INFLUÊNCIA DOS REGULADORES ANA E 2,4-D NA CALOGÊNESE DE SCINDAPSUS PICTUS

Ferreira-Moura, I*.; Donini, L.P.; Guisso, A.P.; Pereira, J.M.; Viégas, J.

Laboratório de Biologia Celular, Departamento de Zoologia e Genética, Instituto de Biologia, UFPel
 Campus Universitário  – Caixa Postal 354 – CEP 96010-900 – Pelotas, RS 
danielislaine@ig.com.br

1. INTRODUÇÃO

O gênero Scindapsus (jibóia ou era-do-diabo), pertencente à família Araceae, é uma planta originária das Ilhas Salomão. É uma trepadeira volúvel perene que, quando adulta, pode chegar a proporções de até 10 metros de altura. Suas folhas sempre verdes, variegadas e particularmente decorativas, atingem cerca de 60 centímetros de comprimento. É uma planta ornamental muito utilizada tanto em interiores como exteriores, excelente para cobertura de estruturas, necessitando, no entanto, de tutoramento [1].
A propagação de plantas in vitro tem sido motivo de pesquisas desde o século XX, devido à teoria da totipotencialidade vegetal. Na produção de plantas ornamentais, a propagação in vitro está concentrada na limpeza clonal e na multiplicação das espécies, desenvolvendo, principalmente, protocolos que permitam acelerar a multiplicação destas espécies, a fim de que mudas obtidas por essa metodologia cheguem aos produtores com rapidez, qualidade e preços baixos [2]. A resposta mais comum, de um tecido cultivado in vitro, é a formação do calo, uma massa de células de proliferação contínua e mais ou menos desordenada [4]. Os calos desenvolvem-se, normalmente, ao longo da extremidade cortada do explante como resposta a um estímulo de substâncias endógenas ou de reguladores de crescimento, adicionados ao meio de cultura [3].
	Segundo Pierik [7], as auxinas, como o ANA (ácido naftalenoacético) e o 2,4-D (ácido 2,4-diclorofenoxiacético), ao serem adicionadas no meio de cultura, são responsáveis pela elongação e pelo aumento no tamanho dos tecidos, divisão celular e formação de raízes adventícias, entretanto inibem a formação de brotos adventícios e axilares. Ochatt & Caso [6], salientam que a adição de ANA ao meio de cultura pode inibir a proliferação e brotações, podendo induzir a formação de calos se forem utilizadas concentrações elevadas.
Este trabalho teve por objetivo verificar a reação de Scindapsus pictus, quanto ao processo de calogênese, em meios de cultivo com diferentes concentrações dos reguladores de crescimento ANA e 2,4-D.

2. MATERIAL E MÉTODOS

	O experimento foi desenvolvido no laboratório de Biologia Celular do Departamento de Zoologia e Genética, Instituto de Biologia da Universidade Federal de Pelotas. Como planta matriz foram utilizadas plantas de Scindapsus pictus mantidas em vasos plásticos, no ambiente do laboratório. 
	Lâminas foliares, extraídas da planta matriz, foram lavadas em água corrente e em água destilada, por 3 vezes, no ambiente do laboratório. A seguir, este material vegetal sofreu um processo de desinfestação, realizado em capela de fluxo laminar, onde se fez a passagem por álcool etílico 70% por 30 segundos e, imediatamente após, a imersão em solução de hipoclorito de sódio comercial (NaClO), com 1% de cloro ativo, adicionado de 2 gotas de Tween 20, por 30 minutos.
	O material, assim desinfestado, foi cortado, com o auxílio de um bisturi, formando explantes com área aproximada de 1 cm2, que foram colocados em frascos contendo 30mL dos seguintes meios de cultivo:

Meio 1: MS + 0,5 mg. L-1 de ANA
Meio 2: MS + 1,0 mg. L-1 de ANA
Meio 3: MS + 1,5 mg. L-1 de ANA
Meio 4: MS + 0,5 mg. L-1 de 2,4D
Meio 5: MS + 1,0 mg. L-1 de 2,4D
Meio 6: MS + 1,5 mg. L-1 de 2,4D

	Os frascos, contendo os explantes, foram fechados com papel alumínio e filme plástico e incubados em câmara de crescimento, no escuro, com temperatura controlada (25  2ºC), por 49 dias.
A unidade experimental constou de 1 frasco com 5 explantes. O experimento fatorial foi delineado no esquema inteiramente casualizado, com 4 repetições por tratamento.
Os explantes foram avaliados semanalmente, quanto ao processo de calogênese, através das seguintes notas:

	  Nota 0: explante oxidado e/ou contaminado
  Nota 1: explante sem modificação
  Nota 2: explante com bordas onduladas
  Nota 3: explante com formação de pequenos calos
  Nota 4: calos totalmente formados

	Os resultados obtidos foram analisados estatisticamente com o auxílio do pacote estatístico SANEST - Sistema de análise estatística para microcomputadores [9].

