AVALIAÇÃO LABORATORIAL DE ATRATIVOS PARA OVIPOSIÇÃO DE CULEX QUINQUEFASCIATUS SAY, 1823 (DIPTERA:CULICIDAE).

Menezes, A. M. D1.; Pinto, J. R1.; Bernardi, e2.; Ribeiro, P. B3.; Lisboa, h4.; Silva, O. I4.; Grutzmacher, A. D5.

dri@ufpel.edu.br
1PPG em Fitossanidade/entomologia - DFs;  2 Acadêmico do Curso de Ciências Biológicas; 3 Professor Titular DEMP; 4 Acadêmicos do Curso de Engenharia Agronômica 5; Professor Adjunto Departamento de Fitossanidade – UFPel Cx. Postal 354 Cep 96010-900

1. INTRODUÇÃO
A descoberta e identificação de semioquímicos mediando a agregação de ovos em um determinado número de vetores, sugerem novos métodos para o monitoramento de doenças e controle por manipulação comportamental.
A seleção do local de oviposição pelas fêmeas de mosquitos é influenciada por fatores físicos, químicos e biológicos, como luz, temperatura, presença de vegetais e ou de seus produtos [3], presença de microrganismos e seus produtos [7], salinidade [8] e presença de formas imaturas [1,10]. Um critério para a seleção e utilização de criadouros naturais é a ocorrência de substâncias voláteis em concentrações ótimas. Estas substâncias são conhecidas como atrativos para oviposição ou apneumônios e podem ser utilizadas em estratégias de controle de mosquitos, quando combinadas com agentes tóxicos (larvicidas).
Este trabalho tem como objetivo avaliar a resposta de fêmeas de C. quinquefasciatus, estimuladas a oviposição, a diferentes atrativos (apneumônios).

2. MATERIAL E MÉTODOS
O trabalho foi desenvolvido no Departamento de Microbiologia e Parasitologia da Universidade Federal de Pelotas e no Laboratório de Criação de Insetos do Instituto de Biologia.

Preparo dos atrativos (Apneumônios)
Os atrativos foram produzidos a partir de infusão de material vegetal (vegetação encontrada próximo a criadouros de C. quinquefasciatus – grama paulista), suspensão de culturas de enterobacterias (Escherichia coli  e Proteus mirabilis – cepas padrão), obtidas da coleção do Departamento de Microbiologia e Parasitologia da UFPel e de um macerado de larvas de C. quinquefasciatus.
As enterobactérias foram semeadas em placas de Petri, em meio de Ágar Nutriente e incubadas a  370 C por 24 horas. 	Após o período de incubação, foram preparadas suspensões em água destilada estéril (ADE), na concentração de 3x108 UFC/mL, padronizadas pela escala de Mac Farland.
A infusão de grama paulista foi obtida com água destilada estéril na proporção de 100g/L, bem como o macerado de larvas, onde utilizou-se 150 larvas/L.
Como testemunha utilizou-se apenas água destilada estéril.

Avaliação laboratorial
Para avaliação dos semioquímicos, uma colônia de C. quinquefasciatus com 40 casais, recém emergidos (com idade de 5 a 7 dias), foram mantidos em uma gaiola com temperatura oscilando de 200 C a 300 C, fotofase de 10 horas e umidade relativa do ar  80%. Como alimentação diária foi fornecido hidromel a 10%.  O repasto sangüíneo foi feito mediante a exposição de uma codorna por gaiola por um período de 12 horas. Cinco dias após a hematofagia, os substratos para oviposição foram expostos à colônia por três dias consecutivos.
No interior de cada gaiola, foram mantidos quatro recipientes com 100 mL de cada atrativo a ser testado e o grupo controle com água destilada estéril. Os experimentos foram conduzidos em triplicata.
As posturas foram coletadas todos os dias no mesmo horário (8 horas), e o número de ovos por jangada, deixados em cada tratamento, foram contados com o auxílio de um microscópio estereoscópio.

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO
A porcentagem de jangadas deixadas em cada tratamento é apresentada na figura 1. Observa-se que o maior número de jangadas foi deixado no tratamento A (suspensão de E. coli), não havendo, porém diferença significativa em relação ao tratamento C (macerado de larvas). Os demais tratamentos diferiram significativamente destes dois, pelo teste de Tukey ao nível de 1% de probabilidade.

Tratamentos

A – Suspensão de Escherichia coli 
B – Suspensão de  Proteus mirabilis
C – Macerado de larvas
D – Infusão de Grama Paulista
E – Água destilada estéril

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Figura 1. Freqüência de oviposição (número de posturas) de Culex quinquefasciatus em diferentes substratos, sob condições de laboratório.

