UTILIZAÇÃO DE ÁGUA DE TRATAMENTO DE ARROZ PARBOLIZADO COM SUBSTRATO PARA PRODUÇÃO DE BIOINSETICIDA A BASE DE BACILLUS SPHAERICUS.
Menezes, A. M. D.1; Leite, F. P. L. 2; Ribeiro, P. B.2; Garcia, M.3; Lisboa, H.4;
Silva, O. I.4 
1Programa de Pós-Graduação em Fitossanidade/Entomologia - FAEM/UFPel 
Campus Universitário – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900 dri@ufpel.tche.br
2Departamento de Microbiologia e Parasitologia – IB/UFPel
3Departamento de Fitossanidade – FAEM/UFPel
4Acadêmicos do Curso de Agronomia – FAEM/UFPel

1.	INTRODUÇÃO
Nos últimos anos, o aumento da população de mosquitos tornou-se um problema real à população da zona urbana.  Controle realizado por órgão públicos, através de da utilização de inseticidas químicos sintéticos, não tem alcançado resultados satisfatórios, possivelmente pela emergência de população resistente. Aliado a este desempenho falho, os inseticidas químicos vem representando importante fator no desequilíbrio da fauna aquática da região, como também se constituem em substâncias de efeito deletério ao organismo humano e de outros animais superiores.
Estratégias de intervenção por planejamento e aplicação de medidas preventivas para o controle seletivo de vetores vêm despontando, sendo o controle biológico uma importante ferramenta quando se prioriza a questão ambiental [4]. A pesquisa direcionada para a descoberta de bioinseticidas, com ação sobre mosquitos e simulídios (borrachudos) é um campo onde o progresso tem sido alcançado de forma considerável, seguramente pelo fato destes insetos representarem uma constante ameaça ao conforto e saúde pública.
Vários pesquisadores têm chamado atenção para certo número de vantagens, que podem advir da produção “in situ” do bioinseticida, principalmente no que concerne a países em desenvolvimento. Entre estas vantagens e/ou comparações com os bioinseticidas comerciais destacam-se: os bioinseticidas comerciais podem perder a estabilidade pelos longos períodos de transporte e de estocagem, a temperaturas variáveis, até chegarem ao consumidor [1,2]; o desenvolvimento de formulações adequadas, importante para a melhor performance dos bioinseticidas, é favorecido pelo conhecimento das condições ambientais características de cada região. Além disto, a produção de bioinseticidas à base de bactérias, permite a utilização, como meio de cultura, de produtos agrícolas, resíduos e sub-produtos de indústrias do Rio Grande do Sul, o que resulta em baixo custo do produto final. Neste estudo observamos que a utilização de água residual da industria do arroz parbolizado pode ser utilizada como meio de cultivo de um bioinseticida a base de Bacillus sphaericus.

2.	MATERIAL E MÉTODOS
Bacillus sphaericus: A amostra de B.sphaericus cepa 2362 da coleção do departamento de Microbiologia e Parasitologia do Instituto de Biologia da UFPel. 

Meio Arroz: 1 litro de água de tratamento de arroz parbolizado complementado com solução mineral (MgSO4. 7H2O- 0,1g/L, MnSO4.H2O-0,01g/L, ZnSO4.7H2O-0,01g/L, FeSO4.7H2O-0,01g/L, CaCO3-0,1g/L) com  pH 7,2 e esterilizado em  autoclave a 121oC por 15 minutos. 

Meio de NYSM: O meio de NYSM foi utilizado como controle de cultivos de B. sphaericus e consiste de: extrato de levedura 1g, extrato de carne 3g, peptona bacteriológica 5g, solução mineral e água q.s.p 1 L, com pH ajustado para 7,2 e esterilizado em autoclave a 1210C por 15 minutos.

Culturas: Os meios de cultura distribuídos em frascos de Erlemeyer de 250 mL, contendo 50 mL de meio por frasco foram inoculados com um inoculo de 1% v/v preparado em caldo NYSM, e mantidos a 300C sob agitação (130 rpm) em agitador orbital, por 24, 48 e 72 horas.

