GERMINAÇÃO DE PÓLEN DE PESSEGUEIRO EM DIFERENTES MEIOS DE CULTURA

Costa, A. T. *1; Raseira, M. do C. B.2; Nakasu, B.H.3; Gonçalves R.S.4
* 1 Estudante de Graduação na faculdade de Agronomia da Universidade Federal do Rio Grande do Sul-UFRGS/ alicec@terra.com.br - Rua Dr. Timóteo 1045 /803 cep: 90570-04 Porto Alegre, RS 
 2 Eng. Agrônomo, Ph.D. em Melhoramento Genético, pesquisadora da Embrapa Clima Temperado bassols@cpact.embrapa.br
3 Eng. Agrônomo, Ph.D. em Melhoramento Genético de Fruteiras, pesquisador da Embrapa Clima Temperado boni@cpact.embrapa.br
4 Bolsista CNPQ – Projeto Frutemp na Embrapa Clima Temperado rsg@pop.com.br
Embrapa – BR 392 Km 78 – Cx. Postal 403 96001 – 970 –Pelotas , RS

1. INTRODUÇÃO

O pessegueiro, Prunus persica L. Batsch, é uma fruteira de clima temperado pertencente à família Rosácea, subfamília Pronoidea e gênero Prunus [1] cujas condições para a plena floração no sul do Brasil ocorrem entre início de julho até final de agosto.
 Informações à respeito da viabilidade e germinação de grãos de pólen são de extrema importância quando se deseja realizar programas de melhoramento genético e biologia reprodutiva e para tanto, existem quatro formas de se avaliar esses dados:
a) germinação in vitro; b) germinação in vivo; c) exame microscópico após o uso de corantes; d) formação de sementes após a polinização normal de um genitor feminino selecionado [3].
	Todos os quatro métodos têm sido utilizados em pesquisas, contudo para a escolha do método adequado, deve ser levado em conta a precisão e o objetivo que se deseja na pesquisa além do tempo que se dispõe para efetuar os testes. 
O uso de corantes é um método rápido mas os resultados muitas vezes podem ser superestimados uma vez que o corante pode agir mesmo em grãos de pólens inviáveis devido a quantidade de enzimas, amido ou outras substâncias componentes. Tanto a germinação in vivo,  observada nos pistilos quanto a formação de sementes são testes bastante precisos mas que exigem um tempo maior até que se possa avaliar os resultados.
	Desta forma o teste de germinação in vitro é considerado por muitos pesquisadores um teste rápido e seguro para se avaliar a viabilidade de grãos de pólen. Existem porém alguns fatores que podem influenciar na germinação in vitro incluindo a espécie da planta, época de coleta e condições de armazenamento dos pólens além de fatores relacionados ao meio de cultura como quantidade de meio X quantidade de pólen, ph, uso ou não de boro, etc, .
	Assim, o objetivo deste trabalho foi de  verificar o meio mais adequado à germinação de pólen de pessegueiro para o teste in vitro.

2. MATERIAL E MÉTODOS

Este trabalho foi conduzido no laboratório de Melhoramento Genético da Embrapa  Clima Temperado, em Pelotas. 
Coletou-se de plantas da coleção Embrapa Clima Temperado  pólens de flores em estádio balão das cultivares Leonense e Pepita e da seleção I 19-56 .
As anteras  foram separadas, logo que coletadas, com o auxílio de uma peneira de malha 2 mm, sendo recolhidas  em caixas de papel onde permaneceram de 24 até 48 horas para completa deiscência.
Foram preparados seis meios de cultura contendo diferentes concentrações de açúcar e ácido bórico, sendo estes:
1)	10 gramas de açúcar, 100 ml de água destilada, 1 grama de ágar;
2)	20 gramas de açúcar, 100 ml de água destilada, 1 grama de ágar
3)	30 gramas de açúcar, 100 ml de água destilada, 1 grama de ágar
4)	05 gramas de açúcar, 100 ml de água destilada, 1 grama de ágar
5)	10 gramas de açúcar + 4 mg de ácido bórico (H3Bo3), 100 ml de água destilada, 1 grama de ágar
6)	20 gramas de açúcar + 4 mg de ácido bórico (H3Bo3), 100 ml de água destilada, 1 grama de ágar

Os meios foram aquecidos em forno microondas, em banho-maria até completa dissolução do ágar  e colocados  com o auxílio de um conta-gotas sobre lâmina adaptada para esse tipo de teste. Cada lâmina possui dois anéis afixados de tubo de PVC de 1,5 cm de diâmetro e aproximadamente 0,4 cm de altura, de modo que permita a colocação do meio no interior do anel [5]. Dessa forma, para cada lâmina, foram considerados duas repetições. Assim que o meio resfriou, foi aspergido o pólen levemente sobre o meio com o auxílio de um pincel a fim de promover uma distribuição uniforme do material.
Após esse procedimento, as lâminas foram colocadas em placas de Petri com papel absorvente umedecido ao fundo simulando câmara úmida e mantidas em BOD à temperatura de 25°C promovendo um ambiente ideal para o crescimento do tubo polínico [6]. 
Após três horas, realizou-se a contagem dos grãos de pólen germinados, contando-se um total de 100 grãos de pólen por cada repetição.
Para análise do experimento foi considerado o delineamento experimental completamente casualizado, sendo composto por duas repetições e os dados submetidos a análises pelo teste de TUKEY (p=0,005).