Microrganismos, especialmente bactérias, tem sido geralmente encontrados associados a larvas de mosquitos e sítios de criação [4]. As fêmeas de mosquitos escolhem os sítios de oviposição baseadas em experiências durante a fase imatura ou logo após a emergência, em função de um fenômeno conhecido como “Hopkins” princípio de seleção do hospedeiro ou hipótese do legado químico [6]. De acordo com esta hipótese, explica-se a diferença observada na freqüência de oviposição entre os substratos confeccionados com suspensões de 
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células bacterianas. Apesar destas duas bactérias apresentarem-se associadas a fezes humanas e animais, E. coli é o organismo encontrado com maior freqüência e em maior número em esgotos domésticos. 
Com relação ao substrato confeccionado com macerado de larvas (tratamento C), que recebeu 41% do total de posturas, não diferindo significativamente do tratamento A (com 56% das posturas), trabalhos anteriores [9,10] relatam a preferência de algumas fêmeas de Culicidae por água contendo formas imaturas da mesma espécie em relação a outros meios nos quais estas não se encontravam, sugerindo haver um fator químico espécie-específico responsável pela preferência em relação ao local para a desova.
Embora pesquisas [5], relatem com sucesso a utilização de infusões vegetais, como atrativos para a oviposição, nenhuma fêmea ovipositou no tratamento D (infusão de grama paulista), nos três dias de avaliação. 
Do total de ovos coletados, 3045 foram coletados no tratamento A (56,9%), 2155 no tratamento C (40,2%) e 156 ovos no tratamento E (2,9%). Nos tratamentos B e D não foram coletados ovos, conforme Figura 2. O maior número de ovos coletados nos tratamentos A e C, sugere que além de atrativos, estes substratos estimularam a oviposição, pois de acordo com [2], substâncias químicas que provocam atração para uma fonte de estímulo devem ser voláteis para agir a uma determinada distância, enquanto que estímulos químicos que incitam determinados comportamentos como, por exemplo, a deposição de ovos, podem ser voláteis ou não. 

Tratamentos

A – Suspensão de Escherichia coli 
B – Suspensão de Proteus mirabilis
C – Macerado de larvas
D – Infusão de Grama Paulista
E – Água destilada estéril

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Figura 2. Influência de diferentes substratos sobre o número de ovos de Culex quinquefasciatus, em condições de laboratório.

4. CONCLUSÕES
Analisando-se em conjunto os resultados deste trabalho, pode-se concluir que os tratamentos A e C, suspensão bacteriana de Escherichia coli e macerado de larvas, respectivamente, influenciaram significativamente o comportamento de oviposição de Culex quinquefasciatus, em condições de laboratório.

5. REFERÊNCIAS
[1] ALLAN, S. A.; KLINE, D. L. Larval rearing water and preexisting eggs influence oviposition by Aedes aegypti and A. albopictus (Diptera: Culicidae). J. Med. Entomol. v.35, n.6, p.943-947, 1998.

[2] BENZON, G. L.; APPERSON, C. S. Reexamination of chemically mediated ovipositon behavior in Aedes aegypti (L.) (Diptera: Culicidae). J. Med. Entomol. v.25, p.158-164, 1988.

[3] DU, Y.; MILLAR, J. G. Electroantennogram and oviposition biossay responses of Culex quinquefasciatus and Culex tarsalis (Diptera: Culicidae) to chemicals in odors from bermuda grass infusions. J. Med. Entomol. v.36, n.2, p.158-166, 1999.

[4] GEETHA, I.; PAILY, K. P.; PADMANBAN, V.; BALARAMAN, K. Oviposition response of the mosquito Culex quinquefasciatus to the secondary metabolites(s) of the fungus, Trichoderma viride. Mem. Inst. Oswaldo Cruz, v.98, n.2, p.223-226, 2003.

[5] ISOE, J.; MILAR, J. G. Characterization of factors mediating oviposition site choice by Culex tarsalis. Journal of the American Mosquito Control Association. v.11, n.1, p. 21-28, 1995.

[6] POONAM, S.; PAILY, K. P.; BALARAMAN, K. Oviposition Attractancy of bacterial culture filtrates – response of Culex quinquefasciatus. Mem. Inst. Oswaldo Cruz, v.97, n.3, p.359-362, 2002.

[7] McCALL, P. J.; EATON, G. Olfactory memory in a mosquito Culex quinquefasciatus. Med. Vet. Entomology. n.14, p.197-203, 2001.

[8] ROBERTS, D. Mosquitoes (Diptera: Culicidae) breeding in brackish water: female ovipositional preferences or larval survival? J. Med. Entomol. v.33, n.4, p.525-530, 1996.

[9] SHIRIN, M; SULEMAN, M. Laboratory studies on oviposition of Culex quinquefasciatus Say (Diptera:Culicidae): Choice of oviposition medium and oviposition cycle. Bull.Ent. Res., v.71, p.361-369, 1981.

[10] SOMAN, R. S.; REUBEN, R. Studies on the preference shown by ovipositing females of Aedes aegypti for water containing immature stages of the same species. J. Med Entomol, v.7, p.485-489, 1970.