BIOENSAIO PARA DETECÇÃO DE CULTIVARES DE SOJA  TOLERANTES A GLIFOSATO ATRAVÉS DA DILUIÇÃO DO HERBICIDA NA ÁGUA DE EMBEBIÇÃO DO SUBSTRATO

Funguetto, C. I. 1 

1Eng. Agrôna - Doutoranda do PPG em Ciência e Tecnologia de Sementes - DFT FAEM/UFPel 
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cifunguetto@ig.com.br

1. INTRODUÇÃO

	A soja é a cultura agrícola de maior importância no contexto mundial. O Brasil é o segundo maior produtor, tendo cultivado 18,4 milhões de hectares na safra agrícola 2002/2003 [6]. Existem no país 23 cultivares de soja tolerantes ao herbicida Roundup Ready (RR), protegidas  junto ao Serviço Nacional de Proteção de Cultivares (SNPC), vinculado ao Ministério da Agricultura, sendo três delas em nome da Cooperativa Central Agropecuária de Desenvolvimento Tecnológico e Econômico Ltda (Coodetec) [4].
A iminente legalização dos cultivos  de soja GM tolerante a herbicida [2], bem como as exigências dos consumidores e do comércio internacional, requerem que sejam desenvolvidas técnicas que permitam a detecção segura de sementes de origem GM, possíveis de serem padronizadas e com preços reduzidos, a fim de não onerar os custos de produção. 
Já foram desenvolvidas diversas pesquisas, visando estabelecer  metodologias para detecção de sementes de origem GM, fundamentadas em princípios bioquímicos, genéticos, fenotípicos (bioensaios) e variáveis quanto à espécie, tempo de execução, tipo de evento, grau de complexidade e custo. 
No entanto, ainda não há nenhum método padronizado e a Associação Internacional de Analistas de Sementes (ISTA) concluiu, após  procedimentos de aferição dos protocolos para detecção de sementes de origem GM, utilizados por laboratórios de diversos países, que apenas 70%   obtiveram resultados corretos revelando necessidade de continuidade e intensificação das pesquisas [8]. 
Para soja tolerante a herbicida, os bioensaios são métodos promissores na detecção de sementes, por serem eficazes e de baixo custo, conforme mostraram estudos de Goggi e Stahr [6]; Bevilaqua et al. [1];  Tillmann e West [10]; Funguetto et al. [5], testando cultivares distintas.
O objetivo do presente estudo foi avaliar a eficiência da metodologia de detecção de sementes de soja para cultivares protegidas em nome da Coodetec, empregando solução do herbicida glifosato diluído na água utilizada na embebição do substrato. 

2. MATERIAL E MÉTODOS

	O estudo foi conduzido na Faculdade de Agronomia Eliseu Maciel, da Universidade Federal de Pelotas.
	Foram utilizadas sementes de cultivares de soja (Glycine max L. Merril), sendo três de origem GM (CD 212RR, CD 213RR e CD 214RR), tolerantes ao herbicida glifosato e duas parentais não GM (OC 14 e CD 201), todas protegidas junto ao SNPC, em nome da Coodetec. O herbicida utilizado continha 480 g/l do ingrediente ativo sal de isopropilamina de N-(fosfometil) glicina e 36% de equivalente ácido de N-(fosfometil) glicina. A dose empregada foi de 0,03% do produto comercial, diluído na água de embebição do substrato. A quantidade de água foi equivalente a 2,5 vezes o peso do papel. As unidades experimentais foram rolos de papel germiteste, contendo 50 sementes, com quatro repetições. Os parâmetros avaliados foram: germinação e percentagem de plântulas com  raízes secundárias. O teste de germinação foi conduzido conforme prescrito nas Regras para Análise de Sementes (RAS) [3]. A percentagem de plântulas com raízes secundárias foi obtida em conjunto com o teste de germinação,  através da observação visual de características morfológicas, na contagem final. Foi utilizado o delineamento inteiramente casualizado, com quatro repetições. Os dados foram analisados através do programa WinStat [9] e as médias foram comparadas pelo teste de Tukey a 5% de probabilidade.

3. RESULTADOS E DISCUSSÃO

Os resultados obtidos (Tabela 1) mostram que todas as três cultivares GM, independentemente da qualidade fisiológica, apresentaram tolerância à presença do herbicida glifosato enquanto que as duas cultivares não GM acusaram elevada sensibilidade, produzindo somente plântulas anormais.

Tabela 1 – Dados médios de germinação e de plântulas com raízes secundárias (PRS), de diferentes cultivares de soja GM e não GM, após semeadura em substrato umedecido com herbicida glifosato.

