8, Mr.S 1/14 e Julior;
•	A concentração de  3,99M de  BAP proporcionou os melhores resultados;
•	O Mr. S. 1/8 foi superior aos demais porta-enxertos estudados.

5.	REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] CARNEIRO, R.M.D.G. Nematóides: Ocorrência e Danos. In: MEDEIROS, C.A.B.; RASEIRA, M.C. A Cultura do pessegueiro. Brasília: Embrapa-CPACT, 1998. p.100-109.
[2] CHAVES, A.C. Micropropagação de porta-enxertos de Prunus sp. 2003, 76 p. Dissertação (Mestrado em Fruticultura de Clima Temperado), Universidade Federal de pelotas, 2003.
[3] FACHINELLO, J.C., HOFFMANN, A., NACHIGAL, L.C., KEERSTEN, E., FORTES, G.R. de L. Propagação de plantas frutíferas de clima temperado. Pelotas: Universedade Federal de Pelotas, 1994. 179p.
[4] FACHINELLO, J.C; SILVA, C.A.P.; SPERANDIO, C; RODRIGUES, A.C.; STRELOW, E.Z. Resistência de porta-enxertos para pessegueiro e ameixeira aos nematóides causadores de galhas (Meloidogyne spp.). Revista Ciência Rural, v.30, n.1, p.69-72, 2000. 
[5] GRATTAPAGLIA, D.; MACHADO, M. A. Micropropagação. In: TORRES, A.C.;CALDAS, L.S.; BUSO, J.A. Cultura de tecidos e transformação genética de plantas. Brasília: Embrapa-SPI / Embrapa-CNPH,  p.183-260, 1998.
[6] LUCAS, M.A.K. Micropropagação dos cultivares porta-enxerto de macieira M-9 e M-26 nos sistemas convencional e imersão temporária. Pelotas, 2000. 54p. Dissertação (Mestrado em Fisiologia Vegetal), UFPel, 2000.
[7] MURASHIGE, T.; SKOOG, F.I. A revised medium for rapid growth and biossay with tabacco tissue culture. Physiologia Plantarum, Copenhagen, v.15, p.473-479, 1962.
[8]PÉREZ-TORNERO, O.; BURGOS, L. Different media requirements for micropropagation of apricot cultivars. Plant Cell, Tissue and Organ Culture, Dordrecht, v.63, p.133-141, 2000.
[9] ROGALSKI, M.; GUERRA, M.P.; SILVA, A.L. Multiplicação in vitro da ameixeira “Santa Rosa”: Efeito da citocinina BAP. Revista Brasileira de Fruticultura, Jaboticabal, v.25, n.2, p.365-367, 2003.
[10] SCHENCK, R.U.; HILDEBRANT, A.C. Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous plant cell cultures. Canadian Journal, Ottawa, v.50, p.199-204, 1972.  
[11] SCZEPANSK, P.H.G. Propagação in vitro do porta-enxerto de ameixeira Mirabolano (Prunus cerasifera Ehrh.). Pelotas, 2001. 52p. Disseertação (Mestrado em Agronomia – Fruticultura de Clima Temperado) – FAEM/UFPel, 2001.
[12] TABACHINIK, L.; KESTER, D.E. Shoot culture for almond and almond-peach hybrid clones in vitro. HortScience, v.12, n.6, p.545-547, 1977.
[13] WAGNER JÚNIOR, A.; COUTO, M.; QUEZADA, A. C. Multiplicação in vitro do porta-enxerto de ameixeira ‘Julior’. Revista Brasileira de Agrociência, Pelotas, v.9, n.2, p.121-124, 2003.
[14] ZONTA, E.P.; MACHADO, A.A. SANEST - Sistema de Análise Estatística para Microcomputadores. Pelotas: DMEC/IFM/UFPel, 1987. 138p.