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

A cultivar Pepita e a seleção I 19-56 apresentaram melhor percentagem de germinação no meio 4 porém não houveram diferenças estatísticas entre as percentagens ocorridas no meio 4 em relação ao meio 5 (Tabela 1).
Com relação à cultivar Leonense pode-se dizer que os melhores resultados foram observados no meio 5 e esse diferiu significativamente dos demais meios.
De um modo geral verificou-se que a adição de boro ao meio de cultura influenciou significativamente, de forma positiva na germinação, sendo o meio 5 aquele que promoveu maior média de germinação como pode ser observado na Tabela 1.

Tabela 1: Percentagem média de germinação in vitro de pólen de pessegueiro para 
                diferentes concentrações de açúcar e ácido bórico
	1	2	3	4	5	6	
Pepita	67,0aB	51,5aC	2,47bD	91,1aA	89,5aA	71,5aB	
Leonense	68,0aB	35,5bD	7,3aE	51,5bC	88,5aA	51,0bC	
I 19-56	68,5aB	46,0aC	3,33abD	91,0aA	89,7aA	39,5cC	

Médias com letras iguais, minúsculas nas colunas e maiúsculas nas linhas, não diferem estatísticamente  entre si pelo teste de TUKEY, ao nível de significância de 5%.

Figura 1: Médias de germinação in vitro de grãos de pólen de pessegueiro em função de 
               diferentes tratamentos

A adição de açúcar ao meio de cultura tem por objetivo o equilíbrio osmótico entre o pólen e o meio de germinação e fornecer energia para auxiliar o processo de desenvolvimento do tubo polínico [2]. O boro foi adicionado ao meio porque melhora a germinação, o crescimento do tubo polínico e diminui a probabilidade destes estourarem sendo a resposta variável de acordo com a espécie [4]. 
Pode-se observar que adição de ácido bórico na concentração de 40mg L-1 ao meio de germinação atuou de forma positiva para todas as cultivares, indicando que ocorreu reação entre o ácido bórico e o açúcar formando o complexo açúcar – borato, o qual reagiu mais rapidamente com as membranas celulares [7].
	Segundo Galletta (1983) a influência do boro na germinação está correlacionada positivamente com a temperatura e negativamente correlacionada com a concentração de açúcar comprovado também nesse experimento onde o crescimento no meio 6 diferiu estatisticamente do meio 5 ao nível de significância de 5%.	 

4. CONCLUSÕES

Embora tenha ocorrido interação significativa entre os fatores meio de cultura e cultivares, podemos considerar que o meio contendo 10 gramas de açúcar, 4 mg de ácido bórico, 1 grama de ágar em 100 ml de água destilada é o meio mais propício à germinação de pólen dos três genótipos estudados de pessegueiro.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] EMBRAPA-CNPFT -  Centro Nacional de Pesquisa de Fruteiras de Clima Temperado. Frutas do Brasil – Pêssego: Produção. Pelotas, RS: EMBRAPA- CNPFT, 2003. 
[2] FRANZON R. C.; RASEIRA, M. do C. B. Caracterização de Mirtáceas Nativas do Sul  do Brasil. Pelotas- RS, 2004. pg.28 – 50. 
[3] GALLETTA, G.J. Pollen and seed management In: MOORE, J.N.; JANICK, J. (Ed.) Methods in fruit breeding. Indiana: Purdue University Press, 1983. pg. 23- 30.
[4] NUNES, J. C. O.; DANTAS, A. C. M,; PEDROTTI , E. L.; ORTH, A.I.; GUERRA, M. P. Germinação de pólen in vitro e receptividade do estigma em macieira cvs. Fuji e Golden Delicious. Revista Brasileira de Fruticultura, Jaboticabal, v.23, n° 1, pg. 35-39. 2001
[5] RASEIRA, M. do C. B.; NAKASU, B.H. Pessegueiro. In: BRUCKNER, C.H. (editor) Melhoramento de Fruteiras de Clima Temperado. Viçosa: editora da UFV, 2002. pg. 89 – 113
[6] RASEIRA, M. do C. B.; NAKASU, B.H. In : NASS, L.L.; VALOIS A. C.; MELO I. S.; VALADARES-INGLIS M.C. (editores) Recursos Genéticos & Melhoramento – Plantas.  Rondonópolis, MT, 2001. pg. 443 – 474.
[7] STANLEY, R.G.; LINSKENS, H.F. Pollen biochemistry management. Heidellberg, Berlin: 1974. pg. 67 – 72.