Quantificação do crescimento bacteriano: Ao fim de cada período de incubação, foram tomadas alíquotas para contagem total de bactérias. A contagem total foi submetida a diluições logarítmicas decimais e semeadas na superfície de ágar NYSM, distribuído em placas de Petri, incubadas a 300 C por 24 horas e o numero de colônias determinado. 

Determinação da atividade larvicida: Foi baseada no Guideline specifications for bacterial larvicides for public health [6]. Sucintamente, larvas de culicidae, em copos contendo 25 larvas com 150mL de água destilada foram inoculados com diluições logarítmicas decimais de cultura de B. sphaericus cultivados nos meios Arroz e NYSM mantidos a 250C, sendo registrado em 48 horas após a inoculação, o número de larvas mortas e sobreviventes e determinada a dose letal (DL) 50 % e 90 %. Como controle negativo foram utilizados copos contendo larvas e água destilada estéril.

3.	RESULTADOS E DISCUSSÃO
Uma gama variada de produtos naturais, de baixo custo tem sido testada quanto ao rendimento, como meio de cultura, em processos fermentativos para a produção de B. sphaericus [3,5].  Segundo estes autores, a escolha do produto ou combinação de produtos deve atentar para os requerimentos nutricionais da espécie. As avaliações realizadas neste trabalho demonstraram que a água de tratamento de arroz parbolizado apresentou resultados semelhantes ao meio NYSM quanto ao crescimento bacteriano (UFC/mL) ao final de 24, 48 e 72 horas de cultivo (Figura 1) e atividade larvicida (Figura 2).

Figura 1. Crescimento de Bacillus sphaericus em meio NYSM e meio Arroz: Erlemeyer de 250 mL, contendo 50 mL de meio, NYSM ou Arroz, por frasco semeados com B. sphaericus e cultivados  a 300C em agitador orbital (130 rpm), por 24, 48 e 72 horas. Ao final de cada período de incubação, contagem total de células foi efetuada por plaqueamento, utilizando-se diluições logarítmicas decimais.Os dados representam a media +/- S.E.M de três experimentos independentes.

Figura 2. Determinação da atividade larvicida de Bs, cultivado em meio de Arroz e meio NYSM: Foram testadas diferentes diluições do inóculo, registrando-se após 48 horas, o número de larvas mortas e sobreviventes para cálculo da dose letal (DL) 50 % e 90 %.

4.	CONCLUSÕES
Com os resultados obtidos neste experimento podemos concluir que a água de tratamento de arroz parbolizado revelou-se como fonte adequada de nutrientes, para o desenvolvimento de Bacillus sphaericus. No momento estamos estudando processos de cultivo do Bs em meio Arroz em escala industrial, bem como a utilização de outros resíduos industriais. 

5.	REFERÊNCIAS
[1]ALVES, S. B. Patologia e controle microbiano: vantagens e desvantagens. In: ALVES, S. B. (ed). Controle Microbiano de Insetos. Piracicaba: FEALQ, 1988. p.21-37.

[2]BALARAMAN, K.; Hoti, S. L. Impact of storage period e temperature on the larvicidal activity of bacterial pesticide formulations. Indian Journal Medical Research, v.80, p.71-73, 1984.

[3]OBETA, J. A. N.; Okafor, N. Production of Bacillus sphaericus strain 1593 primary powder on media made from locally obtainable Nigerian agricultural products. Canadian Journal Microbiology, v.29, p.704-709, 1983.

[4]RODRIGUES, I. B.; Tadei, W. P.; Dias, J. M. C. S. Studies on the Bacillus sphaericus larvicidal activity against malarial vector species in Amazônia. Memórias do Instituto Oswaldo Cruz, v.93, n.4, p.441-444, 1988.

[5]RUSSEL, B. L.; Jelley, S. A.; Yousten, A. A. Carbohydrate metabolism in the mosquito pathogen Bacillus sphaericus 2362. Appl. Environ. Microbiol., v.55, p.294-297, 1989.

[6]WORLD HEALTH ORGANIZATION. Guideline specifications for bacterial larvicides for public health.WHO/CDS/CPC/WHOPES/99.2, Geneva 1999.