QUALIDADE DE SÊMEN SUÍNO RESFRIADO EM DIFERENTES TEMPERATURAS E ACONDICIONADO NO DILUENTE PIGPEL-5 INCLUINDO DIFERENTES CRIOPROTETORES

Juliano, F.¹*; Bianchi,I.¹; Varela Junior, A.S. ¹; Serret, C.G. ¹; Ulguim, R.1; Corcine, C.D. ¹; Lucia Jr, T. ¹, 2; Deschamps, J.C. ¹, 2; Corrêa, M.N.¹,³; 

1 PIGPEL – Centro de Biotecnologia, Faculdade de Veterinária 
2 Departamento de Patologia Animal, Faculdade de Veterinária
3 Departamento de Clínicas Veterinária, Faculdade de Veterinária
Campus Universitário s/n – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900
Universidade Federal de Pelotas, Pelotas/RS.
*fjuliano@ufpel.edu.br  www.ufpel.edu.br/pigpel

1.	INTRODUÇÃO

Nos últimos anos, foi desenvolvido junto ao Laboratório de Reprodução Animal do Centro de Biotecnologia na Universidade Federal de Pelotas-RS, um diluente para acondicionar sêmen suíno à 5ºC, chamado PIGPEL-5 [1]. Os resultados obtidos até o momento são provenientes da avaliação in vitro através dos testes de motilidade, vigor, integridade de membrana através do choque hiposmótico e morfologia espermática, além da avaliação in vivo através da inseminação artificial com cio e ovulação sincronizados. Esses resultados demonstram um adequado e eficiente desempenho do diluente PIGPEL-5 [1]. Sendo assim, o diluente PIGPEL-5 se encontra ainda em fase de testes, mas já com resultados consistentes quanto à eficácia de sua utilização. 
O objetivo do presente estudo foi o de avaliar a qualidade do sêmen armazenado em diluente Beltsville Thawing Solution (BTS) acondicionado à 17°C, em relação ao sêmen armazenado em diluente PIGPEL-5 (PP), em que se utiliza gema de ovo (G) ou lipoproteína de baixa densidade (LDL), purificada da gema do ovo, acondicionado à 5°C e à 17°C em caixas acondicionadoras (CA), objetivando comprovar a versatilidade do diluente PIGPEL-5 quanto à diluição e armazenamento à 5ºC e 17°C. 

2.	MATERIAL E MÉTODOS

O estudo foi conduzido com a utilização de ejaculados provenientes de 3 machos suínos F1 (Landrace x Large White), locados na Fazenda da Palma, da Universidade Federal de Pelotas-RS. Foram coletados 4 ejaculados de cada macho pelo método da mão enluvada. Cada ejaculado foi fracionado e submetido a todos os tratamentos. Os ejaculados foram diluídos em condições isotérmicas, com os diluentes Beltsville Thawing Solution (BTS) [4] e PIGPEL-5 (PP) com gema de ovo (G) ou com lipoproteína de baixa densidade (LDL), previamente purificada da gema do ovo [3]. 
As doses de sêmen que foram diluídas em diluente  BTS foram acondicionadas em caixas térmicas à temperatura de 17oC, seguindo a recomendação para este diluente [2], e as doses diluídas com PIGPEL-5 foram acondicionadas à temperatura de 5°C ou 17°C. Em todas as amostras foram feitas as avaliações de motilidade (MOT), integridade funcional da membrana (IM) através do choque hiposmótico (CHIPO) e morfologia (MORF) espermática. Estas avaliações foram realizadas com o sêmen a fresco pós-diluído e após 24, 48 e 72 horas de acondicionamento. Todas as análises estatísticas foram conduzidas através do programa STATISTIX® [5] .

3.	RESULTADOS E DISCUSSÃO

A tabela 1 nos fornece dados acerca das motilidades espermáticas observadas no sêmen, armazenado nos diferentes diluentes ao longo do período de acondicionamento. Conforme observado, a motilidade espermática apresentou diferenças estatísticas entre os tratamentos (P<0,05) na hora 0, sendo que os melhores resultados foram obtidos nos tratamentos PP-G – 17°C (75,8 ± 5,15), PP-G – 5°C (75,8 ± 5,15) e PP-LDL – 5°C (75,8 ± 5,15). Nas 24 horas de acondicionamento, as motilidades do sêmen nos diluentes PP-G – 17°C (74,2 ± 5,15), PP-LDL – 17°C (74,2 ± 6,69) e PP-G – 5°C (69,2 ± 5,15) foram superiores (P<0,05) ao BTS (55,0 ± 21,95)  e este não diferiu do PP-LDL – 5°C (59,9 ± 17,3). Nas 48 horas, todos os diluentes PP não diferiram entre si, sendo que os resultados obtidos com o BTS (45,0 ± 24,31) foram inferiores (P<0,05) ao PP-LDL – 17°C (68,3 ± 9,37)  e ao PP-G – 5°C (65,0 ± 6,74). Nas 72 horas de acondicionamento, os resultados do diluente BTS (33,3 ± 26,05) foram inferiores (P<0,05) aos diluentes PP-G – 5°C (65,0 ± 5,22)  e PP-LDL – 5°C (54,2 ± 13,11)  e não diferiram do PP-G – 17°C (26,7 ± 28,17)  e PP-LDL – 17°C (50,8 ± 27,45). 