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

	Pela análise da variação verificou-se que, no processo de calogênese de S. pictus, ocorreram diferenças altamente significativas entre as concentrações de ANA, mas não houve diferenças significativas entre as diferentes concentrações de 2,4-D.
	Pelo desdobramento das médias (Teste de Duncan), verificou-se que os explantes incubados em meio contendo MS + 0,5 mg.L-1 de ANA foram superiores estatisticamente àqueles incubados em MS acrescido de 1,0 mg. L-1 ou 1,5 mg. L-1 deste regulador de crescimento, conforme pode ser observado na Tabela. Este resultado mostra que a menor concentração de ANA no meio de cultivo levou a uma melhor resposta no processo de calogênese. Isto não foi observado quando se utilizou 2,4-D no meio de cultivo, visto que não se encontraram diferenças significativas entre os tratamentos com este regulador de crescimento.

Calogênese em lâmina foliar de Scindapsus pictus, em meio MS com diferentes concentrações dos reguladores de crescimento ANA e 2,4D, após 49 dias de incubação in vitro.
Meios	ANA	2,4D	
MS + 0,5 mg. L-1	1,5464 a	1,1196 a	
MS + 1,0 mg. L-1	  1,2996   b	1,1995 a	
MS + 1,5 mg. L-1	  1,2397   b	0,9652 a	
As médias seguidas por letras distintas, nas colunas, diferem entre si ao nível de significância de 1%

Mujib et al. [5], ao avaliarem diferentes concentrações dos reguladores de crescimento ANA (0,5 a 1,0 mg.L-1) e BAP (0,5 a 1,0 mg.L-1), assim como 2,4D (0,05 a 2,0 mg.L-1), na indução de calos a partir de rizomas de Caladium sagitifolium, obtiveram a formação de calos vigorosos no meio contendo ANA + BAP, que também foi melhor para manutenção em longo prazo dos calos formados. Rocha [8], ao tentar induzir calos de Caladium x hortulanum nos meios MS e N6, com diferentes doses de 2,4D, não observou qualquer alteração representativa nos explantes, mesmo após três meses de incubação. No entanto, ao tentar a indução de calos com MS + 1,0 mg.L-1 de ANA + 1,0 mg.L-1 de BAP obteve uma média de 0,57 calos/frasco, no 28º dia de incubação. Estes resultados concordam com os obtidos no presente trabalho, visto que a adição de ANA no meio de cultivo, foi mais satisfatória do que a adição de 2,4-D.

4. CONCLUSÕES

	Com base nos resultados obtidos, pode-se concluir que a adição de ANA no meio de cultivo é mais favorável do que a adição de 2,4-D para Scindapsus pictus, porém verifica-se a necessidade da realização de outros experimentos, onde outros reguladores de crescimento sejam avaliados, incluindo algumas citocininas, como BAP (Benzilaminopurina) e TDZ (Tidiazuron). 

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] Enciclopédia em CD Rom 1001 Plantas & Flores, Revista Natureza, Edição Especial, Editora Europa, ISSN 0104-3609
[2] FERREIRA, I.T. Propagação in vitro de crisântemo “Funny Pynk”, via calogênese. Pelotas, 2003. 40 f. Dissertação (Mestrado em Agronomia – Produção Vegetal) Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, UFPel, Pelotas, 2003.
[3] GEORGE, E.F.; SHERRINGTON, P.D. Plant propagation by tissue cultured. Handbook and directory of commercial laboratories. Eversley: Exegetics, 1984, 709p.
[4] HANDRO,W.; FLOH,E.I.S, 1990, apud TORRES, A.C.; CALDAS, L.S. In: Técnicas e aplicações de tecidos de plantas. Brasília: ABCTP/EMBRAPA/CNPH, 1990, p.203-212.
[5] MUJIB, A; MAITY, I.; JANA, B.K. Rapid in vitro multiplication of Caladium sagitifolium. Advances in Plant Sciences. v. 9, n 1, p. 47-50, 1996.
[6] OCHATT, S.J.; CASO, O.M. In Vitro meristem of M4 apple I. Optimal nutrient medium. Plant cell, Tissue and Organ Culture, v.2, p. 39-48, 1983.
[7] PIERIK, R.L.M. Preparation  and composition nutrient media. In: In Vitro culture of higher plants, Dordrescht, Martinus Nijhoff, 1987, p. 45-82.
[8] ROCHA, M.T.R. Propagação in vitro dos gêneros Anthurium e Caladium. Pelotas, 1999. 82f. Dissertação (Mestrado em Agronomia – Fitomelhoramento) – Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, UFPel, 1999.
[9] ZONTA, E.P.; MACHADO, A.D.; SILVEIRA JUNIOR, P. Sanest: Sistema de análise estatística para microcomputadores. Registrado na Secretaria Especial de Informática sob nº 066060-categoria A, Pelotas, UFPel, 1984.