ESTUDO DA PRESENÇA DE ESPINHOS EM PLANTAS DE AMORA-PRETA
Chavarria, G.1*; Trevisan, R.2; Raseira M. do C.B.3

1 Engº. Agrº. Mestrando em Fruticulturade Clima Temperado, FAEM/UFPel, Pelotas, RS Caixa Postal 354 CEP 96010-900 * geraldochavarria@hotmail.com
2 Engº. Agrº. Dr. Bolsista Recém-Doutor, CNPq - Embrapa Clima Temperado
trevisan@ cpact.embrapa.br
3 Engº. Agrº. Dr. Pesquisador, Bolsista CNPq - PQ - Embrapa Clima Temperado  bassols@cpact.embrapa.br

1. INTRODUÇÃO

O Brasil apresenta grande potencial produtivo devido à sua diversidade de clima e solo, como também, à presença de um amplo e diferenciado mercado interno, com possibilidade de absorção de grande parte da produção. 
Nos últimos anos, tem-se dado grande atenção ao cultivo de pequenas frutas. Espécies como, framboesa, mirtilo e amora-preta, despertam o interesse dos consumidores e também dos produtores, devido tanto à sua importância quanto às propriedades nutracêuticas, como também pela alternativa de diversificação na propriedade.
A amoreira-preta é uma planta amplamente difundida em diversas regiões do mundo, devido à facilidade de hibridação entre as espécies e variabilidade genética alta. A partir do lançamento dos testes de adaptação de cultivares e do início de um programa de melhoramento, para as condições climáticas do Sul do Brasil, o cultivo da amoreira-preta vem aumentando o interesse e se expandindo desde o Rio Grande do Sul, até as regiões serranas de São Paulo e Minas gerais. 
Atualmente, os principais entraves da cultura da amoreira-preta, se dão em função da necessidade de cultivares produtivas e com características de fruta adequadas ao mercado in natura; problemas fitossanitários em função do incremento da área cultivada; maior necessidade de aprimoramento da tecnologia de colheita e pós-colheita devido a elevada perecibilidade das frutas e cultivares de qualidade que não apresentem espinhos. Este último é um característico de extrema importância tanto para a realização da poda quanto para a colheita e tratos culturais, em geral. Entretanto, as espécies de amora preta cultivadas comercialmente são tetraploides (isto é, têm quatro vezes o número de cromossomos básico da espécie) e como o caráter sem espinhos, é recessivo, obtém-se apenas, 1:35 plantas com este caráter, na segunda geração de um cruzamento entre duas cultivares homozigotas, sendo uma para com espinhos e outra, sem.
O presente trabalho teve como objetivo avaliar a presença ou ausência de espinhos, bem como o seu número, em progênies, F2, de amora-preta oriundas de diferentes cruzamentos, a fim de verificar o efeito quantitativo dos gens “com espinho” , de modo que o maior número de espinhos por determinado comprimento de haste fosse correlacionado com a presença de maior número de gens. Se a hipótese for verdadeira pode-se selecionar na primeira geração, as plantas das quais deveriam ser extraídas sementes para levar à geração seguinte e obter o maior número de plantas sem espinhos nas hastes.