Tabela 1. Motilidade espermática nos diferentes diluentes durante o período de acondicionamento (média ± desvio padrão)

Tratamentos	Motilidade espermática nos respectivos horários de avaliação, %	
	0 h	24 h	48 h	72 h	
BTS	70,8 ± 5,15 b	55,0 ± 21,95 c	45,0 ± 24,31 b	33,3 ± 26,05 bc	
PP-G  – 17°C	75,8 ± 5,15 a	74,2 ± 5,15 a	53,3 ± 32,29 ab	26,7 ± 28,17 c	
PP-LDL – 17°C	75,0 ± 6,74 ab	74,2 ± 6,69 a	68,3 ± 9,37 a	50,8 ± 27,45 ab	
PP-G – 5°C	75,8 ± 5,15 a	69,2 ± 5,15 ab	65,0 ± 6,74 a	65,0 ± 5,22 a	
PP-LDL – 5°C	75,8 ± 5,15 a	59,9 ± 17,3 bc	58,2 ± 10,79 ab	54,2 ± 13,11 a	
Letras minúsculas diferentes, na mesma coluna, significa diferença estatística (P<0,05)

Conforme observado na tabela 2, a avaliação da integridade funcional da membrana plasmática apresentou diferenças estatísticas entre os tratamentos utilizados (P<0,05), a partir das 24 horas de acondicionamento, sendo nesse momento os melhores resultados encontrados com o tratamento PP-G  – 17°C (8,33 ± 7,46). Com relação às 48 horas, os melhores achados (P<0,05) foram com o tratamento PP-LDL – 17° (12,50 ± 13,18), quando comparados com BTS (3,67 ± 4,12),  PP-G  – 17°C (4,25 ± 4,77),  PP-G – 5°C (2,50 ± 7,17) e  PP-LDL – 5°C (2,67 ± 2,96), os quais não diferiram entre si. Tais resultados foram confirmados em 72 horas de acondicionamento. 

Tabela 2. Integridade funcional da membrana espermática através do CHIPO (média ± desvio padrão)

Tratamentos	Integridade funcional da membrana plasmática nos respectivos horários de avaliação, %	
	0 h	24 h	48 h	72 h	
BTS	8,25 ± 8,18 a	6,17 ± 3,97 ab	3,67 ± 4,12 b	3,00 ± 4,11 b	
PP-G  – 17°C	8,08 ± 10,71 a	8,33 ± 7,46 a	4,25 ± 4,77 b	1,83 ± 1,40 b	
PP-LDL – 17°C	9,83 ± 13,13 a	5,17 ± 7,13 ab	12,50 ± 13,18 a	10,00 ± 11,58 a	
PP-G – 5°C	6,00 ± 11,72 a	3,00 ± 2,63 b	2,50 ± 7,17 b	4,17 ± 3,61 b	
PP-LDL – 5°C	6,25 ± 11,89 a	3,00 ± 3,91 b	2,67 ± 2,96 b	5,50 ± 4,74 ab	
Letras minúsculas diferentes, na mesma coluna, significa diferença estatística (P<0,05)

 Na avaliação da morfologia espermática (Tabela 3), não foram encontradas diferenças estatísticas entre os tratamentos utilizados (P>0,05). Estes valores estão de acordo com alguns dados obtidos por outros autores [1], que encontraram valores de morfologia semelhantes entre os diluentes  PIGPEL-5 (PP) e BTS, utilizado na rotina de granjas de suínos para uso em IA. 

Tabela 3. Morfologia espermática normal nos diferentes diluentes (média ± desvio padrão)

Tratamentos	Morfologia espermática normal nos respectivos horários de avaliação, %	
	0 h	24 h	48 h	72 h	
BTS	87,25 ± 13,46 a	84,77 ± 17,40 a	79,25 ± 21,78 a	82,17 ± 18,49 a	
PP-G  – 17°C	84,18 ± 16,70 a	86,17 ± 17,05 a	88,83 ± 13,05 a	87,75 ± 12,56 a	
PP-LDL – 17°C	88,64 ± 11,84 a	91,08 ± 8,21 a	81,09 ± 19,61 a	91,17 ± 9,94 a	
PP-G – 5°C	85,17 ± 16,36 a	85,33 ± 18,69 a	83,08 ± 14,34 a	84,67 ± 22,16 a	
PP-LDL – 5°C	87,67 ± 13,26 a	87,83 ± 12,28 a	81,27 ± 20,06 a	88,42 ± 13,38 a	
Não foram observadas diferenças (P>0,05) entre os valores, na mesma coluna.

4.	CONCLUSÃO

Em razão dos resultados obtidos no presente estudo, ficou demonstrado a eficácia do diluente PIGPEL-5 (PP) quando acondicionado à 5ºC e à 17ºC, com gema ou na substituição desta por lipoprotein light density (lipoproteína de baixa densidade) (LDL). Sendo assim, fica claro a sua versatilidade em relação à temperatura de acondicionamento, possibilitando assim sua utilização em unidades de produção de suínos que utilizam caixas acondicionadoras tanto à 5ºC quanto à 17ºC.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] CORRÊA, M.N. Avaliação in vitro e in vivo de sêmen suíno preservado à 5ºC com o diluente PIGPEL-5. Pelotas, 2002. 146 p. Tese ( Doutorado em ciências) Faculdade de Medicina Veterinária. Universidade Federal de Pelotas, 2002.
[2] JOHNSON, L.A.; WEITZE, K.F.; FISER, P.; MAXWELL, W.M.C.. Storage of boar semen.  Anim. Reprod. Sci. v.62, p.143-172, 2000.
[3] MOUSSA, M.; MARTINET, V.; TRIMECHE, A.; TAINTURIER, D.; ANTON, M.. Low density lipoproteins extracted from hen egg yolk by an easy method: cryoprotective effect on frozen-thawed bull semen Theriogenology n. 57, p.1695-1706, 2002.
[4] PURSEL, V.G., JOHNSON, L.A.. Freezing of boar spermatozoa: Fertilizing capacity with concentrated semen and a new thawing procedure. Journal Animal Science. v.40, p. 99–102, 1975.
[5] STATISTIX®. Ed. Analytical Software. 2000.