COLONIZACAO DO SISTEMA RADICULAR DE SEMENTES DE ARROZ POR RIZOBACTERIAS BIOCONTROLADORAS E PROMOTORAS DE CRESCIMENTO

Schafer,J.T.1,2, Moura, A.B.1, Ludwig, J.1,3, Zanatta, Z.G.C.N.1, Santos, A.S.1,3
1Departamento de Fitossanidade, 2Bolsista PIBIC/CNPq,
 3 Mestrando Bolsista CAPES  jaquelinets@ibest.com.br

1 – INTRODUÇÃO
                                                                                                                                                                                              
O Laboratório de Bacteriologia e Controle Biológico da Universidade Federal de Pelotas desenvolve desde 1997 um programa visando ao biocontrole de doenças de arroz, bem como à promoção de crescimento. Durante este período foram selecionados isolados que além de serem biocontroladores de algumas doenças promovem crescimento e aumento de produção em plantas de arroz. Essas rizobactérias são chamadas de PGPR e representam as bactérias de vida livre que possuem alta capacidade de colonizar a rizosfera na presença da microflora nativa [4]. Dentre os 185 isolados avaliados inicialmente, 8 foram selecionados (DFs185, DFs223, DFs306, DFs416, DFs418, DFs419, DFs422 e DFs471). Esses candidatos já mostraram ter potencial para controle da mancha parda (Bipolaris oryzae) [6,7] e escaldadura (Gerlachia oryzae) [7] bem como para promoção de crescimento em sequeiro [10] e sob inundação [9], resultando em aumento de produção.
O objetivo deste trabalho foi observar a capacidade destes isolados em colonizar o sistema radicular de 6 diferentes cultivares de arroz.  

2 – MATERIAL E METODOS

2.1 – Origem dos isolados
	Foram utilizados oito isolados selecionados, em fases anteriores, quanto à capacidade de biocontrole de Bipolaris oryzae e Gerlachia oryzae, e de promoção de crescimento.
2.2 – Preparo da suspensão e montagem do ensaio
	Foram utilizadas seis cultivares de arroz:  BRS Atalanta, BRS Bojuru, BRS 6 “Chui”, BRS Firmeza, BRS Pelota e BRS 7 “Taim”. Suspenderam-se os isolados (Tabela 1) em solução salina (NaCl 0,85%) esterilizada, individualmente, passando para tubo de ensaio, igualando, visualmente, as concentrações pela escala Mc Farland, tubo 5. As sementes utilizadas passaram por desinfestação superficial onde foram postas cinco minutos no álcool (70%), dez minutos no hipoclorito de sódio (50%), e a seguir foram lavadas com água esterilizada por cinco vezes. Posteriormente foram imersas na suspensão dos isolados, e a testemunha em salina. As sementes foram agitadas por 4 horas à 4ºC e após este tempo, foram retiradas e colocadas sobre papel filtro esterilizado para retirar o excesso de suspensão. As sementes, assim tratadas, foram depositadas em ágar-água (0,7%), sendo uma por tubo, constituindo uma parcela. Esses tubos foram colocados para incubar em B.O.D sob fotoperíodo de 12 horas a 28ºC por 7 dias.

Tabela 1: Origem e identificação dos isolados utilizados para microbiolizar as sementes de arroz

Isolados	Identificação	Nicho	
DFs185	Pseudomonas sp.	Espermosfera de arroz	
DFs223	P. amygdali	Espermosfera de arroz	
DFs306	Não identificado	Espermosfera de cebola	
DFs416	Bacillus cereus	Contaminantes produtores de antibióticos	
DFs418	B. subtilis	Contaminantes produtores de antibióticos	
DFs419	B. cereus	Contaminantes produtores de antibióticos	
DFs422	B. subtilis	Contaminantes produtores de antibióticos	
DFs471	Xanthomonas maltophilia	Túnica de alho	

2.3 – Avaliação
	Os tubos foram observados à olho nu, contra luz, verificando-se a turvação do meio ao redor do sistema radicular, indicativo da presença da bactéria. Foram avaliadas, após 7 dias, incidência (porcentagem de tubos com colonização) e intensidade de colonização. A intensidade de colonização das sementes de arroz foi avaliada, atribuindo-se notas de 0 a 3: 3= colonização de ¾ da totalidade das raízes; 2 = colonização acima de 1/3 a ¾ das raízes; 1= colonização de ate 1/3 das raízes, e 0= nenhuma colonização [2]. 

3 – RESULTADOS E DISCUSSÃO

Todos os isolados foram capazes de colonizar o sistema radicular das seis cultivares utilizadas, enquanto as plantas surgidas das sementes tratadas com salina (testemunhas) não apresentaram quaisquer sinais de colonização em todas as cultivares, mostrando, portanto, que a desinfestação superficial ocorreu com pleno sucesso. Os isolados que resultaram em maior incidência de plantas com sistema radicular colonizado foram DFs223 e DFs306, e em menor, o isolado DFs419, embora não tenha ocorrido diferença estatística entre estes (Tabela 2). Quanto à intensidade de colonização, o isolado DFs306 colonizou maior proporção de raízes enquanto o isolado DFs471, menor, porém este comportamento não expressou diferenças ao nível de 5%. 
	Houve efeito de cultivar tanto para incidência de colonização quanto para sua intensidade. As cultivares BRS 6 Chuí , BRS Pelota e BRS 7 Taim resultaram em 100% de incidência, sendo que a primeira também apresentou  maior intensidade de colonização (Tabela 3).
	Comportamento diferenciado de isolados quanto à incidência e intensidade de colonização em diferentes cultivares é relatado para alho [5] e tomate [1], sendo atribuído a esta característica o comportamento diferenciado quanto ao potencial de promover crescimento de plantas de alho [8], de controle de Pseudomonas marginalis pv. marginalis em alho [5] quando aplicados em diferentes cultivares. Portanto, denota-se a importância dos isolados estudados, pois estes colonizaram todas as cultivares avaliadas, mostrando, portanto capacidade de sobrevivência em diferentes genótipos, o que possibilita a flexibilidade do seu uso como promotores de crescimento e como biocontroladores, pois a colonização é um dos principais requisitos para que ocorra a interação benéfica entre o  microrganismo e a planta, atuando na bioproteção e na promoção de crescimento das plantas [3].