2. MATERIAIS E MÉTODOS

O trabalho foi realizado na Embrapa Clima Temperado, Pelotas, RS, a partir de cruzamentos efetuados em 2001.
Um mínimo de 20 plantas por cruzamento,  foram previamente selecionadas e avaliadas de acordo com o número de espinhos. Na haste principal das plantas, determinou-se a densidade dos espinhos em três locais diferentes em uma área de 5cm2. De acordo com o tamanho dos espinhos encontrados em cada clone, foi estabelecida uma escala : (I – espinhos pequenos; II espinhos médios e III – espinhos grandes) (Tabela 1). Também foi observada a presença ou ausência de espinhos na folha e no pedicelo (Tabela 1).
Os frutos destes cruzamentos foram colhidos de acordo com a maturação e armazenados em geladeira (5ºC), até atingir o número aproximado de 40 frutos.
As sementes foram extraídas com auxílio de um liquidificador, seguidas da lavagem com água corrente, para a retirada da polpa, seguidas da secagem em temperatura ambiente. Numa bandeja contendo água e gelo, foram colocados beckers com as sementes dentro, contendo ácido sulfúrico. Passados 3 horas no ácido, as sementes foram retiradas e lavadas por cinco minutos em água corrente, cinco minutos em solução com bicarbonato (neutralizar o ácido) e cinco minutos em água corrente novamente. Posteriormente foram postas a secar em temperatura ambiente.
Em câmaras de fluxo contínuo, as sementes foram acondicionados em saquinhos plásticos, previamente identificados, contendo papel filtro embebido em solução fúngica. Após selados os saquinhos foram armazenadas em câmara fria por dois meses à temperatura de 5ªC ±2. Passado este período, as sementes foram postas a germinar em caixas contendo areia e terra como substrato. Após as sementes germinarem, quando as mudas apresentavam aproximadamente 4 cm de altura, com auxílio de uma lupa, avaliou-se a presença ou ausência de espinhos nos progênies. 
Os dados foram avaliados através do teste qui-quadrado, com o objetivo de determinar se as freqüências da ausência dos espinhos correspondiam às esperadas. Foi também calculado o coeficiente de correlação entre tamanho dos espinhos e freqüência de plantas sem espinhos e entre número de espinhos dos diversos clones com a freqüência de indivíduos com ausência de espinhos nas hastes. 

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Pelos resultados, observou-se que dentre as progênies testadas, apenas o cruzamento 2001-9 (Guarany x Xavante) apresentou um resultado significativo no teste qui-quadrado (Tabela 2), enquanto os demais estiveram de acordo com a freqüência esperada de uma planta sem espinhos para cada 36 plantas totais. Existe uma possibilidade de ser obtida uma maior quantidade de indivíduos sem espinhos, no cruzamento 2001-9. Esta característica é controlada por um gene recessivo e quando cruzada uma planta com espinhos com outra com a ausência de espinhos, é obtido no F2 uma proporção de 35:1 [2], respectivamente. Entretanto, no cruzamento 2001-9 observa-se uma proporção maior de indivíduos sem espinhos (11,82:1), porém esta razão pode ter sido obtida em função de problemas de amostragem, sendo necessária novas avaliações , a campo.
Outra explicação possível deste resultado é a possibilidade da cultivar Guarany apresentar em sua genealogia, um indivíduo sem espinhos, aumentando a probabilidade de ocorrência de plantas sem espinhos na progênie. Porém para tal afirmação são necessários novos experimentos com populações maiores, uma vez que, a progênie do cruzamento (Guarany x Xavante) havia 201 acessos.
O cruzamento 2001-9 apresentou nas plantas F1 um menor número médio de espinhos relacionado aos outros cruzamentos (Tabela 2). Mas quanto à presença de espinhos na folha, assim como no pedicelo houve variação dentro de todos os cruzamentos. Foram realizadas testes de correlações entre o número de espinhos por comprimento de haste  e a classificação quanto ao tamanho do espinho da planta mãe, entre o número de espinhos e a frequência de indivíduos sem espinhos na progênie. Os resultados foram não significativos (Tabela 3). 
	Segundo [2] o gene que controla a presença de espinhos possivelmente possa ter sua expressão afetada pelo ambiente. Sendo este outro fator passível de investigação.
A maneira escolhida para observar a presença de espinhos foi em plântulas, porém, outros autores [1] observaram que cotilédones de plantas sem espinhos são glabros enquanto as plantas com espinhos apresentavam pelos nos mesmos. Em função disto têm-se a possibilidade de antecipar a observação sobre a presença de espinhos.
	Os resultados obtidos são preliminares, devido a quantidade de progênies e de indivíduos dentro das progênies utilizadas serem pequenas, sendo necessário que os estudos sejam repetidos e que o material seja também acompanhado no campo, a fim de observar a sua intensidade de ocorrência na planta. Entretanto, com base nestes resultados que corroboram com aqueles de [3], o efeito dos genes para presença de espinhos é dominante e não tem nenhum efeito aditivo, isto é, o indivíduo quadriplex para este caráter não tem, necessariamente, mais espinhos que o simplex. Assim, a hipótese de fazer uma pré-seleção no F1 de plantas que deveriam ser levadas para a segunda geração não é correta.