Avaliações	Dose (%)	Cultivares	
		CD 212RR*	CD 213RR*	CD 214RR*	OC 14	CD 201	
Germinação
(%)	0,0	75 a C	91 a B	90 a B	95 a  A	90 a B	
	0,03	70 a B	86 a A	88 a A	0 b C	0 b C	
PRS
(%)	0,0	86 a B	91 a A	92 a A	96 a A	93 a A	
	0,03	87 a B	88 a A	89 a A	0 b D	0 b D	
Médias seguidas da mesma letra minúscula nas colunas e maiúscula nas linhas, não diferem entre si pelo teste Tukey a 5% de probabilidade.
* cultivares GM

As sementes das cultivares GM mantiveram elevada capacidade de produzir plântulas normais e com abundante desenvolvimento do sistema radicular, após semeadura em susbtrato embebido com o herbicida.
Nas cultivares não GM, apenas iniciaram o processo germinativo, porém as plântulas não apresentaram desenvolvimento normal do hipocótilo e do sistema radicular. 
Ressalta-se que a emissão de raízes secundárias em plântulas não GM foi totalmente inibida na presença do herbicida glifosato, enquanto que em cultivares tolerantes, mesmo no lote com baixa qualidade fisiológica (CD 212RR), apresentaram   desenvolvimento visível.
  As anormalidades morfológicas das plântulas não GM submetidas a germinação em substrato embebido com o herbicida glifosato ficaram bastante evidentes. Verificou-se que apresentaram comprimento total reduzido, engrossamento, estrias longitudinais e amarelecimento do hipocótilo, inibição do desenvolvimento da raiz primária e da emissão de secundárias e hipocótilo proporcionalmente maior do que a raiz primária. Tais sintomas causados pelo herbicida glifosato em plântulas de soja convencional, estão de acordo com os relatados por outros pesquisadores [1, 5, 6, 10]. 

4. CONCLUSÕES

É possível detectar  plântulas de diferentes cultivares de soja  geneticamente modificadas através do teste de germinação, empregando herbicida glifosato (480 g/l de ingrediente ativo) glicina e 36% de equivalente ácido de N-(fosfometil) glicina, diluído na água utilizada no umedecimento do substrato, na dose de 0,03%.
A emissão de raízes secundárias constitui-se num importante parâmetro a ser considerado para diferenciar cultivares GM das não GM.

5. REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS

[1] BEVILAQUA, G. A.; BONATO, E. R.; ROMAN, E. S. Identificação de soja tolerante a glyphosate através do teste de germinação. Revista Brasileira de Herbicidas. Brasília, v.1, n. 3, p. 261-265, 2000.
[2] BRASIL.  Medida Provisória n 131, de 25 de setembro de 2003. Estabelece normas para o plantio e comercialização da produção de soja da safra de 2004, e dá outras providências. Diário Oficial [da ] República Federativa  do Brasil, Imprensa Nacional. Disponível  em: <http://www.agricultura.gov.br/legislacao/leis.htm>. Acesso em: 26 set. 2003.
[3] BRASIL. Ministério da Agricultura e Reforma Agrária. Regras para Análise de Sementes. Brasília: MA/DNPV/CLAV, 1992, 365p.
[4] BRASIL. Ministerio da Agricultura e do Abastecimento. SNPC – Lista de cultivares protegidas. Disponível em: <http://www.agricultura.gov.br/snpc/lst1200.htm>. Acesso em: 08 set. 2003.
[5] FUNGUETTO, C. I. Detecção de sementes de soja geneticamente modificada tolerante ao herbicida glifosato. Revista Brasileira de Sementes, v. 26, n. 1, p.130-138, 2004. 
[6] GOGGI, A. S. & Stahr, m. g. Roundup Pre-emergence treatment to determine the presence of the Roundup Ready gene soybean seed: a laboratory test. Seed Technology, v. 19, n. 1, p. 99-102, 1997.
[7] INSTITUTO BRASILEIRO DE GEOGRAFIA E ESTATÍSTICA. Levantamento Sistemático da Produção Agrícola. Disponível em: <http://www.ibge.gov.br/home/estatistica/indicadores/agropecuaria/lspa04200304.shtm>. Acesso em: 14 jun. 2003.
[8] KAHLERT, B. & KRUZE, M. ISTA Proficiency test. On GMO testing of Zea mays L. ISTA News Bulletin. n. 125, april, p. 10, 2003.
[9] MACHADO, A. A.; CONCEIÇÃO, A. R. Sistema de Análise estatística para Windows. WinStat. Versão 2.0. UFPel. 2003.
[10] TILLMANN, M. A. A.; WEST, S. H. Identification of genetically modified soybean (Glycine max L. Merr.) seeds resistant to glyphosate. Scientia agrícola, Piracicaba, v. 61, n. 3, 2004.