Tabela 2: Efeito de isolados quanto à Incidência e intensidade de colonização radicular por bactérias utilizadas para microbiolizar sementes de seis cultivares de arroz, conduzido em ágar-água.
 
ISOLADOS	INCIDÊNCIA	INTENSIDADE	
DFs185	0,77 A	1,33 A	
DFs223	0,83 A	1,60 A	
DFs306	0,94 A	2,05 A	
DFs416	0,70 A	1,64 A	
DFs418	0,70 A	1,33 A	
DFs419	0,86 A	1,55 A	
DFs422	0,86 A	1,52 A	
DFs471	0,80 A	1,30 A	
Valores seguidos por mesmas letras nas colunas não diferem ao nível de 5% de probabilidade

Tabela 3: Efeito de cultivares quanto à Incidência e intensidade de colonização radicular de arroz cujas sementes foram microbiolizadas com oito diferentes bactérias, conduzido em ágar-água.

CULTIVAR	INCIDÊNCIA	INTENSIDADE	
BRS Atalanta	0,83 AB	1,81 A	
BRS Bojuru	0,75 AB	1,62 AB	
BRS 6 “Chuí”	0,92 A	1,77 A	
BRS Firmeza	0,66 B	1,14 B	
BRS Pelota	0,92 A	1,75 AB	
BRS 7 “Taim”	0,89 A	1,20 AB	
Valores seguidos por mesmas letras nas colunas não diferem ao nível de 5% de probabilidade

4 – CONCLUSÕES

Os isolados avaliados têm alto potencial de sobrevivência por colonizarem o sistema radicular de diferentes genótipos, apresentando alto potencial para promoverem crescimento e biocontrole de patógenos nos cultivares avaliados.

5 – BIBLIOGRAFIA

[1] DEUNER, C.C. Isolamento e seleção de rizobactérias promotoras de  crescimento de tomateiro (Lycopersicon esculentum MILL.). Pelotas, 2004. 67f. Dissertação (Mestrado em Fitossanidade), Universidade Federal de Pelotas, 2004.

[2] HABE, M.H., UESUGI, C.H. Método “in vitro” para avaliar a capacidade colonizadora de bactérias em raízes de tomateiro. Fitopatologia Brasileira, Brasília, v. 25, n.4, p.657-660,2000. 

[3] KLOEPPER, J.W.; BEAUCHAMP, C.J. A review of issues related to measuring colonization of plant roots by bacteria. Canadian Journal of Microbiology, v.38, p.1219-1232, 1992. 

[4] KLOEPPER, J.W., SCHROTH, M.N. Relationship of in antibiosis of plant growth-promoting rhizobacteria to plant growth and the displacement of root microflora. Phytopathology, v.71, p. 1020-1024, 1981.

[5] MARCUZZO, L.L. Seleção e caracterizacao de bactérias com potencial para controle biológico da queima bacteriana do alho. Pelotas, 2002. 54f. Dissertação (Mestrado em Fitossanidade), Universidade Federal de Pelotas, 2002.

[6] MOURA, A.B., PIEROBOM, C.R., NAVA, D.E., AFONSO, A.P.S. Tratamento de sementes de arroz para seleção massal de procariotas potenciais antagonistas a Bipolaris oryzae. Fitopatologia Brasileira, v.23 (suplemento), p.213, 1998.

[7] MOURA, A.B., SILVA, E.G., RIBEIRO, A.S. Biocontrole de Gerlachia oryzae e Bipolaris oryzae pela microbiolizacao de sementes. Informativo ABRATES, v.11, p.148, 2001.

[8] MOURA, A.B., SILVA, E.G., SANTOS, A.S., KUNZLER, D.P., EMMER, M.O., ZANATTA, Z.G.C.N., ANTUNEZ, D.M. Comportamento de cultivares de alho microbiolizados com isolados pré-selecionados para promoção de crescimento. IN: 
REUNIÃO DE CONTROLE BIOLÓGICO DE FITOPATÓGENOS,7,Bento Gonçalves, 2001.. Anais.... Bento Gonçalves: Embrapa Uva e Vinho, 2001.p.81.

[9] SANTOS, A.S., MOURA, A.B., SILVEIRA, A.O. Promoção de crescimento de plantas arroz induzida por bactérias pré-selecionadas para biocontrole de mancha parda. Fitopatologia Brasileira, v.26 (suplemento), p.300, 2001. 

[10] SILVA, E.G., MOURA, A.B. Efeito PGPR de bactérias biocontroladoras de Bipolaris oryzae em arroz.  IN: CONGRESSO DE INICIAÇÃO CIENTÍFICA,8,Rio Grande,1999.. Anais.... Rio Grande: Universidade Federal do Rio Grande, 1999. p.278.