Tabela 1. Quantidade média de espinhos, presença na folha e no pedicelo e classificação de acordo com o comprimento do espinho. Pelotas, RS. Embrapa Clima Temperado, 2003.

Cruzamento
	Médias
	Espinhos Folha
	Espinhos Pedicelo	Classificação
	
2001-8 Pl.2	10,33	S	S	II	
2001-8 Pl.3	9	S	S	III	
2001-8 Pl.4	11,66	S	N	I	
2001-9 Pl.3	9	S	S	I	
2001-9 Pl.4	8,33	S	N	I	
2001-9 Pl.5	7	N	S	II	
2001-9 Pl.7	8,33	N	S	III	
2001-12 Pl.1	9,33	N	S	I	
2001-12 Pl.3	21	S	S	II	
2001-12 Pl.5	9,66	S	S	II	
2001-12 Pl.6	8,33	N	N	II	
2001-12 Pl.12	9,66	N	N	III	
S – presença de espinhos  N-ausência de espinhos

Tabela 2. Teste qui-quadrado nos cruzamentos que apresentam ausência de espinhos em algumas progênies. Pelotas, RS. Embrapa Clima Temperado, 2004.

Cruzamento	x2	
2001-8	0,089 ns	
2001-9	23,37**	
2001-12	0,26 ns	
ns - não significativo, ** -  significativo a 1% de probabilidade.

Tabela 3. Correlações entre características da planta mãe com a freqüência de indivíduos sem espinhos na progênie de amora-preta. Embrapa Clima Temperado, 2004.
	Classificação
(tamanho dos espinhos)	Freqüência de indiv. sem espinhos	
n° médio de espinhos	-0.037879428	-0.336576903	
Freqüência de indiv. sem espinhos	-0.512789972		

Tabela 4. Quantificação da presença de espinhos e sua relação. Pelotas, RS. Embrapa Clima Temperado, 2004.

Cruzamento
	Plantas com Espinho	Plantas sem espinhos	Total de plantas
	Freqüência de indiv. sem espinhos	
2001-8 Pl.2	20	0	20	0	
2001-8 Pl.3	39	1	40	0,025	
2001-8 Pl.4	28	1	29	0,034	
2001-9 Pl.3	17	4	21	0,190	
2001-9 Pl.4	14	3	17	0,176	
2001-9 Pl.5	128	10	138	0,072	
2001-9 Pl.7	25	0	25	0	
2001-12 Pl.1	11	0	11	0	
2001-12 Pl.3	33	0	33	0	
2001-12 Pl.5	13	1	14	0,071	
2001-12 Pl.6	66	3	69	0,043	
2001-12 Pl.12	59	0	59	 0	

4. CONCLUSÕES

Conclui-se preliminarmente que o cruzamento da cultivar Guarany com a Xavante (cruzamento 2001-9) apresenta um maior número de indivíduos sem espinhos. 
Não há um efeito quantitativo dos genes para o caráter com espinhos.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

 [1] CRANE, M.B. & DARLINGTON, C.D. The origin of new forms in Rubus. Genetica 9, 241-278, 1932.
[2] PAVLIS, G.C., Gene dose effects on thornlessness in blackberry (Rubus subg. Eubatus). Arkansas. The University of Arkansas, 1981, 31f. (Dissertação de Mestrado).